干奶粉中单增李斯特氏菌的生存评估

[目的]对不同水活度干奶粉中的单增李斯特氏菌在不同温度条件下的生存特性进行评估.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按103cfu/g的浓度添加于不同水活度的干奶粉样品中,在不同温度(冰箱温度4℃和室温25℃)下贮存,通过菌落计数来分析单增李斯特氏菌的生存特性.[结果]在低温条件下,单增李斯特氏菌可在较低水活度的干奶粉中长期保持生长活力,并且当水活度较高时,会有增长趋势.在较高的环境温度中,干奶粉中的单增李斯特氏菌的生长活力很快减退,细菌处于亚损伤状态,但在适宜的营养环境条件下,这种亚损伤状态可以得到修复.细菌仍然可以恢复活力.[结论]高温条件更易使干奶粉中单增李斯特氏菌生长活力减退,干奶粉中如果污染了单增李斯特氏菌.于室温(25℃)条件下贮存会抑制单增李斯特氏菌的生长.     

奶粉中单增李斯特氏菌热抵制特性的研究

[目的]对奶粉中单增李斯特氏菌的热抵制特性进行研究.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按107cfu/mL的浓度分别添加于提前预热的60℃的灭菌蒸馏水、复水的原料粉和复水的高糖高脂奶粉中,在此温度下分别作用5min和10min,通过菌落计数分析单增李斯特氏茵的热抵制特性.[结果]在灭菌蒸馏水中单增李斯特氏菌衰减得最快,在复水的原料奶粉中单增李斯特氏菌衰减得较慢,而在复水的高糖高脂奶粉中单增李斯特氏菌衰减得最幔.[结论]奶粉中的单增李斯特氏菌具有热抵制特性,而且高糖高脂成分可提高单增李斯特氏菌的热抵制能力.     

乳粉中单增李斯特氏菌的污染情况调查

为保证乳粉食品的安全,采用本室建立的奶粉中单增李斯特菌的传统检验方法.对国内外生产的82份不同品牌的奶粉进行了单增李斯特氏菌的调查研究.结果未检出单增李斯特氏菌.     

几种液体培养基对奶粉中单增李斯特氏菌富集效果的比较

[目的]选择适合奶粉中单增李斯特氏菌富集的液体培养基.[方法]参考ISO/TS11133-2中的培养基验证方法并有所改进,对国际上常用的5种液体培养基进行比较选择.[结果]5种液体培养基对奶粉中单增李斯特菌的增菌效果差异不显著.[结论]5种液体培养基的增菌效果基本相同.但由于BLEB的增菌过程是先用无添加剂的肉汤预增菌后再加入添加剂,Fraser肉汤的增菌过程是用含有半量添加剂的肉汤预增菌后再转入含有全量添加剂的肉汤中,这两种方法有利于使损伤的细菌得以恢复活力.对奶粉中单增李斯特氏菌进行富集,如果采用一步增菌法建议使用BLEB,如果采用两步增菌法建议采用Fraser肉汤.     

单增李斯特菌选择性增菌培养和分离方法的比较研究

首先对改良的FDA法、NGFIS法、SN法和国标法4种李斯特菌选择性增菌和分离方法进行比较,结果表明对于人工污染的样品(生猪肉、虾、牛奶),各种增菌方法的检测灵敏度都较高,均能检出样品中<10CFU/g的单增李斯特菌;但对于不同自然样品(生猪肉、调理食品、虾和牛奶)的李斯特菌检出,则以改良的FDA法最佳.本项目设计了英诺克李斯特菌和单增李斯特菌的竞争性试验,明确当样品中含有英诺克李斯特菌时,增菌时间应缩短.     

检测致病性李斯特氏菌的培养基

要检出单核增生李斯特氏菌,前增菌和分离是非常重要的步骤。本文概述了李斯特氏菌选择性增菌肉汤和选择性显色培养基的种类和设计原理,对它们的应用效果进行了讨论。     

食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法所用引物的特异性比较

[目的]对食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法目前常用的引物进行特异性比较.[方法]用36株单增李斯特氏菌、非单增李斯特氏菌以及其他菌属的细菌,将我室的2对引物与其他作者设计的5对引物进行特异性比较.[结果]我室采用的引物FM1/FM2只对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段,引物LI1/U1只对所有李斯特氏菌属的细菌扩增出特异性片段.其他引物除了对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段外,对其他细菌也会扩增出与特异性片段大小一致的片段.[结论]单增李斯特氏菌的特异引物FM1/FM2与李斯特氏菌属的特异引物U1/LI1组合应用,可以成为检测单增李斯特氏菌的最佳方法.     

利用IMS／PCR方法快速检测食品中单增李斯特菌

研究用免疫磁珠(1mmunomagnetic separation,IMS)和复合PCR(multiplex-PCR)联用方法,从样品中直接浓缩获取单增李斯特菌(Listeria monocytogenes).针对L.monocytogenes的Listeriolysin O基因和李斯特菌属的23S rRNA设计两对特异性引物,作为Polymerase Chain Reaction(PCR)的靶基因,经PCR反应分别得到700bp和240bp.用IMS/PCR方法和SN方法同时检测了样品162份,结果通过API方法确证,符合率达到100%.结果表明,本文建立的IMS/PCR方法较常规方法简便、快速、灵敏度高,灵敏度可达1.5CFU/mL,在24h可快速检出L.monocytogenes,有很好的应用前景和研究价值.     

单增李斯特菌及其表面蛋白的研究进展

单增李斯特菌是条件致病菌，由其引起的疾病称为李斯特菌病。单增李斯特菌的致病性由几个毒力因子所决定，这些毒力因子包括李斯特细胞溶菌酶O、蛋白ActA、磷酸脂酶C、内化素（InlA和InlB）、蛋白CwhA和金属蛋白酶。该菌能够侵染多种真核细胞并在其中复制、增殖，也能够穿越宿主的三个主要屏障——肠屏障、血脑屏障和胎盘屏障。与其他G^＋菌不同，单增李斯特菌的大量蛋白是共价结合到其胞壁质上的。实际上，由于单增李斯特菌存在大量表面蛋白，所以它能够在许多环境下复制增殖，并且能够侵染多种真核细胞。     

食品中单增李斯特菌快速、敏感、特异PCR检测方法的建立

[目的]建立食品中单增李斯特菌的PCR检测方法.[方法]根据单增李斯特菌的hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因各设计了一对引物,两对引物组合建立PCR方法,用人工污染食品对该方法进行验证,于37℃经24h预增菌和24h增菌后直接进行PCR分析.[结果]在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中单增李斯特菌的检出限为1cfu/25g(mL),在原奶和生肉中的检出限分别为1～10 cfu/25mL和25 cfu/25g.[结论]该方法快速、敏感、特异,适合不同类型食品的常规检测分析,可用于食品工业中单增李斯特菌的检测.