HCV结构蛋白重组杆状病毒表达载体的构建

丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的核心蛋白(C)和包膜蛋白2(E2)合有多个T细胞表位和中和抗体表位，可诱导机体产生保护性免疫应答。该实验用PCR扩增HCV结构区基因，克隆到载体pFastBacl中，构建了重组杆状病毒表达载体pFB1-CEE，为HCV结构基因在真核细胞中的表达奠定了工作基础。     

人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行鉴定。将p EGFPRAD9A转染至肾癌细胞786-0中,荧光显微镜观察GFP-RAD9A融合蛋白的表达及亚细胞定位,Western blot免疫印记法检测转染p EGFP-RAD9A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9A基因编码区的真核表达载体p EGFP-RAD9A。与对照组相比,转染p EGFP-RAD9A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达,为研究RAD9A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。     

人胶质瘤抑制候选基因2-GLTSCR2稳定表达HEK293细胞株的构建

为构建人GLTSCR2基因HEK293细胞稳定表达株,在HEK293细胞中获取c DNA,以c DNA为模板扩增GLTSCR2基因蛋白质编码区,经双酶切后连接入pBABE-GFP载体的多克隆位点,测序鉴定后将pBABE-GFP-GLTSCR2稳定转染至HEK293细胞,之后采用荧光显微镜观察与Western blot免疫印迹鉴定表达情况。结果为:扩增得到GLTSCR2基因蛋白质编码序列长度1 437 bp,与NCBI提供的序列信息100%匹配;GLTSCR2定位于HEK293的核仁;Western显示外源GLTSCR2正常表达。pBABE载体稳定表达体系可在HEK293中稳定表达flag-GFP-GLTSCR2,为后续的实验奠定了基础。