食品中副溶血性弧菌检测能力验证结果与分析

为通过参加中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供的食品中副溶血性弧菌(定性)能力验证活动,提高实验室副溶血性弧菌的检测能力,增强实验室的竞争力,本文按照GB 4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》进行副溶血性弧菌定性检测,同时使用Real-time PCR和MALDI-TOF MS快...     

食品中副溶血性弧菌检测能力验证分析

目的:通过参加FAPAS(food analysis performance assessment scheme)食品中副溶血性弧菌检测能力验证计划来确认及提高本验室对副溶血性弧菌的检验检测能力。方法:采用国家标准法GB 4789.7-2013和环介导等温扩增技术对收到的两份鱼肉盲样进行检测。结果:编号为M230d21A盲样未检出副溶血性弧菌,编号为M230d21B盲样检出副溶血性弧菌。结论:通过参加此次FAPAS能力验证来评价和监控实验员检验能力的持续状况,为自身的持续改进和质量管理提供信息,进一步促进实验室管理体系完善。     

弧菌显色培养基（ChromID Vibrio）对霍乱弧菌检测效果的探讨

[目的]探讨梅里埃弧菌显色培养基（简称ChromID Vibrio）对霍乱弧菌的检测效果。[方法]通过ChromID Vibrio弧菌显色培养基同硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（简称TCBS）琼脂培养基进行比对,采用阳性菌株直接平板计数、人工污染样品和实际样品检测的方法,对ChromID Vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了评价。[结果]ChromID Vibrio弧菌显色培养基上霍乱弧菌典型菌落是蓝绿色。阳性菌株直接平板计数及人工污染试验均表明ChromID Vibrio平板的敏感性均比TCBS平板高。对采集的300份实际样品进行检测,都未检出霍乱弧菌。[结论]ChromID Vibrio具有较好的灵敏性、特异性,能提高霍乱弧菌检测效率。     

荧光分析法快速检测水产品中副溶血性弧菌

[目的] 提出一种新颖、简便、快速检测水产品中副溶血性弧菌的方法.[方法] 本方法用阿拉伯糖-葡萄糖醛酸盐培养基(AG)在37℃下对副溶血性弧菌进行增菌,以苯甲基-L-精氨酸-7-氨甲基-香豆素(Bz-Arg-7AMC)作荧光底物,用荧光分析法检测该菌的胰蛋白酶样活性,通过判读胰蛋白酶样活性,确定水产品中是否污染有副溶血性弧菌.[结果] 该方法的灵敏度为20个/g,相关分析表明荧光分析法与5管MPN计数法呈正相关,相关系数为0.86.[结论] 用本方法只需8个小时就可完成水产品中的副溶血性弧菌的检验,操作简便,灵敏度较高,适于快速检测需要.     

多重荧光PCR方法检测食品中致病菌的实用研究

目的:验证多重荧光PCR方法在食品中致病菌检测的实用性,并为标准制定提供参考。方法:以沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌为测试对象,设立阳性、阴性、空白样品对照,以GB4789.4-2016、GB 4789.7-2013、GB 4789.10-2016、GB 4789.30-2016为方法对照,设计引物和探针对样品进行检测。结果:多重荧光PCR方法的阳性、阴性、空白样品对照结果准确,检测结果与上述国标一致。结论:采用荧光PCR方法,可大幅缩短食品中致病菌的检测时间,且操作简便,具有一定的实用价值。     

多重PCR检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究

建立快速检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的多重PCR(MPCR)方法.针对古典型霍乱弧菌(CVC)和埃尔托型霍乱弧菌(EVC)的共有序列霍乱肠毒素基因(ctxB)、CVC的毒力协调A亚单位基因(C-tcpA)、EVC的毒力协调A亚单位基因(E-tcpA)、副溶血性弧菌的热稳定性直接溶血素基因(tdh)为靶序列设计引物,建立多重PCR检测方法,相应扩增片段依次为564bp、617bp、471bp和202bp.用该方法检测EVC、CVC、副溶血性弧菌、非O1群霍乱弧菌、沙门氏菌等35株菌株表现出极好的特异性,对人工污染的罗非鱼、小虾、牡蛎、鱼鳃和鱼肠混合物的检出限EVC为2.2 cfu/mL、CVC为2.8 cfu/mL、副溶血性弧菌为6.5 cfu/mL,扩增片段表现出极好的特异性,整个实验过程8～10h完成.实验结果表明该方法是特异性强、省时、省力的检测方法.     

食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法的建立与应用

目的:建立多种食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法并观察应用效果。方法:选取高密市疾病预防控制中心1年内收集的211份肠道门诊腹泻患者样本,以及以海水产品为主的150份食品样本作为研究材料,应用多种快速检测方法对研究材料进行检测并观察检测情况。结果:20株副溶血性弧菌中有1株为PCR阴性,19株3种检测方法均为阳性;3种检测方法中,海水产品的检出率最高,均为18.7%。结论:典型生化联合筛检法、实时荧光定量PCR法、恒温扩增-核酸试纸条法在快速检测副溶血性弧菌方面具有重大应用价值。     

副溶血性弧菌REP-PCR分型研究

[目的]了解食品中分离的副溶血性弧菌REP-PCR分子型别,探讨DiversiLab系统对副溶血性弧菌的分型能力。[方法]采用以REP-PCR为原理的DiversiLab系统对食品中分离的21株副溶血性弧菌进行分子分型,分析菌株之间的相关性,并与PFGE分型结果比较。[结果]DiversiLab将21株副溶血性弧菌分成16个群,菌株之间的相似度64.5%-99.1%,分离自相同食品中的副溶血性弧菌在REP-PCR聚类图中分在同一个群;7株副溶血性弧菌PFGE分型结果产生7种不同的PFGE型别,菌株之间不相关,在REP-PCR聚类图中分在7个不同的群中。[结论]食品中分离的副溶血性弧菌REP-PCR型别分散,未表现出地区特异性;DiversiLab简便、快速、分辨率高,可应用于副溶血性弧菌的快速分型和溯源。     

同时检测食品中的多种致病性弧菌

以食品中的致病性弧菌为研究对象,对培养基的选择、培养温度等关键因素进行实验研究,精心设计可疑菌落鉴定程序,形成同时检测几种致病性弧菌的同一检测程序.对新建方法进行验证发现,新建方法对17株(13种)致病性弧菌和4株相似菌的检测均与实际相符;新方法的灵敏度小于10个/25g;我们用新建方法对200份样品进行了检测,检出副溶血弧菌3例、拟态弧菌1例,SN标准对霍乱弧菌和副溶血弧菌的检测结果与新建方法一致.     

即食调味牡蛎休闲食品加工工艺研究

以牡蛎为原料,经烫煮、调味、干燥、真空包装和杀菌等工序研制而成即食调味牡蛎休闲食品。试验结果表明,即食牡蛎软罐头最适调味配方为:酱油10.0%,糖9.0%,食醋10.0%,黄酒4.0%。本产品保留了牡蛎原有的营养成分和其特有的海鲜风味,营养丰富,口感舒适,食用方便。即食调味牡蛎休闲食品加工工艺的研究为以牡蛎为原料开发高附加值产品提供了新的思路与技术支持。     

显色培养基分离婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的效果比对和应用

分析广东环凯公司阪崎肠杆菌显色培养基(CRM006)和科玛嘉阪崎肠杆菌显色培养基(DFI)的实验应用效果,为检测婴幼儿乳粉中的阪崎肠杆菌选用培养基提供依据。按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》(GB/T 4789.40-2010)分离及生化鉴定阪崎肠杆菌,并分析培养基的分离效果。结果表明,36份样品中,检出阪崎肠杆菌2份,检出率为5.56%;CRM平板和DFI平板阳性符合率为100%;疑似菌落检出率分别为16.67%和13.89%(P0.05)。CRM平板和DFI平板用于培养分离阪崎肠杆菌均有良好效果。     

鳄鱼肠中一株乳酸菌分离鉴定及活性物质的初步分析

利用含有0.3%CaCO_3的MRS分离培养基,从鳄鱼肠道分离得到1株产酸能力强的菌株,命名E02,通过形态观察,并进行生理生化特征分析,初步鉴定为乳杆菌。以大肠杆菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌和黑曲霉作为指示菌,采用牛津杯双层平板法测其发酵产物抑菌活性。通过用乳酸调节与原发酵液相同pH的MRS液体培养基,并与原发酵液作抑菌活性对比,进行抑菌活性物质初步分析。实验结果表明,菌株E02发酵产物的抑菌物质主要是酸,只有少部分是其他活性物质。     

副溶血性弧菌检测新方法研究进展

副溶血性弧菌广泛存在于水产品中,人们常因食用了被其污染的食物而引起食物中毒,导致胃肠疾病,是食源性疾病暴发的重要病原之一。目前检测该菌的方法较多,本文就近年来出现的检测新方法进行了综述,以期为相关研究提供参考。     

冷冻饮品国家卫生标准中大肠菌群限值的探讨

目的:对冷冻饮品卫生标准GB 2759-2015微生物学大肠菌群限值进行探讨。方法:采用MPN及平板计数法检测样品1和样品2中的大肠菌群,采用MPN计数法检测样品2中的粪大肠菌群。结果:样品1大肠菌群MPN计数合格率为13.3%,平板计数合格率为93.9%;样品2大肠菌群平板计数合格率为100%,MPN计数法均检出大肠菌群,粪大肠菌群检出率为93.3%。结论:冷冻饮品大肠菌群的检验方法可根据污染情况选择MPN及平板计数法,并增加粪大肠菌群检验项目。     

盐酸副玫瑰苯胺法测定腐竹中二氧化硫含量

采用GB/T5009.34-2003《食品中亚硫酸盐的测定》盐酸副玫瑰苯胺法对腐竹中二氧化硫含量进行测定,讨论该检测方法的注意事项。结果表明:福建闽侯腐竹中二氧化硫含量相对稳定,检测结果均在规定范围内;盐酸副玫瑰苯胺溶液中盐酸(1∶1)用量为10~15 m L;二氧化硫标准溶液避光低温保存一个月后须重新标定;控制显色时间20 min,显色温度25℃。     

应用PCR技术快速检测水产品中副溶血弧菌的研究

1前言 副溶血弧菌(Vibrin Parahemolyicus)是海洋和盐湖中微生物区系的重要成员,食品卫生上的重要病原菌.由于水产品自身携带该菌,给该菌在水产品加工中的预防带来难度.近年来,我国出口的水产品曾有多起因副溶血弧菌超标引起的退货、销毁、取消注册代号的恶性事件发生.欧盟3 6 8决议(97/368EC)和587号决议(97/587/EC)更是要求对原产于中国的水产品批批检验副溶血弧菌.流行的副溶血弧菌检测方法-培养法检验周期较长,往往需7天以上才能报告结果,从食品的特定货架期、高额储藏费用和适应食品贸易的角度,我们探索了用PCR技术检测食品中副溶血弧菌的方法.该类研究已有报道,但多集中在实验室方法探索上[1-9],真正从应用的角度对食品中副溶血弧菌的PCR检测方法研究鲜有报道.     

犬钩端螺旋体PCR检测方法的应用

采用荷兰皇家热带病研究院WHO钩体病参考中心设计的一对引物进行普通PCR检测。经反应条件与体系优化,对犬钩端螺旋体与霍乱弧菌,伤寒杆菌,沙门氏菌,产毒性大肠杆菌,致病性大肠杆菌,痢疾,溶藻菌,非O1、O139霍乱弧菌,副溶血性弧菌,O157菌进行检测,除犬钩端螺旋体以外均为阴性,表明钩端螺旋体PCR检测方法与以上菌株无交叉反应,证明了该钩端螺旋体PCR检测方法具有特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示PCR方法可以检测到的核酸浓度最低为3×10³拷贝。此结果证明该犬钩端螺旋体PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,可用于犬钩端螺旋体样品的检测。     

弗尼斯弧菌PCR检测方法的建立及应用

目的:弗尼斯弧菌(Vibrio fumissii)是引起世界范围内胃肠功能紊乱的致病菌之一,一般通过摄人生的或者未煮熟的水产品进行传播。本研究旨在建立高效、可靠的PCR检测方法应用于食品中弗尼斯弧菌的快速检测。方法和结果:根据弗尼斯弧菌的toxS基因分别设计普通PCR引物及实时PCR引物、探针,建立普通PCR和实时荧光PCR方法,分别对两种方法的特异性和灵敏度进行比较分析,同时应用于384份食品样品检测。结果表明,建立的普通PCR和实时荧光PCR方法特异性良好,检测灵敏度分别为:2.4×10^3 CFU/ml和24 CFU/ml,并于5 h内完成整个检测过程,同时对384份食品进行检测,共检出6株阳性菌株。结论:本研究建立的PCR检测技术灵敏度高、特异性好,可应用于食品中弗尼斯弧菌的快速检测。     

FEPAS水平测试中两种致病菌的分离与鉴定

[目的]通过积极参加国际实验室间的技术交流,提高食品微生物检测水平、验证实验室检测能力.[方法]本文对2002年5月至2003年6月广州检验检疫局食品检测中心参加的英国中心科学实验室(CSL)食品微生物学能力验证计划(FEPAS),采用传统生化鉴定与API20E细菌编码鉴定系统相结合的鉴定方法,对沙门氏菌、副溶性弧菌进行分离鉴定.[结果]采用本文方法能准确鉴定出测试样品中的沙门氏菌、副溶性弧菌,水平测试取得满意结果.[结论]通过参加水平测试,表明广州检验检疫局食品检测中心食品微生物检测能力满足FEPAS要求,达到国家水平.     

"黑马"驰骋向明天--舟山检验检验局科技创新强实力的背后

舟山检验检疫局的《出口海产品副溶血性弧菌合检技术研究》和《浙江口岸粮谷类有害生物入侵防体系关键技术研究应用》两个项目顺利通过了浙江省科技厅的审核,这是舟山检验检疫局继《出口海产品主要危害因子快速、精准检测技术研究》科研项目获得浙江省科技厅通过并获得150万元科研基金后的另外两个科研成果奖通过省科技项目公示。