金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆、表达和纯化

通过PCR方法从金黄色葡萄球菌CowanⅠ菌株中克隆获得的A蛋白基因,与表达载体pET21a连接,将带有目的基因的质粒转化到表达宿主E.coli BL21(DE3)中并进行IPTG诱导表达,表达产物进行Q-sepharose纯化,初步获得了金黄色葡萄球菌A蛋白。     

人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行鉴定。将p EGFPRAD9A转染至肾癌细胞786-0中,荧光显微镜观察GFP-RAD9A融合蛋白的表达及亚细胞定位,Western blot免疫印记法检测转染p EGFP-RAD9A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9A基因编码区的真核表达载体p EGFP-RAD9A。与对照组相比,转染p EGFP-RAD9A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达,为研究RAD9A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。     

人胶质瘤抑制候选基因2-GLTSCR2稳定表达HEK293细胞株的构建

为构建人GLTSCR2基因HEK293细胞稳定表达株,在HEK293细胞中获取c DNA,以c DNA为模板扩增GLTSCR2基因蛋白质编码区,经双酶切后连接入pBABE-GFP载体的多克隆位点,测序鉴定后将pBABE-GFP-GLTSCR2稳定转染至HEK293细胞,之后采用荧光显微镜观察与Western blot免疫印迹鉴定表达情况。结果为:扩增得到GLTSCR2基因蛋白质编码序列长度1 437 bp,与NCBI提供的序列信息100%匹配;GLTSCR2定位于HEK293的核仁;Western显示外源GLTSCR2正常表达。pBABE载体稳定表达体系可在HEK293中稳定表达flag-GFP-GLTSCR2,为后续的实验奠定了基础。     

泛素化相关蛋白纯化及体外泛素化体系的建立

为构建泛素化相关蛋白的纯化方法以及利用纯化出的蛋白进行体外泛素化反应,采用分子克隆技术构建出p ET-N-His-UBE1、p ET-N-His-CDC34-C-His和p ET-N-His-UBB-CHis载体,其中p ET-N-His-UBE1载体来源于Addgene公司。将构建好的原核表达载体转化到BL21大肠杆菌中进行诱导表达,利用蛋白纯化技术纯化出相应的蛋白;将纯化出的泛素化相关的蛋白按照一定的比例混合,在ATP存在的条件下发生泛素化反应。成功建立了蛋白纯化和体外泛素化体系,即在细菌中纯化出E1、E2和泛素,在ATP存在的情况下使泛素结合到E2上。该体系的构建能为更好地探索细胞内蛋白的相互作用及人类疾病的治疗提供更多有价值的依据。     

AKT1S1-pBABE重组逆转录病毒载体的构建及其稳定过表达细胞系的筛选

AKT Substrate 1 (AKT1S1)又名富含脯氨酸AKT1底物蛋白(proline-rich AKT1 substrate of 40 kDa,PRAS40)。作为经典的AKT1激酶底物,其在肿瘤生成过程中发挥着重要功能。为研究AKT1S1具体的相互作用蛋白以及作用通路,通过逆转录的方法获得了来自293T细胞的cDNA库。通过基因克隆的方法,成功克隆到AKT1S1基因,并将该基因插入至重组逆转录病毒载体pBABE-Flag质粒中,构建了Flag-AKT1S1-pBABE质粒。在辅助质粒的帮助下,在p293T细胞中包装病毒,侵染293T细胞,使用嘌呤霉素筛选目标细胞,经过蛋白质免疫印迹试验鉴定,获得了Flag-AKT1S1-pBABE稳定过表达细胞系,为下一步开展AKT1S1相互作用蛋白的质谱鉴定及其在肿瘤发生中的研究打下坚实基础。     

C—erbB-2、bcl-2禾口nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及意义

为探讨C—erbB-2、bcl-2及nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及意义，采用免疫组化S—P法检测45例原发性结肠癌组织中C—erbB-2、bcl-2及nm23蛋白的表达。结果为bcl-2、nm23蛋白的表达与结肠癌肿块大小无关（P〉0．05），C—erbB-2的表达与结肠癌肿块大小相关（P〈0．01）；c—erbB-2、bcl-2与分化程度相关，nm23蛋白表达与肿瘤分化程度无关（P〉0．05）；C—erbB-2、bcl-2、nm23蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远隔转移有关。结论为C—erbB-2、bcl-2和nm23蛋白异常表达在结肠癌发生发展和浸润转移中起重要作用；联合检测C—erbB-2、bcl-2和nm23蛋白对判断结肠癌患者预后和转移有一定的价值。     

一个新突触蛋白PRRT2的研究进展

近几年的研究表明,PRRT2基因是PKD、BFIS、ICCA、偏头痛、发作性共济失调、热性惊厥、癫痫等多种发作性疾病的致病基因。进一步功能研究发现,PRRT2蛋白主要富集于大脑神经元的突触前膜,与SNARE复合物蛋白相互作用,参与调节突触功能并促进突触囊泡的胞吐过程,因此提出PRRT2是一个新的突触蛋白。更重要的是,突变型PRRT2蛋白的表达水平低于野生型,并且膜定位发生改变,从而使该蛋白的功能缺失。由此推测,由于患者中PRRT2蛋白单倍剂量不足而导致神经递质释放失调,可能是PRRT2相关疾病的致病机制。文章主要就近年来对PRRT2的研究进展进行了综述。     

经典瞬时受体电位通道蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达

背景与目的 经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道蛋白是一种非选择性阳离子通道蛋白家族,主要位于细胞膜表面,对钙离子具有通透性.研究认为,TRPC可能构成钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)并介导钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE),从而参与细胞的增殖、迁移、基因转录等生命活动.本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中TRPC mRNA及蛋白质的表达情况,初步探讨TRPC与NSCLC的可能关系.方法 建立TRPC1-7等7个家族成员的荧光定量PCR检测方法,对24例NSCLC患者的肿瘤组织进行了TRPC mRNA的定量检测,并通过蛋白质免疫印迹法对TRPC在蛋白质水平的表达进行了验证.结果 在NSCLC患者癌组织检测到TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA的表达,未检测到TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA的表达.肺癌组织中TRPC表达丰度为:TRPC1≈TRPC6＞TRPC3＞TRPC4.蛋白质免疫印迹证实了非小细胞肺癌组织中TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6在蛋白质水平的表达.结论 非小细胞肺癌组织在mRNA和蛋白质水平均表达TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,其中主要表达TRPC1和TRPC6,它们在构成肺癌细胞中SOCC、介导产生SOCE中的作用有待进一步研究.     

中嘉8号杨树转Bt植株的分子检测

用分子生物学方法对中嘉8号杨树转BtCry1A基因株系进行了检测和鉴定。通过PCR、ELISA和SDS-PAGE等实验证实,BtCry1A基因不仅存在于中嘉8号杨树基因组中,而且获得了较高的表达。PCR阳性植株Bt毒蛋白含量平均为3.32 ppb,Bt毒素蛋白分子量约为130 kD。实验结果表明,课题组前期获得的中嘉8号杨树转Bt植株具有进行生物测定和大田释放试验的价值。     

丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注BCL-2和Caspase-3表达的影响

为探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响,将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、TanⅡA低剂量治疗组和TanⅡA高剂量治疗组。用定量PCR方法观察缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达,并采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡。结果为缺血再灌注组Bcl-2和Caspase-3表达增加;与缺血再灌注组比较,TanⅡA高、低剂量治疗组均显著增加Bcl-2表达,减少Caspase-3表达。TanⅡA高、低剂量治疗组心肌梗死体积较缺血再灌注组减小。TanⅡA高、低剂量治疗组心肌细胞凋亡明显轻于缺血再灌注组,TanⅡA高剂量治疗组细胞凋亡亦轻于低剂量治疗组。TanⅡA对缺血再灌注心肌损伤能抑制其细胞凋亡,对心肌具有保护作用,其机制可能与增加Bcl-2蛋白表达同时降低Caspase-3蛋白表达有关。     

我国经济外部失衡的SVAR分析

通过构建一个SVAR模型并进行冲击分解,探讨了影响我国经济外部失衡的两个核心变量——经常账户和人民币汇率波动的结构性冲击及其传导机制。在进行冲击分解时,不仅考虑了宏观政策的冲击,也从微观上考虑了消费者的偏好冲击。最后得出的结论是,消费者的偏好冲击能够很好地解释我国经常账户的波动,货币冲击能够对人民币名义有效汇率的波动提供合理的解释,而风险溢价冲击能够解释这两个变量之间的相互关系。     

我国货币增长率对实际产出的长期影响

在检验出货币供应量M2为I(2)，实际产出为I(1)之后，再用一个只包含M2的增长率、实际产出两变量的二元结构向量自回归模型来研究1962-2002年期间货币供应量增长率的一次永久性变化对实际产出的长期影响，结果表明，在中国存在Tobin效应，即货币供应量M2增长率的一次永久性增加使实际产出增加，货币长期超中性不成立。     

上海市商务成本构成趋势对产业转移的影响

探讨了上海商务成本构成趋势对产业转移的作用.研究表明:上海商务成本构成趋势显示要素成本和交易成本呈现此消彼长的关系.一般而言,随着经济发展,要素成本不断上升,交易成本逐步下降,而商务成本总体呈现上升的趋势.商务成本构成趋势以及总体上升的趋势会加速产业转移方式由基于产品间分工的产业转移模式向基于产品内分工的产业转移模式的转变,并对产业转移产生影响,大多处于产业生命周期成熟阶段的行业和劳动密集型行业发生对外产业转移,处于产业生命周期创新和成长阶段的新兴行业则向该区域产业集聚,不同产业、产业价值链不同环节沿时间向量在同一空间转移和集聚,最终会促使产业升级和产业结构优化.     

金融规模、金融调控与经济增长——基于中国改革开放以来的实证研究

首先将金融发展分为金融规模与金融调控两个部分,然后利用聚类分析、向量自回归模型、格兰杰因果检验、状态空间模型全面系统地研究了金融发展与经济增长之间的关系。结果表明,不同研究方法的结论可以互相补充、互相支撑。金融发展与经济增长之间互为因果关系。中国的金融—经济系统在1993、1994年左右存在结构变化,在结构转变过程中,金融对经济的调控是平稳的。金融规模对经济增长具有促进作用,金融调控手段在调节经济的同时,对经济增长也有微弱的促进作用。金融调控对经济增长的作用无论是正向还是反向,都是对经济增长的贡献。     

资本账户开放与科技金融发展:“并驾齐驱”抑或“此消彼长”

研究基于时变参数的结构向量自回归模型（SV-TVP-SVAR）动态考察资本账户开放、科技金融发展与经济高质量发展相互关系,并通过对资本账户开放与科技金融发展关键时点的选择,详细探究了两者相互关系及对经济高质量发展的时变影响。研究结论表明：（1）资本账户开放虽然短期内能推动科技金融的发展,但长期正向作用并不稳健,具有明显滞后特征。（2）当前科技金融发展不能稳健推动资本账户开放,但在经济危机时期促进效应最为显著。（3）两者不同时点的观测显示,深化资本账户开放的改革对科技金融的正向影响随滞后期数的增加而逐渐弱化,而将创业板上市却能进一步推动资本账户的开放。（4）资本账户开放与科技金融发展多数时期均能推动经济高质量发展,但推动效用存在显著差异。资本账户开放的滞后影响具有异质性,而科技金融发展的正向推动作用波动明显。因此,我国应加快资本账户"渠道式"开放改革和科技金融集聚化发展进程,在促进两者良性互动的同时,疏通支持经济长期、稳健高质量发展的渠道。     

行业生产率、行业发展速度和行业收入增长——基于SVAR模型的研究

运用结构向量自回归（SVAR）模型,对中国1978年至2009年农业、制造业、金融业收入增长的内在机制进行研究,结果表明：农业收入对生产率和发展速度冲击的反应是发散武反馈效应,生产率与农业发展速度的变化导致农业收入有一个较小且短期的收入增长,之后农业收入出现大幅度的波动;制造业收入对生产率和发展速度冲击的反应是一个收敛式反馈效应,制造业生产率与发展速度可以稳定地长期地提高制造业收入水平;金融业生产率与行业发展速度引起行业收入长期大幅度的波动,金融衍生工具可以在一定程度上克服波动的负面影响。     

距离相似度在支持向量数据描述中的应用

支持向量数据描述的分类边界是由分类边界上的支持向量决定的,通过对支持向量的理论研究,提出一种基于距离相似度的支持向量数据描述约减算法。实验结果表明,该算法在小规模样本数据中具有一定的优越性和实用性。     

测度长三角制造业同构的几种方法——基于时间序列数据的分析

在借鉴相关研究的基础上,本文提出了测度制造业同构的两个指数:改进克鲁格曼指数MKIij和结构重合度指数SSIij,并证明了二者的等价性。同时对结构相似系数Sij与结构重合度指数SSIij的含义进行了剖析,指出用SSIij来衡量地区间制造业的同构度更为贴切。利用Sij和SSIij测度了长三角制造业的同构度,结果表明长三角两省一市制造业的结构相似度高于结构重合度,但研究同时表明,用他们的动态变化来反映制造业结构是否发生了趋同却具有同样的效果。     

Minimum distance estimation of the spatial panel autoregressive model

This paper contributes to the interface literature of new methodological foundation of analyzing historical data with space and spatio-temporal phenomena. In particular, I consider estimating the spatial panel autoregressive model using the minimum distance estimator. Spatial autoregression has important implications for economic system that typifies correlatedness across many spatial locations and which could evolve over long span of time. To overcome computational difficulties, I suggest a two-stage estimation procedure based on minimum distance estimators. A striking feature of the proposed model is that minimum distance estimates are derived under common slopes and complete equality of parameters across spatial units. Assumption of common slopes across spatial units is an empirical and theoretical plausibility as many spatial units are observed to share common trend and typology of changes occurring to the individual system under which equality of parameters are possibilities. The estimation strategy allows various restrictions on time-varying vector parameters. Moreover, those restrictions can easily be tested. I apply this procedure to the residential demand for water of 115 French municipalities over the biannual period 1988–1993. The primary contribution of the paper is to the methodological side of cliometrics while the empirical application (with shorter time period) has been presented for illustrative purpose although, it can nonetheless be readily applied to historical data with long-time horizon allowing for restrictions such as spatio-temporal common vector and structural break in parameter estimates.

长三角省际贸易强度与制造业同构的关系分析

本文给出了一种近似衡量地区间贸易壁垒强度的方法,利用该方法测度了历年来长三角的省际贸易强度。同时,文中还引入了一个结构重合度指数,利用该指数计算了历年来长三角制造业的同构度。经过单位根检验与协整检验后,对两个序列进行了回归分析。结果表明,省际贸易强度与制造业同构度之间存在着明显的负相关关系。