弓形虫半巢式PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的弓形虫RH株的P30基因（X14080）设计了3条特异性引物P1、P2和P3,建立了半巢式PCR检测体系,并将P1和P3的扩增产物克隆到pUCm-T载体上进行测序。结果表明,该体系能够扩增出约250bp的片段,P1和P3能扩增出约500bp的片段,克隆到pUCm-T载体上的504bp片段与P30基因（X14080）的序列同源性为99.8%。该PCR检测体系的特异性强,不能在健康猪血液、猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒DNA上扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为18fg。     

快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]该试纸条可在15min之内完成检测;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒检测低1个滴度;对89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3份阳性,两种检测的符合率为86.52%,特异性为89.89%。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测西尼罗病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。     

弧菌显色培养基（ChromID Vibrio）对霍乱弧菌检测效果的探讨

[目的]探讨梅里埃弧菌显色培养基（简称ChromID Vibrio）对霍乱弧菌的检测效果。[方法]通过ChromID Vibrio弧菌显色培养基同硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（简称TCBS）琼脂培养基进行比对,采用阳性菌株直接平板计数、人工污染样品和实际样品检测的方法,对ChromID Vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了评价。[结果]ChromID Vibrio弧菌显色培养基上霍乱弧菌典型菌落是蓝绿色。阳性菌株直接平板计数及人工污染试验均表明ChromID Vibrio平板的敏感性均比TCBS平板高。对采集的300份实际样品进行检测,都未检出霍乱弧菌。[结论]ChromID Vibrio具有较好的灵敏性、特异性,能提高霍乱弧菌检测效率。     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试剂盒质量研究

选取3种市售同批次盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒(D、M、A),引入金标读数仪,对其最小检出浓度、灵敏度、特异性、检出限、阳性检出率、假阳性率和假阴性率等方面进行研究,比较3种市售盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒的质量。结果表明,D试剂盒中的检测卡在检测盐酸克伦特罗标准溶液时产品性能最优,M试剂盒的样品前处理方法和检测卡在猪肉基质中的综合使用效果最优。阴性猪肉加标样本的快速检测结果显示,试剂盒检测结果与金标读数仪器检测结果 100%符合,3种产品的最小检出浓度均小于产品说明书标注的检出限,且灵敏度100%,D、M特异性100%,D、M假阳性率0%,M阳性检出率100%,D、A阳性检出率均大于90%。综合分析,3种试剂盒的准确性、特异性等均较好,阳性检出率、假阴性率均在可接受范围内,其中,M试剂盒产品性能最优,可用于日常生猪屠宰点和农贸市场中猪肉盐酸克伦特罗的初筛。     

LAMP技术及其在水生动物疫病诊断中的应用

环媒恒温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）是一种新颖的核酸扩增方法，其基本原理是采用4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在65℃左右对核酸进行扩增，短时间扩增效率可达到10^9～10^10个拷贝。LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点，目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测，预计在动植物疫病检疫，尤其是水生动物疫病诊断领域有广阔的应用前景。     

结核菌快速检测方法用于口岸检疫的研究

[目的]评价两种结核菌快速检测方法在口岸卫生检疫中的应用价值。[方法]以＂中华人民共和国行业标准-肺结核诊断标准WS288-2008＂选取结核病人100例,有呼吸道症状的疑似病人50例,以罗氏L-J固体培养结果为标准,考核荧光实时定量PCR（RT-PCR）、分枝杆菌直接检测（MDT）在结核病诊断的敏感性、特异性。[结果]100例结核病人标本培养后均为阳性,50例可疑者标本培养后均为阴性;100例培养阳性的标本,荧光实时定量PCR检测出98例阳性,MDT检测出100例阳性;50例培养阴性标本,荧光实时定量PCR检测出1例阳性,MDT未检测阳性。RT-PCR的敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值为98.04%、98.04%、99.01%、96.15%;MTD检测敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值均为100%。[结论]与传统培养方法相比较,两种方法有着很高的敏感性和特异性,但检测时间大大缩短,适合应用于口岸卫生检疫中。     

猪细小病毒感染与疫苗免疫猪鉴别诊断的研究

采用大肠杆菌表达的猪细小病毒非结构NS1蛋白为抗原,建立了PPV-NS1-ELISA.通过检测91份健康猪血清确定其阴、阳性界限为0.23,以传统的HI作标准,该方法有高特异性(100%)、高敏感性(88%)、高精确度(90%).批内、批间重复试验的变异系数均低于10%.该方法只与PPV感染猪的血清反应,与PPV灭活苗免疫猪的血清不反应,与猪生殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)、弓形虫(Toxoplasma)、衣原体(Chlamydia)、胸膜肺炎(APP)阳性血清无交叉反应.证明PPV-NS1-ELISA检测方法能够区分PPV感染猪和灭活苗免疫猪.     

3种ELISA试剂盒对牛新孢子虫血清抗体比较检测

用瑞典Svanova公司、美国IDEXX公司和美国VMRD公司生产的3种检测新孢子虫血清抗体ELISA试剂盒对来自澳大利亚牛血清（41份）、新西兰牛血清（40份）、乌拉圭牛血清（30份）和中国新疆牛血清（46份）进行了同步检测和比较分析,并以其中2个试剂盒检测结果均为阳性或阴性的血清为真阳性或真阴性,对另1个试剂盒在诊断相对敏感性和相对特异性方面进行了比较评估。结果表明,3个试剂盒的诊断相对敏感性和诊断相对特异性分别为：85.7%和92.5%（Svanova）、95.8%和98%（IDEXX）、88.5%和98%（VMRD）。3个试剂盒都具有较好的重复性,检测低限相近。在对样品的检测中,IDEXX与VMRD两个试剂盒检测符合率较高,但对不同国家的样品检测符合率差别较大。     

用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌

[目的]采用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒.[方法]根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线.以副溶血弧菌菌株8株及同源及非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测.同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测.[结果]该方法有良好的特异性8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,其它15株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.9871.直接进行定量检测,则检测低限在102cfu/g;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfu/g.[结论]该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景.     

一步法实时荧光RT-PCR在疟原虫检测中的应用

本研究探讨了用一步法实时荧光RT-PCR检测疟原虫核酸的可行性。分别用一步法实时荧光RT-PCR和实时荧光PCR两种扩增方法对不同稀释度的样本总RNA和基因组DNA进行检测,同时对20份疟原虫阳性血样进行检测。结果显示,一步法实时荧光RT-PCR可检测到的稀释度最高,比实时荧光PCR高1000倍。运用一步法实时荧光RT-PCR方法检测出20份全部阳性样本,检出率为100%;实时荧光PCR方法检测出18份阳性样本,检出率为90%。结果表明,一步法实时荧光RT-PCR方法用于疟原虫检测比实时荧光PCR方法更具有优势,敏感性更强,准确性更高。     

鲤春病毒血症监测方法的应用研究

为提高鲤春病毒血症的监测效率,将细胞培养、酶联免疫吸附试验和PCR方法有机结合,先用细胞扩增病毒5d以提高后续检测的灵敏度,然后用酶联免疫吸附试验进行高通量初筛,最后对可疑阳性用PCR确认。虽然这样的联合检测方法比国标GB/T 15805.5-2008方法多了一个检测步骤,但是却能将检测时长缩短一半,提高了检测效率。经过在45个无临床症状样品上应用,结果显示,联合检测方法和国标方法的结果完全一致,且缩短了检测周期,提高了检测效率,能够发现样品早期感染状态,实现对鲤春病毒血症的高效监测。     

十二种食源性致病菌可见光基因芯片检测方法的建立

[目的]利用可见光基因芯片技术,针对12种常见食源性致病菌,建立快速、准确、高通量的诊断方法。[方法]设计靶细菌16S rDNA和23S rDNA的通用引物,反向引物5’端标记生物素;特异寡核苷酸探针设计在两对引物之间的可变区,5’端标记氨基基团。将探针点样于固相载体制备基因芯片,优化PCR反应体系后,PCR产物与芯片点制探针区域进行杂交,然后通过化学显色直接观察结果,并评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性等指标。收集临床样本28例,同时制备双盲模拟污染样本10例,对检测方法进一步评价。[结果]：本试验所建立的基因芯片方法可同时检测志贺菌、耶尔森氏菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单增李氏菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7等12种食源性致病菌,特异性高,操作简便;针对纯培养食源性致病菌反应体系的灵敏度为10^3cfu/mL,模拟样本的灵敏度为10^4cfu/mL;重复性好;采用可见光基因芯片方法检测28例临床样本,26例与常规培养方法结果完全一致,符合率达到92.9%;双盲模拟样本的检测符合率达到100%。     

SO_4~(2-)/TiO_2-SnO_2-Al_2O_3催化合成衣康酸二异辛酯的研究

研究了固体超强酸SO42-/TiO2-SnO2-Al2O3催化衣康酸与异辛醇合成衣康酸二异辛酯的酯化反应,甲苯作为带水剂,考察了催化剂种类,确定以SO24-/TiO2-SnO2-Al2O3为催化剂。随后考察反应物配比、催化剂用量、反应时间等因素对酯化反应的影响,确定了最佳工艺条件为n(衣康酸):n(异辛醇)=1:3,催化剂用量4.5%(质量分数),反应时间2h。在该条件下,衣康酸转化率达到98.9%,产物衣康酸二异辛酯的收率为96.2%。并对SO24-/TiO2-SnO2-Al2O3的重复使用性能进行考察,结果表明,与SO24-/TiO2相比,SO42-/TiO2-SnO2-Al2O3在重复使用5次后仍具有较高的催化活性,衣康酸转化率和衣康酸二异辛酯收率为分别为98.2%和95.7%,说明载体中添加Sn和Al对于增加固体超强酸的寿命起了主要作用。     

PMA—PCR技术在植物病原细菌检疫中的应用前景

介绍了PMA-PCR技术检测活菌的方法,列举了该方法在食品、医疗和环境微生物检测领域的应用研究情况,并讨论了PMA．PCR技术在植物病原细菌检疫工作中的应用前景。     

五种血清型柯萨奇病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

在柯萨奇病毒基因组VP1区设计引物和探针,分别建立了特异性检测5种血清型（A9、A16、B2、B3和B5型）柯萨奇病毒（Coxsackievirus）基于MGB探针的实时荧光RT-PCR方法。通过构建的分别适于5种血清型病毒检测的质粒标准分子对建立的检测体系进行了灵敏度分析,确定5种血清型柯萨奇病毒检测体系的检测下限均为2拷贝质粒标准分子DNA。     

口蹄疫病毒3AB克隆表达及其抗体间接ELISA检测方法建立与应用研究

采用重叠PCR方法人工合成3AB基因片段,将其克隆到PET-28a＋载体,转化导入宿主菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小约为33Ku的重组表达蛋白。以纯化的重组表达蛋白为抗原,建立了检测猪FMDV3ABNSP抗体的间接ELISA方法。将本方法与进口口蹄疫非结构蛋白3ABC阻断ELISA试剂盒进行比较,结果显示,本方法可以用于区分猪口蹄疫自然感染动物与疫苗免疫动物。     

利用制溴废液生产高纯活性氧化镁的工艺研究

在总结国内高纯活性氧化镁不同生产方法的基础上,研究了利用制溴废液先制得优质氯化镁（MgCl2·6H2O）,再进行煅烧制取高纯活性氧化镁的新工艺,其工艺过程包括蒸发、保温沉降、冷却结晶、一次煅烧、洗涤、二次煅烧等。制得的产品具有纯度高ω（MgO）≥99％,低硫ω（SO4^2-）≤0．1％、低氯ω（Cl^-）≤0．1％、高活性且工艺简单、生产成本低等特点,便于工业化生产。     

摄食转基因大豆罗非鱼各组织中转基因成份的检测研究

利用转基因豆粕制作的饲料,喂养吉富罗非鱼,分别于投喂1h、4h和8h以后取罗非鱼胃内容物、肠道内容物和粪便,并分别于4周、7周和继续饥饿2周后,取罗非鱼不同组织,提取DNA,检测转基因大豆中的外源基因在各种组织中的分布,结果显示在胃内容物、肠内容物、粪便、心脏、肝脏、肠、胃、卵巢、精巢、脑、鳃丝、脾脏、胆囊、肌肉等不同部位的DNA中都能检测到外源基因的存在,说明转基因大豆中的外源DNA并不能被罗非鱼的消化道完全降解,其DNA片段可能通过消化吸收进入鱼体的各种组织。     

一种基于VxWorks的高实时性软件架构设计

重点描述基于VxWorks操作系统的高实时性嵌入式应用的架构设计,以及用于TDMA领域的移动通信机软件的开发.使用这种设计手段可实现在多任务条件下嵌入式软件的高实时性与稳定性等性能,对实时性要求高的软件设计师会有一定的参考价值.     

液相色谱法同时测定防晒霜中16种紫外线吸收剂

建立了同时检测防晒霜中16种紫外线吸收剂含量的高效液相色谱分析方法。样品用甲醇、四氢呋喃、高纯水、高氯酸的混合溶液溶解后超声提取。采用新型ZORBAXSBC18（5tam,250μm×4．6mmi．d．）色谱柱,以甲醇、四氢呋喃、高氯酸水溶液（V／V／V）（pH2．6）梯度洗脱,检测波长311nm。结果显示在22min内16种紫外线吸收利完全分离,在10-4000μg／mL范围内呈线性关系,相关系数大于0．9990;方法定量限为0．02％-0．4％;在市售防晒霜中加标回收率为84．0％．113．9％,相对标准偏差为2．49％．5．75％。本方法简便准确,能够满足进出口检验的需要。