玉米干种子DNA快速提取技术研究

以玉米干种子为提取材料,采用磁性纳米微球作为吸附介质进行基因组DNA的提取,分别探讨不同裂解液、裂解温度、时间和磁珠用量对基因组DNA提取效率的影响。结果表明裂解液2%CTAB、裂解温度65℃、裂解时间10 min、磁珠用量15μL时基因组DNA提取浓度高、纯度好、适宜后续实验。     

铁皮石斛RAPD反应体系的优化

采用改良SDS法提取铁皮石斛基因组DNA,A260/A280为1.8-2.0之间,经琼脂糖凝胶电泳证实其完整性较好,无降解。以此DNA为模板考察了dNTPs、MgCl2、引物、模板浓度四种因素在单独及组合条件下对RAPD-PCR扩增结果的影响,结果表明在25μlPCR反应体系中四种因素的浓度分别为0.25mmol/L、1.50mmol/L、0.32μmol/L、0.40ng/μl时,所扩增出的指纹丰富,条带清晰且无拖尾现象。     

3种花卉基固组DNA的提取及转基因成分的PCR检测

采用CTAB微量法和试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA,试剂盒提取的效果较好.设计合成了3对引物,分别扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(NOS!)、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因.PCR检测结果表明,3种花卉中仅矮牵牛的一个样品为阳性,含有这3种转基因成分,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性.     

3种花卉基因组DNA的提取及转基因成分的PCR检测

采用CTAB微量法和试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊3种花卉的基因组DNA,试剂盒提取的效果较好.设计合成了3对引物,分别扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(NOS!)、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因.PCR检测结果表明,3种花卉中仅矮牵牛的一个样品为阳性,含有这3种转基因成分,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性.     

基于eDNA技术富集水体中急性肝胰腺坏死病副溶血性弧菌的初步研究

环境DNA(Environmental DNA,eDNA)的丰度往往较低,不容易被检测到。为加强养殖海水中急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,Vp_AHPND)的监测,对疫病进行早期预警,需要对大容量的水体进行富集。采用滤膜法浓缩水体,探究不同体积养殖海水、不同材质不同孔径的滤膜、不同核酸抽提试剂盒,对水体中Vp_AHPND富集效果的影响。结果表明,采集500 mL养殖海水,用0.45μm硝酸纤维素膜富集水体,经过天根海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取滤膜核酸,荧光定量PCR结果显示富集后的水体中Vp_AHPND的拷贝数放大了1000倍以上。同时,采用滤膜法对17批进口亲虾携带水和13批广东湛江凡纳滨对虾虾苗养殖海水进行eDNA检测,从虾苗场检出3批Vp_AHPND阳性,经富集后水体中eDNA检测结果与虾苗组织检测结果一致。因此,基于0.45μm硝酸纤维素膜的滤膜法可以...     

五种血清型柯萨奇病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

在柯萨奇病毒基因组VP1区设计引物和探针,分别建立了特异性检测5种血清型（A9、A16、B2、B3和B5型）柯萨奇病毒（Coxsackievirus）基于MGB探针的实时荧光RT-PCR方法。通过构建的分别适于5种血清型病毒检测的质粒标准分子对建立的检测体系进行了灵敏度分析,确定5种血清型柯萨奇病毒检测体系的检测下限均为2拷贝质粒标准分子DNA。     

应用DNA条码技术鉴定狗咬胶熏料植物种

[目的]利用DNA条码技术对狗咬胶专利产品熏料的植物物种进行了鉴定.[方法]采用CTAB法、CTAB-担体法和磁珠法从狗咬胶表面提取痕量的植物总DNA,对其中植物条码基因rpoB和rpoC1进行分析.[结果]疑似产品的植物熏料不是番薯,可能是旋花科的另一植物.建立了利用植物条码基因进行物种鉴定的实验体系.     

应用DNA条形码技术鉴定口岸截获的国内未见分布蚊种

[目的]利用DNA条形码技术对口岸截获的形态特征破坏严重的未知蚊类进行种类鉴定。[方法]提取从荷兰进口的废纸中截获的一头形态严重破坏的蚊类的基因组DNA。采用无脊椎动物线粒体细胞色素氧化酶I（COI）的通用引物LCO1490和HCO2198扩增目的片段。然后纯化、克隆测序、序列分析、与BOLD中的序列进行比对。[结果]该未知蚊类的DNA条形码序列与BOLD中环带林蚊（Sylvicola cinctus）的序列相似性超过99.8%;并与原产地专家交流确认截获的蚊种为环带林蚊。经科技查新,确认为首次截获的国内未见分布蚊种。[结论] DNA条形码能克服传统物种鉴定依靠完整的外部形态的局限,有效提高外来物种的种类鉴别能力,大大缩短检测周期,降低外来物种对我国生态和公共卫生安全的危害。     

基于深度学习的跑道前视红外图像轮廓线提取

针对前视红外图像中的机场跑道检测问题，提出了基于深度学习的端到端的实时检测算法。算法首先利用深度学习在物体特征表达上的优点，采用当前主流端到端的YOLO（You Only Look Once）V2检测算法提取候选目标，寻找跑道所在位置；然后在已经获取跑道所在边框的基础上，在神经网络最后一层采用多尺度线段检测器(Line Segment Detector，LSD)进行精确的线段检测；最后对所检测的线段进行融合，提取轮廓线。真实实验数据表明，该算法基本上能满足机场轮廓提取实时性好、提取精度高、抗干扰性强等要求。     

应用DNA条形码技术快速鉴定入境船舶上截获的昆虫蛹

[目的]利用DNA条形码技术快速准确鉴定从入境船舶上截获的未知双翅目昆虫蛹。[方法]将截获的5只蛹,1只蛹直接冷冻,4只孵化出成蝇;对蛹、蛹壳及孵化出的成蝇进行拍照留档。分别从蛹、蛹壳和孵化成蝇中提取基因组DNA;采用动物DNA条形码通用引物（LCO1490和HCO2198）扩增目的片段,并进行纯化、克隆测序和序列分析,与NCBI及BOLD中的序列进行比对,构建NJ树;对孵化成蝇进行形态鉴定。[结果]所检测的蛹、蛹壳以及孵化成蝇的DNA条形码序列与NCBI和BOLD中大头金蝇（Chrysomyia megacephala）的序列相似度达100%;孵化成蝇与大头金蝇的形态特征相符。[结论]根据测定结果,判定截获的未知双翅目昆虫蛹为大头金蝇的蛹;证明DNA条形码技术是一种鉴定未知昆虫蛹的有效手段。对于口岸截获的外来未知昆虫蛹、成虫残肢甚至蛹壳均可直接采用DNA条形码技术进行种类鉴定,大大缩短鉴定周期。     

一步法实时荧光RT-PCR在疟原虫检测中的应用

本研究探讨了用一步法实时荧光RT-PCR检测疟原虫核酸的可行性。分别用一步法实时荧光RT-PCR和实时荧光PCR两种扩增方法对不同稀释度的样本总RNA和基因组DNA进行检测,同时对20份疟原虫阳性血样进行检测。结果显示,一步法实时荧光RT-PCR可检测到的稀释度最高,比实时荧光PCR高1000倍。运用一步法实时荧光RT-PCR方法检测出20份全部阳性样本,检出率为100%;实时荧光PCR方法检测出18份阳性样本,检出率为90%。结果表明,一步法实时荧光RT-PCR方法用于疟原虫检测比实时荧光PCR方法更具有优势,敏感性更强,准确性更高。     

植物油DNA提取和基因检测的研究进展

为了对植物油的质量安全提供更好的保障,人们以分子生物学理论为基础,建立了有效的分析方法,发挥高灵敏度、操作简便、快速准确等优势,在植物油转基因成分、掺假检测中广泛应用。但是,植物油一般都进行了加工精制,DNA含量较少,完整度较低,因而在提取检测植物油基因的过程中难度较大。为此,对高质量DNA有效提取,是植物油基因检测的重点内容。基于此,对植物油DNA提取和基因检测开展了研究。     

Roundup Ready大豆中Lectin、CaMV 35S、NOS和CP4 EPSPS基因的提取与RT-PCR定性范围研究

[目的]研究Roundup Ready大豆的Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的RT-PCR定性范围。[方法]用CTAB法提取DNA,对Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的检测条件进行了优化,确定了被检测基因在相同RT-PCR条件下的定性范围。[结果]研究发现,不同被检测基因在相同RT-PCR条件下的浓度检出范围不同。Lectin为0.05～792mg/L,CaMV35S为0.25～792mg/L,NOS为0.25～396mg/L,CP4EPSPS为0.05～1980mg/L;共同的方法检出限LOD为5ng,体系浓度范围为0.25～396mg/L。[结论]确定了Roundup Ready大豆被检测基因的定性范围和检出限,可应用于大豆中相关基因的检测。     

一种合成3—或4—硝基邻苯二腈的方法

本发明提供了一种制备3－或4－硝基邻苯二腈的方法，其中在制备3－或4－硝基邻苯二甲酰亚胺时本发明采用溶剂法替代了现有技术的固相烘焙法，解决了现有技术存在的反应条件苛刻，产物后处理困难及最终产品纯度不高的问题；同时对3－或4－硝基邻苯二甲酰亚胺的酰胺化工艺进行改进，避免了使用大量易燃有机溶剂，解决了现有技术丰在操作危险及污染问题。     

转Bt基因作物恒温扩增快速检测技术

[目的]建立一种快速检测转Bt基因作物的方法。[方法]利用Bt的Cry1ab/ac基因序列设计特异性引物,建立LAMP检测方法以及优化反应体系,并进行LAMP的特异性和灵敏度试验。[结果]成功建立转Bt基因作物的LAMP检测方法,得到最优的反应体系。在特异性试验中,转Bt基因作物基因组DNA均呈阳性,而非转基因作物、转Bar基因作物、转CPTI基因作物、转EPSPS基因作物等均为阴性;在灵敏度试验中,转Bt基因作物的最低检测限为10个拷贝。[结论]LAMP方法具有很高的特异性和灵敏度,可用于转Bt基因作物的现场快速检测。     

基于固定翼飞机前视近红外图像的实时跑道检测

为实时、精确地提取固定翼飞机前视图像中的跑道区域，提出了一种惯性辅助的近红外图像跑道检测算法。首先利用惯性导航信息和跑道角点的大地坐标，生成虚拟跑道轮廓，并估计跑道感兴趣区域(Region of Interest,ROI)；然后对ROI区域进行细节增强，从中提取直线段；在虚拟跑道轮廓的辅助下拟合跑道边缘线，提取跑道特征。经真实数据验证，所提法可以从机载前视红外图像中实时、精确地检测出跑道特征，在33 frame/s的帧率下检测准确率达97%。     

以oprI为靶基因实时荧光PCR法检测化妆品中绿脓杆菌

建立快速检测化妆品中绿脓杆菌的实时荧光PcR方法。选取绿脓杆菌oprI基因中相对保守且高度特异的核苷酸片段作为荧光PCR扩增的靶序列,设计引物和TaqMan探针,并研究了DNA提取方法,优化扩增反应体系和仪器条件。与GB方法进行比对,检测结果一致,但检测时间均只有GB方法的1／10;方法的检测灵敏度为2cFu／荧光PcR反应体系,染菌样品经6h增菌培养后,检测低限均达到2cFu／g,证明该方法高度敏感;通过对36株标准／参考菌株和51株非目的菌的检测,证实该方法高度特异;批内cP值的变异系数小于2％,说明该方法具有良好的可重复性。     

菊花精油成分分析及抗氧化活性研究

本文采用水蒸气蒸馏法和超声波辅助法提取菊花精油,通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分,并对菊花精油体外抗氧化能力进行测定。菊花精油共检测出43种化合物,主要是烯类(6种)、醇类(2种)、酮类(4种)、芳香烃类化合物(6种)、酸类(4种)和酯类(2种)等;菊花精油对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟基自由基、3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸(ABTS)自由基具有一定的清除能力,且与精油质量浓度呈正相关,超声波辅助有机溶剂提取的精油对自由基的清除能力明显高于水蒸气蒸馏法。     

逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测石斑鱼神经坏死病毒方法的建立和应用

神经坏死病毒是导致石斑鱼等多种海水鱼类暴发性传染病的致病原.根据石斑鱼神经坏死病毒编码核衣壳蛋白的RNA2基因组序列设计的一对特异性引物,用来扩增其中的421bp病毒核酸片段.比较了酚-氯仿法、试剂盒法等3种RNA抽提的方法对神经坏死病毒的核酸抽提效果,结果表明3种方法均适合于RT-PCR方法.实验证明在cDNA过程中,RNA酶抑制剂并非反应所必需.对RT-PCR过程进行了条件优化,建立了一步法的RT-PCR检测方法,在网箱养殖石斑鱼以及育苗场的病鱼检测实践中获得满意效果.