应用荧光RT-PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒

在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是最近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.     

荧光RT—PCR检测活禽和禽组织中禽流感病毒的研究

本研究根据A型流感病毒的核酸保守区共有序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的通用型"一步法"检测活禽或禽产品中所有A型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测技术.该方法敏感性高、特异性强,与国际标准方法--世界动物卫生组织(OIE)确定的鸡胚病毒分离相比,敏感性基本一致,可直接用来检测咽喉/泄殖腔拭子和禽肉中的禽流感病毒,将检测时间从原来最短所需要的21d缩短为4h.     

量子点荧光标记技术在生物检测领域的应用

量子点在生命科学的应用已成为人们研究的热点,量子点荧光探针是近几年发展起来的一种新型荧光标记物.该文主要就量子点的荧光性能,基于量子点标记的生物荧光探针的制备及其在生物医学领域中的应用研究进展作一概述及展望.     

钨酸钙和钨酸钙共沉淀材料的制备及发光性质

利用共沉淀技术制备钨酸钙与钨酸铽的共沉淀物，利用红外和荧光光谱测定其结构机理。这里的共沉淀指的是在制备钨酸钙沉淀的实验条件成熟以后，在制备钨酸钙的同时将Tb3＋搀杂进沉淀进去，让钨酸钙与钨酸铽同时沉淀出来，并且形成一种渗透。制备出钨酸钙与钨酸铽的共沉淀以后进行荧光测定和红外测定。结果显示实验过程中利用的有机活性剂不再存在，不影响制备的物质结构。在搀杂进铽以后共沉淀具备荧光特性，并且在紫外灯的照耀下显现轻微的绿色荧光。     

有机硅玻璃荧光涂料

以有机硅树脂和聚乙烯醇缩丁醛为基料，氧化铕，氧化钇等稀土化合物和有机配体组成荧光颜料的有机硅玻璃荧光涂料，在紫外光照射下能显现亮绿色，有一定的防伪功效。     

荧光RT-PCR快速检测技术检测鸭场环境中禽流感病毒

本研究应用荧光RT-PCR方法和鸡胚病毒分离方法,对两个禽流感发病后康复鸭场和一个健康鸭场采集的环境样品、部分健康和死鸭的拭子脏器进行检测,结果显示荧光RT-PCR方法同病毒分离方法的符合情况较好,阴性符合率为100%,病毒分离检出阳性样品经荧光RT-PCR检测全部为阳性.表明该方法在检测禽流感病毒的环境释放方面有重要应用价值,能够检出环境样品中的禽流感病毒.但其中的8份样品荧光RT-PCR显示为弱阳性或可疑,鸡胚分离的结果为阴性.推测这些样品中的病毒虽被灭活,但核酸并没有完全降解.     

应用荧光RT—PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒

在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是最近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.     

马兜铃酸A的荧光光谱及荧光量子产率

该文报道了马兜铃酸A（AAA）的荧光光谱和荧光量子产率。在pH 2.5～9.6之间，AAA有较稳定的荧光，荧光较强。最大发射波长为 390 nm , 激发波长为323nm。以L-色氨酸为参比 , pH=6时测量了AAA在不同波长下的荧光量子产率 , 在最大激发波长 323 nm处的荧光量子产率为 0.00146。     

拉曼光谱测量生物组织的激发特性研究

为探讨生物组织拉曼光谱荧光信号背景与激发光波长的关系，用两种波长的激光作为激发光，对5个人活捡组织样品分别进行了测试，从实验角度进行了探讨，结果表明生物组织拄曼光谱的荧光背景能够通过增加波长来进行有效的削减，总而有利于获得质量较高的组织拉曼信号。     

荧光PCR同时检测转基因成分35S和NOS

根据转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)基因序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针,建立一种应用荧光双链探针的实时PCR定量检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法.并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S和NOS基因成分,其余6份样品结果为阴性.结果表明本文建立的荧光PCR方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值.     

可发黄橙光的聚丙烯荧光复合材料制备方法

一种可发黄橙光的聚丙烯荧光复合材料制备方法，先将无机纳米材料与分散剂、相容剂及少量聚丙烯制成发光母料，再将母料与聚丙烯复合，使热塑性聚丙烯具有荧光性能，并通过选用无机硫化锌纳米材料来控制聚丙烯的发光波长，使丙烯在紫外光的照射下发出黄澄光，使聚丙烯功能化。本发明工艺简单，制得的聚丙烯无机纳米荧光复合材料，可作为聚合物荧光材料或荧光标识材料使用，并可采用塑料加工工艺成膜或制成制品，不需使用溶剂，对环境污染小，有着良好的应用前景。     

荧光RT—PCR检测中强毒力新城疫病毒方法的敏感性和特异性

用建立的荧光RT-PCR检测中强毒力新城疫病毒方法检测10株不同稀释度的中强毒力新城疫病毒株感染尿囊液,并同时与鸡胚病毒分离比较表明,荧光RT-PCR检测鸡胚感染尿囊液的最高稀释度为10-7,最低为10-5,略低于鸡胚病毒分离.对23株不同毒力的新城疫病毒用荧光RT-PCR进行了测定看出,本课题建立的荧光RT-PCR可以区分中强毒力新城疫病毒和疫苗弱毒.用建立的荧光RT-PCR检测中强毒力新城疫病毒株方法检测常见的禽类病毒,未发现交叉反应.     

进口铁矿中锰含量测定方法的改进

采用增人加样法制备高锰铁矿系列标样,并用X-荧光光谱补偿法测定进口高锰铁矿中锰含量,从而使铁矿石-X荧光光谱法-锰含量测定的应用范围得以拓展.     

荧光RT—PCR检测NDV人工感染肉鸡组织脏器的应用研究

用6株新城疫病毒分离株人工感染28日龄肉鸡,感染后3天采集咽喉拭子和泄殖腔拭子,对死亡鸡进行病理剖检,取心、肝、脾、肺、肾、小肠、腿肌、胸肌等,制备组织脏器悬液,作倍比稀释,用建立的荧光RT-PCR方法检测并同鸡胚分离比较.试验表明,荧光RT-PCR检测组织脏器和拭子的敏感性同鸡胚分离的敏感性基本一致,荧光RT-PCR检测脏器的最低检测量为5X10-5,肌肉的最低检测量为5X10-3,拭子的最低检测量为10-3.用不同的样品处理方法处理样品做荧光RT-PCR表明,裂解液处理样品方法优越,可提高检测灵敏度.     

反相微乳液法制备EDTA-Tb掺杂SiO2粒子及其荧光特性

用反相微乳法制备了EDTA-Tb掺杂的SiO2荧光粒子.XRD、IR分析表明所得粒子为非晶态,EDTA中的羰基以双齿配位的形式与Tb3+配位,荧光粒子中存在Si-OH缺陷.荧光光谱分析表明,在277-396nm之间有一宽而强的Tb3+离子的激发谱带,240nm处的最强激发峰是由配体EDTA吸收能量,并将能量传递给Tb3+使之发出特征荧光所引起,在240nm光激发下,发射波长位于486nm(5D4-7F6)、544nm(5D4-7F5)、582nm(5D4-7F4)、620nm(5D4-7F3),掺杂的EDTA-Tb与SiO2摩尔比在1:120～1:15之间时,随着EDTA-Tb的掺杂量的增加SiO2粒子在发射波长为486nm、544nm、582nm、620nm时的最大发射光强度均呈指数增长.     

空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR检测技术研究

空肠弯曲菌是世界卫生组织列为最常见食源性传染病菌之一的人兽共患病原菌,传统的分离鉴定方法需要耗费大量工时,并存在敏感性低、难以检出非可培养状态细菌和易出现假阴性结果等问题.本研究首创了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR快速检测方法,无需增菌培养即可直接捕获检样中的弯曲菌,利用实时荧光PCR进行鉴定,可在24h内完成检测,检测低限达到10cfu/mL,提高了非可培养状态空肠弯曲菌的检出率.     

两种锥虫双重实时荧光PCR检测方法的建立

通过比较美洲锥虫和非洲锥虫基因组的保守性与特异性,设计2套锥虫特异性引物和探针用于核酸检测,美洲锥虫和非洲锥虫分别使用HEX和FAM荧光基团标记探针,建立美洲锥虫和非洲锥虫的双重实时荧光PCR检测方法,并对建立的方法进行灵敏度、特异性和重复性分析.结果显示,新建立的双重实时荧光PCR检测方法只对2种锥虫阳性对照模板有特...     

聚(N-异丙基丙烯酰胺)-Eu(Ⅲ)-噻吩甲酰三氟丙酮三元配合物的光谱性质研究

本文介绍合成聚(N-异丙基丙烯酰胺)-铕-噻吩甲酰三氟丙酮(PNIPAM-Eu(Ⅲ)-TTA)三元配合物,并用紫外光谱、红外光谱、荧光光谱进行了初步表征.结果表明Eu(Ⅲ)与PNIPAM侧链中氮原子或氧原子配位,PNIPAM-Eu(Ⅲ)-TTA体系为三元配合物.PNIPAM-Eu(Ⅲ)-TTA三元配合物的614 nm波长荧光强度比PNIPAM-Eu(Ⅲ)-及Eu(Ⅲ)-TTA二元配合物分别增强了21 000%和190%,在能量传递中,高分子以FOrster能量传递方式将紫外激发能传递给TTA,再经TTA传递给Eu(Ⅲ),而获得增强的Eu(Ⅲ)的特征发射.     

BSA-Au NCs体系在氯霉素检测中的应用研究

探讨了用BSA-Au NCs荧光体系,并用该体系建立测定氯霉素(chloramphenicol,CAP)的新方法。实验表明,BSA-Au NCs荧光体系在pH=7.6的PBS缓冲溶液中可以发出较强的荧光,而加入CAP后,BSA-Au NCs体系的荧光发生猝灭。且CAP浓度在4.0×10-9~4.4×10-8 mol/L范围内与BSA-Au NCs体系荧光猝灭的程度呈良好的线性关系,相关系数r=0.9972,检出限为1.2×10-9 mol/L(n=11),以此建立利用荧光猝灭法测定CAP的新方法。实验考察了常见离子等对该体系的影响,结果表明这些离子对实验的干扰有限,不会对实验产生影响。新方法应用于牛奶中CAP的检测,其相对标准偏差(RSD)≤1.88(n=6),回收率为98.8%~101.75%。     

TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品.通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法.该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性.