猪流行性腹泻病毒套式RT—PCR检测方法的建立及初步应用

[目的] 建立PEDV的新型套式RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段.[方法] 根据Genbank已发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的基因序列,设计合成两对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测PEDV的新型套式RT-PCR方法,并用该方法对PEDV进行了快速诊断和分析.[结果] 外引物扩增目的片段长度为1328bp,内引物扩增目的片段为540bp.[结论] 该套式RT-PCR方法比普通RT-PCR更加灵敏、可靠,可用于PEDV的快速诊断和流行病学调查.     

TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究

本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品.通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法.该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性.     

对A72与PK15进行猪传染性胃肠炎血清中和试验的对比观察

[目的] 建立以狗直肠瘤(A72 细胞)进行TGEV血清中和试验的方法.[方法] 引进A72细胞系,建立成熟培养环境;以库存94份猪血清观察TGEV在A72与PK15中的增殖与病变,并采用ELISA试验进行验证.[结果] 以A72细胞培养增殖的TGEV毒价高于以PK15细胞培养增殖的TGEV毒价.在血清中和试验中A72病变明显,易于观察,较PK15细胞的人为误差小.[结论] A72细胞可以准确清晰地反应TGEV感染,其敏感性和准确性优于PK15细胞.     

PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因

[目的] 建立锦鲤疱疹病毒的PCR检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序.[方法] 分别利用蛋白酶K-酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA,并设计两对特异性引物进行PCR检测.[结果] 异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K-酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段.同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物.[结论] 本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的PCR检测方法.     

多重PCR检测食品中转基因成分研究

[目的]建立检测转基因食品的多重PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测体系.[方法]针对转基因大豆、玉米、油菜的多个相对稳定的转基因元件,包括35S、NOS、EPSPS、Cry1A、NPTⅡ等基因,同时选定植物本身固有的大豆Lectin、玉米IVR、油菜Napin基因作为内源参照指示基因,设计、筛选出9对引物分别组成多重PCR,结合高灵敏度的聚丙烯酰胺凝胶电泳组成快速检测体系,对转基因食品进行检测,1～2天能完成整个检测过程.对珠海地区市售的大豆、玉米、油菜及其加工产品共185个样品中的转基因成分进行了初步调查.[结果]建立的多重PCR检测体系稳定可靠、特异性好,灵敏度高.调查的185份可疑食品样品中,转基因阳性率达27.6%.[结论]该检测体系快速可靠、灵敏准确、特异性好,且操作简便、成本低廉,是一种进行转基因食品检测的良好的技术模式.对珠海地区的转基因食品状况有了一定了解.     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

东莞出入境人员疟疾流行病学调查

[目的]了解东莞口岸出入境人员疟疾的流行情况和分布特点,以便制定相应的预防和控制措施.[方法]采用血清学抗体检测法对东莞口岸出入境人员进行疟疾抗体检测.[结果]从被调查的4870名出入境人员中检出疟疾抗体阳性5名,阳性率为1.027%o.[结论]东莞口岸依然存在疟疾传入和再度流行的危险,对东莞出入境人群仍需加强疟疾防制工作.     

出入境人群艾滋病病毒env基因部分序列特征和亚型研究

[目的] 对出入境人员中的HIV感染者进行病毒基因型测定,监测国内外流行的HIV毒株的状况及其变化.[方法] 用RT-PCR或直接巢式PCR方法扩增HIV env基因C2-V3区及其邻近的基因片段,然后直接进行核苷酸序列测定,与国际标准亚型序列比较确定基因型并进行系统进化分析.[结果] 2003年确认的19例HIV阳性样品中有15例扩增出目的基因片段并进行了序列测定, 确定为B亚型4例、B'亚型2例、D亚型2例、CRF01-AE重组亚型1例、CRF02-AG重组亚型6例.这些不同亚型的HIV-1感染者来自包括中国在内的6个国家.HIV-1基因型的分布与我国国内有很大不同.[结论] 出入境人群中HIV-1基因种类多且复杂,监测出入境人群HIV基因型及其变化对于发现和鉴定新型变异毒株十分重要.     

食品中单增李斯特菌快速、敏感、特异PCR检测方法的建立

[目的]建立食品中单增李斯特菌的PCR检测方法.[方法]根据单增李斯特菌的hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因各设计了一对引物,两对引物组合建立PCR方法,用人工污染食品对该方法进行验证,于37℃经24h预增菌和24h增菌后直接进行PCR分析.[结果]在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中单增李斯特菌的检出限为1cfu/25g(mL),在原奶和生肉中的检出限分别为1～10 cfu/25mL和25 cfu/25g.[结论]该方法快速、敏感、特异,适合不同类型食品的常规检测分析,可用于食品工业中单增李斯特菌的检测.     

2004年度首都机场口岸饮食服务行业从业人员病毒性肝炎检测结果分析

[目的] 有效控制、预防病毒性肝炎,做好口岸地区从业人员健康状况的科学管理工作、为进一步强化口岸卫生监督提供科学依据.[方法] 对所有从业人员均采用酶联免疫吸附试验检测HBsAg、Anti-HCV和谷丙转氨酶,并对其结果进行统计分析.[结果] 在4837名饮食服务行业从业人员健康检查中,共检出HBsAg阳性69人,阳性率为1.43 % ,其中男性39人,女性30人.检出丙型肝炎HCV阳性3例;另检出转氨酶异常者82人,占检查总人数的1.70%,男性占异常人数为76.83 %.[结论] 对饮食服务从业人员进行健康检查,加大对口岸地区传染病的流行病学调查的力度,对构筑好口岸的安全卫生屏障具有重要意义.