口蹄疫病毒3AB克隆表达及其抗体间接ELISA检测方法建立与应用研究

采用重叠PCR方法人工合成3AB基因片段,将其克隆到PET-28a＋载体,转化导入宿主菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小约为33Ku的重组表达蛋白。以纯化的重组表达蛋白为抗原,建立了检测猪FMDV3ABNSP抗体的间接ELISA方法。将本方法与进口口蹄疫非结构蛋白3ABC阻断ELISA试剂盒进行比较,结果显示,本方法可以用于区分猪口蹄疫自然感染动物与疫苗免疫动物。     

牛朊病毒正常蛋白特异性片段的克隆表达和纯化

[目的] 表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段.[方法] 用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达产物(包涵体)用8mol/L尿素溶解,在变性条件下用Cu2+氧化复性纯化.[结果] 重组表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,目的蛋白分子量约为15KD,Western blotting分析表明,目的蛋白具有朊病毒蛋白的抗原特性,变性条件下用Cu2+氧化复性纯化得到电泳纯的重组蛋白.[结论] 这一工作为下一步制备抗体和进行结构、功能的研究打下扎实基础.     

试论猪牛口蹄疫的防治工作

口蹄疫作为猪、牛等主要家畜共患的一种急性接触传染病,其具有传染性强、传播途径广、传递速递快等诸多特点.而正是因为口蹄疫的特性,以至于口蹄疫曾多次在世界范围内发生大规模的流行,造成了巨大的经济损失.因此,做好猪、牛等家畜的口蹄疫防治工作,早已成为养殖企业维持生存的根本,可持续发展的前提.本文从猪、牛口蹄疫的流行病学入手,对其临床症状、诊断方法进行粗浅的探讨,并提出加强预防工作的相应建议与治疗措施,以期为加强口蹄疫的防治工作做出有益贡献     

中国拒绝口蹄疫

疫情如火 2月21日,英国正式确认发现口蹄疫病例、此后,由英国爆发的动物口蹄疫疫情一发而不可收拾.到记者发稿时止,英国牲畜口蹄疫病例已达1005例.     

鹅细小病毒延边株VP3基因原核表达质粒构建

本试验根据GenBank已公布的鹅细小病毒B株基因序列,设计了一对扩增VP3基因的特异性引物,对鹅细小病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了约为1500bp的VP3基因片段,将其回收纯化后与pMD-18T simple载体连接,然后进行克隆,经双酶切分析、PCR鉴定及测序,验证了所克隆的基因是鹅细小病毒VP3基因.用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-1原核表达载体中,获得重组质粒PGEM-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析,证实了重组质拉的正确性.     

奶牛口蹄疫的流行特点和防控要点

一、流行特点 病畜和带病毒畜是口蹄疫（FMD）主要传染源,染疫动物是最危险的传染源,能长期带毒和排毒,被口蹄疫病毒（FMDV）感染过的动物可能会成为不表现临床症状、持续感染的带毒者。     

PRRSV SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM（de-letingM）,克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组M蛋白。以纯化的重组M蛋白作为抗原,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立ELISA最佳工作条件。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验验证,结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。     

西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究

[目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i＋亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果]（1）重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。（2）Western blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。（3）兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1：50000以上。（4）检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。     

口蹄疫:一种人兽共患的急性传染病

口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性的传染病。口蹄疫主要侵害偶蹄动物,偶见于人和其他动物,易感动物达70多种。世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类传染病之首,我国将其列入一类动物疫病。口蹄疫的特点牛尤其是犊牛对口蹄疫病毒最易感,骆驼、绵羊、山羊次之,猪也可感染发病。该病具有流行快、传播广、发病急、危害大等流行病学特点,疫区发病率可达50%~100%.