检测单增李斯特氏菌的几种选择性固体培养基的效果比较

[目的]选择更加适合单增李斯特氏菌检测的固体选择性培养基.[方法]参见ISO/TS11133-2中的培养基验证方法并有所改进,对国际上常用的3种选择性固体培养基进行比较选择.[结果]OXA和李斯特氏;显色培养基的增菌效果相近,且单增李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌在李斯特氏菌显色培养基上具有特征性菌落形态,易于与其他李斯特氏菌相区别.[结论]OXA和李斯特氏菌显色培养基效果较好,比较适合单增李斯特氏菌的检测,两种培养基联合使用可以提高单增李斯特氏菌的检出率.     

环己酮七叶苷-β－Ｄ葡萄糖苷的研制及效果评价

[目的]研制李斯特菌显色培养基.[方法]合成环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷(CHE-β-D-葡萄糖苷).通过22种菌对其检测效果进行验证.[结果]环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷与七叶苷具有相同的检出效能;但其显色效果优于七叶苷,在环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷琼脂培养基上,被分解的游离环己酮七叶苷不扩散,固定在细菌菌落上,形成黑色菌落,从而有利于准确地鉴别和计数.与此相反,七叶苷琼脂上的阳性菌落,其分解产生的黑色素向周围培养基扩散,难以分辨阳性和阴性菌落,影响鉴别和计数的准确性.[结论]与传统七叶苷显色培养基相比,环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷显色培养基对分离和鉴定细菌存在很大优越性.     

环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷的研制及效果评价

[目的]研制李斯特菌显色培养基.[方法]合成环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷(CHE-β-D-葡萄糖苷).通过22种菌对其检测效果进行验证.[结果]环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷与七叶苷具有相同的检出效能;但其显色效果优于七叶苷,在环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷琼脂培养基上,被分解的游离环己酮七叶苷不扩散,固定在细菌菌落上,形成黑色菌落,从而有利于准确地鉴别和计数.与此相反,七叶苷琼脂上的阳性菌落,其分解产生的黑色素向周围培养基扩散,难以分辨阳性和阴性菌落,影响鉴别和计数的准确性.[结论]与传统七叶苷显色培养基相比,环己酮七叶苷-β-D-葡萄糖苷显色培养基对分离和鉴定细菌存在很大优越性.     

水产品中创伤弧菌的选择性分离

[目的]对水产品中创伤弧菌的选择性分离及纯化培养技术进行研究.[方法]样品经高速匀浆处理后,在2%氯化钠蛋白胨水中增菌,39℃±1℃培养16～18 h;划线接种mCPC选择培养基,35℃±1℃培养16～18 h;挑取可疑菌落接种TSA纯化培养基35℃±1℃培养16～18 h;进行生化试验鉴定.[结果]应用39℃培养、mCPC选择分离能准确地检测和分离水产品中存在的创伤弧菌.     

几种液体培养基对奶粉中单增李斯特氏菌富集效果的比较

[目的]选择适合奶粉中单增李斯特氏菌富集的液体培养基.[方法]参考ISO/TS11133-2中的培养基验证方法并有所改进,对国际上常用的5种液体培养基进行比较选择.[结果]5种液体培养基对奶粉中单增李斯特菌的增菌效果差异不显著.[结论]5种液体培养基的增菌效果基本相同.但由于BLEB的增菌过程是先用无添加剂的肉汤预增菌后再加入添加剂,Fraser肉汤的增菌过程是用含有半量添加剂的肉汤预增菌后再转入含有全量添加剂的肉汤中,这两种方法有利于使损伤的细菌得以恢复活力.对奶粉中单增李斯特氏菌进行富集,如果采用一步增菌法建议使用BLEB,如果采用两步增菌法建议采用Fraser肉汤.     

荧光分析法快速检测水产品中副溶血性弧菌

[目的] 提出一种新颖、简便、快速检测水产品中副溶血性弧菌的方法.[方法] 本方法用阿拉伯糖-葡萄糖醛酸盐培养基(AG)在37℃下对副溶血性弧菌进行增菌,以苯甲基-L-精氨酸-7-氨甲基-香豆素(Bz-Arg-7AMC)作荧光底物,用荧光分析法检测该菌的胰蛋白酶样活性,通过判读胰蛋白酶样活性,确定水产品中是否污染有副溶血性弧菌.[结果] 该方法的灵敏度为20个/g,相关分析表明荧光分析法与5管MPN计数法呈正相关,相关系数为0.86.[结论] 用本方法只需8个小时就可完成水产品中的副溶血性弧菌的检验,操作简便,灵敏度较高,适于快速检测需要.     

30℃菌落计数国际标准的转化与实验研究

[目的]为出入境的食品和动物饲料提供标准化的一种微生物学检测中的菌落计数方法,为制订与国际标准的检测方法相一致的行业标准提供依据.[方法]等同采用最新的国际标准ISO 48332003,进行确认实验和重复性实验.[结果]对ISO 48332003国际标准中的设备、用具、培养基等进行比较和确认,实验结果符合要求.[结论]国际标准ISO 48332003转化为出入境检验检疫行业标准是可行的,也是需要和必要的.     

奶粉中单增李斯特氏菌热抵制特性的研究

[目的]对奶粉中单增李斯特氏菌的热抵制特性进行研究.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按107cfu/mL的浓度分别添加于提前预热的60℃的灭菌蒸馏水、复水的原料粉和复水的高糖高脂奶粉中,在此温度下分别作用5min和10min,通过菌落计数分析单增李斯特氏茵的热抵制特性.[结果]在灭菌蒸馏水中单增李斯特氏菌衰减得最快,在复水的原料奶粉中单增李斯特氏菌衰减得较慢,而在复水的高糖高脂奶粉中单增李斯特氏菌衰减得最幔.[结论]奶粉中的单增李斯特氏菌具有热抵制特性,而且高糖高脂成分可提高单增李斯特氏菌的热抵制能力.     

干奶粉中单增李斯特氏菌的生存评估

[目的]对不同水活度干奶粉中的单增李斯特氏菌在不同温度条件下的生存特性进行评估.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按103cfu/g的浓度添加于不同水活度的干奶粉样品中,在不同温度(冰箱温度4℃和室温25℃)下贮存,通过菌落计数来分析单增李斯特氏菌的生存特性.[结果]在低温条件下,单增李斯特氏菌可在较低水活度的干奶粉中长期保持生长活力,并且当水活度较高时,会有增长趋势.在较高的环境温度中,干奶粉中的单增李斯特氏菌的生长活力很快减退,细菌处于亚损伤状态,但在适宜的营养环境条件下,这种亚损伤状态可以得到修复.细菌仍然可以恢复活力.[结论]高温条件更易使干奶粉中单增李斯特氏菌生长活力减退,干奶粉中如果污染了单增李斯特氏菌.于室温(25℃)条件下贮存会抑制单增李斯特氏菌的生长.     

应用荧光PCR方法检测食品中的单核细胞增生李斯特氏菌

[目的]发展一种快速、敏感、特异的荧光PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌.[方法]针对单增李斯特氏菌溶血素基因(hly A),设计特异的引物和TaqMan探针,优化体系,建立荧光PCR检测方法,对该方法的特异性和敏感性进行评价,并且在对188个进出口食品样本的检测中与传统方法进行对比.[结果]经对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株检测,结果显示该方法具有良好的特异性.灵敏度检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h.在实际样本的检测中,检测结果与传统方法结果一致.[结论]该方法能快速、简便和准确地检出单核细胞增生李斯氏菌,具有良好的应用前景.