蛙病毒属PCR检测方法的建立及其在甲鱼“红脖子“病病原鉴定中的应用

在GenBank中搜寻EHNV相关序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,扩增蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)410 bp的DNA片段.用该方法从患“红脖子“的甲鱼中分离的病毒毒株(9701株)中扩增出特异性的片段.对扩增产物进行基因克隆、序列测定和序列分析,结果表明该片段和蛙病毒属其他病毒MCP的编码基因同源性都在96%以上,和牛蛙虹彩病毒的基因序列相似性为100%,因此初步判定9701株属于蛙病毒属.     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT—PCR鉴别诊断方法

本研究通过对不同毒力的新城疫病毒(NDV)的融合蛋白基因(F基因)核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计出3对引物P1+P2,P1+P3,P1+P4,建立了一种可以迅速鉴定新城疫病毒并且同时鉴别毒株毒力强弱的RT-PCR方法.引物P1+P2能特异性地对所有新城疫病毒可扩增出一条362bp的片段,引物P1+P3能特异性地针对所有新城疫强毒株扩增出一条254bp的片段,引物P1+P4能特异性地针对所有新城疫弱毒株扩增出一条254bp的片段,整个试验过程可在6小时内完成.对实验室分离的4株病毒进行检测,结果同常规检测方法的结果一致.     

H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因克隆及分子进化分析

用RT-PCR方法,以1株H2N2亚型禽流感病毒分离株RNA为模板,扩增了HA全基因cDNA.将HAcDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行了测序.测序结果表明所克隆的1685bp核苷酸片段包含了全部HA基因阅读框架和上下游引物,编码区为1683个核苷酸,编码560个氨基酸.将其序列与其他8株H9N2亚型禽流感病毒HA基因及推导的氨基酸序列进行比较,其核苷酸同源性在85.3%～98.6%之间,氨基酸同源性在88.8%～98.9%之间,HA基因裂解位点氨基酸序列没有连续碱性氨基酸插入.本研究结果为国内基因工程疫苗等研究奠定了基础,同时通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系.     

鹅细小病毒延边株VP3基因原核表达质粒构建

本试验根据GenBank已公布的鹅细小病毒B株基因序列,设计了一对扩增VP3基因的特异性引物,对鹅细小病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了约为1500bp的VP3基因片段,将其回收纯化后与pMD-18T simple载体连接,然后进行克隆,经双酶切分析、PCR鉴定及测序,验证了所克隆的基因是鹅细小病毒VP3基因.用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-1原核表达载体中,获得重组质粒PGEM-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析,证实了重组质拉的正确性.     

五种马病毒基因芯片检测方法的建立

[目的]既保护我国畜牧业的安全,又在检验检疫口岸实现马匹的快速通关,探索建立马病毒基因芯片检测方法。[方法]采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒核酸序列、通过分子克隆技术获得西尼罗热、马冠状病毒、马鼻肺炎病毒和马动脉炎病毒的特异基因片段,设计合成五种马病病毒高度保守的特异性核酸序列作为检测探针点制于芯片上,再用多重不对称PCR以拼接、克隆的核酸序列为模板扩增目的片段,与芯片上探针特异结合。[结果]建立了五种病毒的基因芯片快速检测方法,实现了五种马病同时检测。[结论]本研究建立的芯片快速高通量基因芯片检测方法可应用于大规模出入境马属动物的快速筛查。     

点带石斑鱼神经坏死病毒基因组分析

[目的]准确诊断发生在福建南部点带石斑鱼育苗场的鱼病.[方法]根据基因库中已报告的石斑鱼NNV核苷酸序列,设计了8对特异性引物,用于扩增点带石斑鱼NNV的RNA1和RNA2特定片段.PCR扩增产物经琼脂糖电泳确认后进行核酸测序,用相应软件进行拼接,得到点带石斑鱼NNV基因组全序列.用DNAstar软件对该序列进行分析,得到相应的氨基酸序列.[结果]该病毒的RNA1含有一个编码依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependant RNA polymerase,RdRp)的开放阅读框(ORF)为2949nt,编码1个由982个氨基酸组成的蛋白质;RNA2的ORF为1017nt,编码1个由338个氨基酸组成的病毒主衣壳蛋白.将这些核苷酸序列以及推导的氨基酸序列与基因库中同属于罗达病毒科(Nodaviridae)的其他罗达病毒进行同源性比较,该病毒与其他已知的石斑鱼NNV的同源性高.系统发育进化分析也表明,点带石斑鱼NNV与其他石斑鱼NNV亲缘关系很近,同属于赤点石斑NNV血清群,与其他β罗达病毒有一定的距离,与α罗达病毒则有明显的不同.[结论]福建南部个别点带石斑鱼育苗场的石斑鱼感染了神经坏死病毒.     

"病毒"营销在网络中的应用

本文概述了"病毒"营销基本原理,论述了进行"病毒"营销应具备的基本要素,对"病毒"营销的方案的设计以及在网络中进行传播的方法进了分析和探讨.     

点带石斑鱼神经坏死病毒基因组分析

[目的]准确诊断发生在福建南部点带石斑鱼育苗场的鱼病.[方法]根据基因库中已报告的石斑鱼NNV核苷酸序列,设计了8对特异性引物,用于扩增点带石斑鱼NNV的RNA1和RNA2特定片段.PCR扩增产物经琼脂糖电泳确认后进行核酸测序,用相应软件进行拼接,得到点带石斑鱼NNV基因组全序列.用DNAstar软件对该序列进行分析,得到相应的氨基酸序列.[结果]该病毒的RNA1含有一个编码依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependant RNA polymerase,RdRp)的开放阅读框(ORF)为2949nt,编码1个由982个氨基酸组成的蛋白质;RNA2的ORF为1017nt,编码1个由338个氨基酸组成的病毒主衣壳蛋白.将这些核苷酸序列以及推导的氨基酸序列与基因库中同属于罗达病毒科(Nodaviridae)的其他罗达病毒进行同源性比较,该病毒与其他已知的石斑鱼NNV的同源性高.系统发育进化分析也表明,点带石斑鱼NNV与其他石斑鱼NNV亲缘关系很近,同属于赤点石斑NNV血清群,与其他β罗达病毒有一定的距离,与α罗达病毒则有明显的不同.[结论]福建南部个别点带石斑鱼育苗场的石斑鱼感染了神经坏死病毒.     

应用RT—PCR检测灭活疫苗中口蹄疫病毒（核酸）

应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测口蹄疫灭活疫苗中的病毒RNA.设计相应于病毒基因组VP1序列保守区段20mer长度的引物.分离出灭活疫苗水相,萃取总RNA,反转录合成cDNA,进行PCR扩增和电泳检测扩增产物,本引物对扩增片段长度483bp,并设计一个Marker作为对照.     

猪圆环病毒多重PCR检测方法的建立

设计合成2对PCV型特异性引物,其中C1、C2扩增PCV1和PCV2共有的938bp特异性片段,C3、C4只扩增PCV2特异性的490bp片段.在对该多重PCR的反应条件进行优化后,建立了猪圆环病毒多重PCR诊断方法,既可对PCV进行定性检测,又可对PCV1和PCV2进行定型,便于口岸检疫和养殖场的临床诊断.     

企业内部控制刍议

文章就内部控制的概念作了多层次的理解 ,对内部控制方法进行了阐述 ,分析了我国企业内部控制的认识及方法的不足之处 ,指出了我国企业内部控制建设中应注意的问题。     

回顾与展望:我国吸收外商投资走势分析

当今没有哪个国家的对外开放政策像中国这样引人注目,也没有哪个国家吸收外商投资的业绩像中国这样令人津津乐道.20世纪90年代以来,中国连续15年居发展中国家吸收外商直接投资(FDI)首位.中国的对外开放以及外商投资政策改变了中国自身,也改变了世界.中国经济逐步全面融入全球经济体系之中,成为经济全球化的重要推动力量.     

提高技术引进水平,转变外贸增长方式

中国要转变外贸增长方式,进行技术创新就要大力发展和扩大技术贸易,不断提高技术引进的水平.     

当前深化开放型经济体制改革的若干问题

为应对国际金融危机冲击,除了采取经济刺激措施外,还应通过深化改革寻求生机.当前,开放型经济领域应围绕加工贸易产品内销、解决贸易融资、跨境交易人民币结算、外汇储备管理多元化等四个重大问题继续推进体制和管理机制改革.     

韩国大宇汽车公司处理方案分析

大宇汽车公司的三种处理方案备受韩国和世人瞩目,国有化方案由于需要巨额国有资金等问题而没有较强的可行性。国内企业接管方案由于存在强化企业垄断性和资金短缺等问题也行不通,最具可行性的是海外销售方案,如果处理得好,该方案可促进整个韩国汽车工业的发展,同时由于可引进高外企业先进的生产技术和管理经验,最终可增强韩国汽车行业整体的国际竞争力。     

豆粕蛋白溶解度测定方法的研究

[目的]摸索影响豆粕蛋白质溶解度测定中的关键因素及其控制方法,建立正确评价豆粕加工质量的测定方法.[方法]参考美国大豆协会提供的蛋白质溶解度测定方法,测定蛋白质溶解度,同时测定尿酶活性.[结果]制样粒度及其称量准确性、2%KOH溶液浓度准确度及其放置时间、豆粕溶解时的振荡器转速、振荡时间、温度等都会影响测定结果,10次平行测定的标准偏差为0.065,相对标准偏差为0.17%.[结论]该方法精密度好,准确度高,能满足进出口检验的需要.     

中国对外贸易增长方式转变的路径与策略

近几年来,特别是加入世界贸易组织后,我国对外贸易取得了突飞猛进的发展,对我国经济持续高速的发展起了极其重要的推动作用。我国已经成为世界第三贸易大国。但我国还不是贸易强国。长期以来,我国外贸快速发展主要是依靠粗放型增长方式,这种方式日益显现出其不可持续性。实现从贸易大国到贸易强国的转变,关键在于转变外贸增长方式。文章就这一问题进行了一系列的思考。     

产业集群对产业“梯度转移”理论的挑战

产业集群是我国东部沿海地区经济增长和竞争优势的主要来源 ,东部产业集群效应使东部地区强化了“后天优势” ,阻碍了东部产业向中西部的转移 ,对流行的产业“梯度转移”理论形成了重要挑战。东部地区利用西部低成本劳动力优势及高度专业化分工基础上的产业配套条件 ,使中西部地区利用产业“梯度转移”理论发展经济的难度加大了。     

当前世界服务贸易发展的基本特征

编者按:服务贸易的迅速发展越来越为理论界和实际工作部门所关注.本文根据WTO于2008年4月17日发表的<贸易快讯>有关统计数据,对当前世界服务贸易发展的基本特征做了深入分析.文章中概括的服务贸易发展的重要特征对我们了解世界服务贸易发展及我国服务贸易发展现状有着重要的参考意义.     

从贸易数据看当前世界贸易发展的新特点

进入21世纪以来,世界贸易发展随着世界经济整体走势的变化而波动.特别是在过去的四年中,世界经济的持续高速增长极大地改善了国际贸易环境,为贸易的快速发展提供了坚实基础和广阔空间,而同时贸易也成为推动经济增长的重要驱动力量和源泉.初步预计,2007年和2008年在经济增长的刺激下,世界贸易将继续呈现较快增长的态势.