食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法所用引物的特异性比较

[目的]对食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法目前常用的引物进行特异性比较.[方法]用36株单增李斯特氏菌、非单增李斯特氏菌以及其他菌属的细菌,将我室的2对引物与其他作者设计的5对引物进行特异性比较.[结果]我室采用的引物FM1/FM2只对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段,引物LI1/U1只对所有李斯特氏菌属的细菌扩增出特异性片段.其他引物除了对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段外,对其他细菌也会扩增出与特异性片段大小一致的片段.[结论]单增李斯特氏菌的特异引物FM1/FM2与李斯特氏菌属的特异引物U1/LI1组合应用,可以成为检测单增李斯特氏菌的最佳方法.     

杂交水稻冈优527品种真实性和纯度的STR检测方法

本实验从51对水稻微卫星引物中筛选出一对引物RM341,经过PCR扩增和2.0%琼脂糖凝胶电泳可以有效地将冈优527从24个杂交稻品种中区分出来.对4种常规稻的RM341位点进行PCR扩增,发现常规水稻的扩增产物为一条带,而所有24种杂交稻的扩增产物都是两条带.掺杂实验证明,该位点可被用于冈优527的品种真实性和纯度检测.本实验还采用ABI 310型DNA分析仪和荧光标记的引物来扩增STR位点,毛细管电泳分离产物并用相应分析软件进行分析.结果表明,将荧光系统用于杂交水稻品种真实性的STR检测比常规STR检测具有更高的灵敏度和可靠性,并且有利于高通量、自动化的操作.     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT—PCR鉴别诊断方法

本研究通过对不同毒力的新城疫病毒(NDV)的融合蛋白基因(F基因)核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计出3对引物P1+P2,P1+P3,P1+P4,建立了一种可以迅速鉴定新城疫病毒并且同时鉴别毒株毒力强弱的RT-PCR方法.引物P1+P2能特异性地对所有新城疫病毒可扩增出一条362bp的片段,引物P1+P3能特异性地针对所有新城疫强毒株扩增出一条254bp的片段,引物P1+P4能特异性地针对所有新城疫弱毒株扩增出一条254bp的片段,整个试验过程可在6小时内完成.对实验室分离的4株病毒进行检测,结果同常规检测方法的结果一致.     

巢式-多重RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系的方法

马铃薯Y病毒脉坏死株系（Potato virus Yvein necrosis strain,PVY^n）是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本研究根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶（RNA dependentRNA polymerase,RDRP）基因序列保守区域,设计合成了两对巢式PCR引物和一条TaqMAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Real-time PCR检测PVY^n的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术。实验结果表明,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Real time PCR等方法高。该方法检测灵敏度可达3 fg/μL植物总RNA。利用四对引物和一条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,检测的准确性比其它方法高。     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

巢式-多重RT-Realtime PCR检测马铃薯黑环斑病毒的研究

马铃薯黑环斑病毒（Potato black ringspot virus,PBRSV）是马铃薯重要病毒病害之一。本研究根据PBRSV基因组中RNA依赖的RNA聚合酶（RDRP）保守序列,设计合成了两对巢式PCR引物和1条Taq-MAN荧光探针,建立了巢式-多重RT-Realtime PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用E.Z.N.ATM试剂盒快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR、多重PCR和探针检测技术。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达450fg/μL植物总RNA。利用4对引物和1条TaqMAN探针对PCR阳性产物进行确认,本方法检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高。     

应用RT—PCR检测灭活疫苗中口蹄疫病毒（核酸）

应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测口蹄疫灭活疫苗中的病毒RNA.设计相应于病毒基因组VP1序列保守区段20mer长度的引物.分离出灭活疫苗水相,萃取总RNA,反转录合成cDNA,进行PCR扩增和电泳检测扩增产物,本引物对扩增片段长度483bp,并设计一个Marker作为对照.     

粮食种类多! 粗粮细粮有哪些不同?

<正>一、什么叫作粗粮?就是没有经过精磨的粮食。1.谷物类:玉米、小米、红米、黑米、紫米、高粱、大麦、燕麦、荞麦等。2.杂豆类:黄豆、绿豆、红豆、黑豆、青豆、芸豆、蚕豆、豌豆等。3.块茎类:红薯、山药、土豆等。由于加工简单,粗粮的口感有些粗糙,但也正因为如此,粗粮中保存了许多细粮中没有或者含量较少的精品成分。粗粮含有丰富的不可溶性纤维素,有利于保障消化系统正常运转。它与可溶性纤维素协同工作,可降低血液中低密度胆固醇和三酰甘油的浓度。延长食物在胃里面的停留时间,延迟饭     

对农机服务收费的调研

我们对全省19个市（州）的39个县、468户种粮农户2009年4月至2010年3月的存粮情况进行了调查。涉及调查人数1872人，耕地面积2747．16亩，上年粮食播种面积2709．72亩，本年粮食播种面积2686．32亩。调查品种包括谷物（中籼稻、粳稻、小麦、玉米、其他谷物），豆类（绿豆、大豆），薯类（马铃薯、红薯）等三大类9个品种。我省农户存粮情况如下。     

以oprI为靶基因实时荧光PCR法检测化妆品中绿脓杆菌

建立快速检测化妆品中绿脓杆菌的实时荧光PcR方法。选取绿脓杆菌oprI基因中相对保守且高度特异的核苷酸片段作为荧光PCR扩增的靶序列,设计引物和TaqMan探针,并研究了DNA提取方法,优化扩增反应体系和仪器条件。与GB方法进行比对,检测结果一致,但检测时间均只有GB方法的1／10;方法的检测灵敏度为2cFu／荧光PcR反应体系,染菌样品经6h增菌培养后,检测低限均达到2cFu／g,证明该方法高度敏感;通过对36株标准／参考菌株和51株非目的菌的检测,证实该方法高度特异;批内cP值的变异系数小于2％,说明该方法具有良好的可重复性。     

荧光PCR同时检测转基因成分35S和NOS

根据转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)基因序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针,建立一种应用荧光双链探针的实时PCR定量检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法.并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S和NOS基因成分,其余6份样品结果为阴性.结果表明本文建立的荧光PCR方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值.     

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT-PCR方法.用8对引物对诺沃克病毒进行检测研究,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高.用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测,检测灵敏度均能达到102拷贝.将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA,并用引物GI-SKF/GI-SKR 和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增,检出GII型诺沃克病毒.     

肉骨粉中羊源性成分检测方法研究

发现行业标准SN1119-2002检测羊源性成分的引物与山羊线粒体基因完全匹配,而与绵羊线粒体基因有7个碱基不匹配,对该引物的特异性和灵敏度进行了分析,发现该引物检测绵羊成分的灵敏度较低.根据绵羊线粒体基因序列重新设计了引物OV1/OV2、OV3/OV4,并对其特异性和灵敏度进行了分析.用以上引物对进口肉骨粉进行了检测,从14批进口肉骨粉中检测出羊源性成分,美国检疫专家确认了中方的检测结果,这些肉骨粉已经或正在被退运出境.     

PCR方法检测志贺氏菌的研究

建立一种快速检测志贺氏菌PCR检测方法.根据志贺氏菌的侵袭性质粒抗原(ipaH)基因序列,设计引物,建立PCR检测方法.本方法特异性高,均能检测出志贺氏菌属的4个种,整个实验过程8～10h完成.建立的方法可用与实际检测中.     

红薯、马铃薯生理技术栽培

<正>红薯、马铃薯等根茎类作物在土壤含氮量和水分过多的情况下,容易出现“疯长”“徒长”的现象,使茎叶、枝蔓与果实争水、争肥、争光合产物,消耗大量养分,导致红薯、马铃薯结瓜晚,生长速度慢,产量不高甚至极低。这已成为国内红薯、马铃薯栽培的一项难题,目前尚未发现好的解决办法。     

牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]针对牛传染性鼻气管炎病毒建立快速、准确而敏感的分子生物学检测方法,为进出口牛及其遗传物质的IBR检疫把关提供新的技术手段.[方法]采用新型实时荧光PCR技术原理,自行设计荧光标记引物建立检测方法,对不同牛传染性鼻气管炎病毒样品进行敏感性、特异性等检测试验,并与常规PCR检测方法进行比较.[结果]该方法能特异检测I BR病毒,检测时间包括核酸样品制备仅需2h,敏感性比常规PCR检测方法提高达103-104.[结论]本方法适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定.     

猪圆环病毒多重PCR检测方法的建立

设计合成2对PCV型特异性引物,其中C1、C2扩增PCV1和PCV2共有的938bp特异性片段,C3、C4只扩增PCV2特异性的490bp片段.在对该多重PCR的反应条件进行优化后,建立了猪圆环病毒多重PCR诊断方法,既可对PCV进行定性检测,又可对PCV1和PCV2进行定型,便于口岸检疫和养殖场的临床诊断.     

LAMP技术及其在水生动物疫病诊断中的应用

环媒恒温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）是一种新颖的核酸扩增方法，其基本原理是采用4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在65℃左右对核酸进行扩增，短时间扩增效率可达到10^9～10^10个拷贝。LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点，目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测，预计在动植物疫病检疫，尤其是水生动物疫病诊断领域有广阔的应用前景。     

围绕链条延伸 小红薯创大业

<正>解决栽培难题红薯产量大增红薯产量高、易管理、用途广,有“铁杆庄稼”之美誉,且市场走俏。但由于,我国的土壤中氮元素含量严重偏高,加之每年的七、八月份高温多雨,所以红薯、马铃薯不同程度出现“疯长”“徒长”的现象,造成茎叶、枝蔓与根部争水、争肥,影响果实生长,导致红薯、马铃薯结瓜晚,空秧多,产量不高甚至极低。这已成为国内红薯、马铃薯栽培的一项难题。有什么办法可以解决这一难题呢?李应超发现,果农在果树栽培中采用“环剥”手段切断果树营养的下输通道,使更多的养分留在树冠上,从而促进花芽的分化、提高座果率最终起到增产的效果。这在国际上通称“生理技术栽培法”。能不能把生理技术栽培方法移植到红薯栽培呢?李应超邀请了高级农艺师、市农技推广中心主任郭彦辉助阵,共同做起了试验。