Western Blot法检测牛脑组织中的BSE病原

1前言 牛海绵状脑病（Bovine spongiform encephalopathy，BSE）俗称疯牛病，是牛的一种传染性、渐进性、致死性中枢神经系统疾病。该病属于传染性海绵状脑病（，IsEs），也叫朊病毒病。Westernblot试验是目前国际上用于确诊疯牛病的方法之一，Westernblot试验是检测蛋白质的一种免疫印迹法。根据朊病毒病理论假设（Gfiffith，1967；Prusiner，1982），TESs病原是宿主基因编码的一种蛋白质（PrPc）的异构体（PrPsc）（Prusiner，S．B．1991；Andrew，F．Hill等，1999）。     

疯牛病给我国敲响了食品安全的警钟——就热点问题与专家共话

<正> 记者(以下简称记):1986年,英国发现了世界上首例疯牛病。15年后,也就是2000年,疯牛病“东扩”至欧洲大陆,引起欧洲各国一片恐慌,人们几乎是谈“牛”色变。2000年10月下旬,在法国被检测出患有疯牛病的牛数量剧增,其后“恐疯牛症”便席卷整个法国。这一风波尚未平息,同年11月23日,在西班牙又发现首例疯牛病。时隔一天,在德国也发现首例疯牛病,至今数量已增加到14头,估计到今年年底将达到200～500头。此后不     

牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]针对牛传染性鼻气管炎病毒建立快速、准确而敏感的分子生物学检测方法,为进出口牛及其遗传物质的IBR检疫把关提供新的技术手段.[方法]采用新型实时荧光PCR技术原理,自行设计荧光标记引物建立检测方法,对不同牛传染性鼻气管炎病毒样品进行敏感性、特异性等检测试验,并与常规PCR检测方法进行比较.[结果]该方法能特异检测I BR病毒,检测时间包括核酸样品制备仅需2h,敏感性比常规PCR检测方法提高达103-104.[结论]本方法适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定.     

MGB双探针实时荧光PCR检测牛白细胞粘附缺陷病方法的建立

从福建某奶牛场250头进口荷斯坦牛采血提取牛血液DNA,根据已知牛染色体上CD18编码基因序列383位碱基由A 变为G 而引起牛白细胞粘附缺陷病设计特异性野生型和突变型探针,建立实时荧光定量PC R 检测方法用于牛白细胞粘附缺陷病的基因分型检测。结果检出2头母牛为牛白细胞粘附缺陷病携带者,检出率为0.8%,没有发现患病牛。结果证明本研究建立的实时荧光定量PC R 检测方法是一种敏感性和特异性很高的筛选奶牛牛白细胞粘附缺陷病有害基因的新方法。     

疯牛病的蔓延与新发现

2003年12月23日,就在西方国家最重要的节日圣诞节来临之际,美国农业部宣布在华盛顿州一家小屠宰场发现了一头患有疯牛病的病牛。消息一出,举世皆惊。从上世纪90年代初美国就宣称采取严密措施阻挡疯牛病传入,加之美国在地理位置上远离疯牛病的发源地英国并且有大西洋阻隔,更为重     

食品和饲料中动物源成分的检测方法的进展

由于近年来欧洲及世界上许多国家相继发生了疯牛病、羊痒病等疾病,食品和饲料中动物源成分的检测显得越来越重要.国际上检测食品和饲料中的动物源成分有3种方法(1)以显微镜观察为基础的方法;(2)以检测蛋白质为基础的方法;(3)以检测DNA为基础的方法.本文对这些方法的研究进展进行了综述,并对这些方法的优缺点进行了比较分析.     

GB/T25165-2010对肉类食品中牛羊猪源性成分检测的适用性研究

为研究国标方法GB/T 25165-2010《明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法》对肉类食品检测的适用性,本文优化其样品前处理方法,验证标准中引物、探针对肉类食品检测的特异性和灵敏度,并通过大量市售样品进一步确认方法的适用性.结果表明,该方法适合检测肉类食品中的牛、绵羊、猪源性成分,不适合山羊源性成...     

忘掉卓越

<正>"一大帮英国动物医学院的科学家们从1997年开始进行一项研究,目的是通过对羊脑的分析来证明羊在食用了被污染的饲料后是否和牛一样也会感染疯牛病。而用于做该项实验的羊脑样本是由政府的兽医检验站提供的,采集于20     

煤炭检测方法中精密度的探讨

通过分析煤炭检测标准中精密度不同表达方式，介绍制定标准方法时广泛使用的建立精密度方法的基本步骤，以及标准检测方法重复性限和再现性限的实际应用，帮助实验室人员正确理解检测方法的精密度。     

日本和牛肉真实性鉴别技术研究

建立了鉴别日本神户牛肉真实性的分子生物学检测技术。通过对来源于10个品种的牛的样品的分析,发现了牛生长激素基因第五外显子的品种间多态性位点,并通过比较分析,确定了日本和牛在这些多态性位点的特异核苷酸组合,建立起了日本神户牛肉的分子生物学识别技术。采取了47份市售牛肉对方法进行了验证,证明该方法在应用于国内市场的神户牛肉的真实性鉴别上,具有很好的特异性,可以用于区分日本神户牛肉和国产牛肉以及国内生产的所谓日本黑牛肉。     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

书评:忘掉卓越

"一大帮英国动物医学院的科学家们从1997年开始进行一项研究,目的是通过对羊脑的分析来证明羊在食用了被污染的饲料后是否和牛一样也会感染疯牛病.而用于做该项实验的羊脑样本是由政府的兽医检验站提供的,采集于20世纪90年代初期.试验中,一些科学家怀疑样本被污染,遂将样本送去化验,结果发现五年来他们在实验中使用的样本竟然是牛脑而不是羊脑."     

地质雷达在隧道检测中的技术问题及解决办法

地质雷达利用高频电磁波对不可见目标体进行扫描探测，以确定其内部结构形态和位置，在隧道检测中具有无损、快速和高分辨率等特点。本文阐述了地质雷达工作原理及其探测方法，并结合实践经验对地质雷达在隧道检测中存在的天线频率的选择、天线重量的轻型及小型化、隧道检测专用台车、空洞准确定位、标准图谱库建立等问题给出了一些建议。     

加拿大发现今年首例疯牛病病例

加拿大食品检验局近日说，加拿大日前发现一例疯牛病病例，这是加拿大今年首次发现疯牛病，也是该国2003年以来发现的第16例疯牛病病例。     

荧光RT-PCR检测鱼类鲤春病毒血症病毒的研究

本研究根据鲤春病毒血症病毒的核酸保守区序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的检测鲤春病病毒的荧光RT-PCR检测技术.同时,又将该方法与一步法RT-PCR方法和细胞查毒方法进行了互相验证和对比研究,结果表明,荧光RT-PCR方法检测病毒悬液的灵敏度最高,病毒悬液10-6稀释仍然可以检出,而细胞分离病毒方法测得的TCID50为10-4.本文还对北京地区出口渔场送检样品、人工实验感染该病毒鱼的病料进行了组织脏器中病毒分布和病毒含量的研究.结果显示,北京地区出口渔场送检样品未见细胞病变,所有检测样品均为阴性;病毒致死鱼的肠道病毒含量最高,肠组织研磨稀释10-4倍仍然可以检出;其次是肾和鳃组织,检出极限为稀释10-3倍组织悬液;肉和脑组织中病毒含量较低,肉最高能检出10-2倍组织悬液,而脑组织只能检出10-1倍组织稀释液.     

以oprI为靶基因实时荧光PCR法检测化妆品中绿脓杆菌

建立快速检测化妆品中绿脓杆菌的实时荧光PcR方法。选取绿脓杆菌oprI基因中相对保守且高度特异的核苷酸片段作为荧光PCR扩增的靶序列,设计引物和TaqMan探针,并研究了DNA提取方法,优化扩增反应体系和仪器条件。与GB方法进行比对,检测结果一致,但检测时间均只有GB方法的1／10;方法的检测灵敏度为2cFu／荧光PcR反应体系,染菌样品经6h增菌培养后,检测低限均达到2cFu／g,证明该方法高度敏感;通过对36株标准／参考菌株和51株非目的菌的检测,证实该方法高度特异;批内cP值的变异系数小于2％,说明该方法具有良好的可重复性。     

钢材新标准下建筑用钢筋的抽样与检测

随着国家最新一批强制性标准在建筑钢材领域的颁布和实施，无论在钢材流通和使用领域都引起一定的反响。新标准的制定参照了国际通用标准，也就是说新旧标准有了较大的不同，增添了不少新的内容，因此对于我们建筑行业材料的抽样与检测方面产生了一些变化。而钢筋是建筑工程中用量最大的钢材，因此本文以建筑钢筋的检验为例，集中对新标准下建筑用钢筋的抽样与检测进行了详细阐述，在一定程度上解决了新标准在施工和教学方面的知识更新问题。     

国家食品安全标准体系建设研究

近年来,疯牛病、口蹄疫、禽流感等重大食品安全事件频发,食品安全对世界各国经济社会的发展撼动很大。随着经济全球化和国际贸易的进一步发展,各国纷纷制定了更为严格的食品安全技术法规和标准,来严格把关进口食品的质量安全,同时也给我国食品安全国家标准体系的建设提出了更多的反思空间。基于此,就我国现行的食品安全标准体系问题进行分析,进一步提出应对我国食品标准体系问题的对策。     

高校食堂菜肴食品检测标准问题与对策研究

随着高校的扩招,食堂不断扩大和各类问题的不断发生,许多高校对菜肴食品安全及质量越来越重视,不断引入各种标准进行管理和规范,部分学校近年来采用"ISO22000"和"HACCP"等标准进行食品安全卫生等方面控制,并取得了一定成效。但对于菜肴食品质量检测方面,由于地方口味要求和制作方法的不同,至今尚无较为明确的质量检测细则及标准。本文通过借鉴现行相关标准,进行菜肴食品检测依据分析、制作流程、检验指标及对策等方面研究,以期推动建立菜肴食品质量检测标准细则,并推动高校食堂对菜肴食品质量检测方法研究的深入。     

红牛等饮料被指含二类精神药物正常人没必要喝

近日，有媒体对市场上的9款功能性饮料进行送检，其中包含了红牛、启力、日加满、力保健、乐虎、东鹏特饮、能立方7个品牌，对其安全性和品质进行了检测。检测结果显示，红牛和东鹏饮料的配方中，有可能会生成微量国家二类精神药品安钠咖。