等温扩增技术在蚊媒传染性疾病检测方面的研究进展

蚊媒传染病是一类由蚊虫叮咬而进行病原体传播的自然疫源性疾病,预防和控制蚊媒传染病是极为困难的。等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行核酸扩增的技术,具有仪器依赖性低、检测效率高、灵敏性好、特异性强等特点,十分适合在野外环境或者疫病现场进行快速检测。本文就等温扩增技术中的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）、重组酶聚合酶扩增（recombinase-polymerase amplification,RPA）、重组酶介导等温扩增（recombinaseaid amplification ation,RAA）、依赖核酸序列的等温扩增（nucleic-acid sequence-based amplification,NASBA）、依赖解旋酶的等温扩增（helicase-dependent amplification,HDA）、交叉引物等温扩增（crossing-priming amplification,CPA）的原理、特点,以及其在寨卡病毒（ZIKV）、登革热病毒（DENV）、黄热病毒（YEV）、基孔肯雅病毒（CHIKV）...     

环介导等温扩增技术及其在食品检测中的应用

环介导等温扩增技术是一种具有特异性强、操作简便、快速、高效扩增等优点的等温核酸扩增方法,可在数十分钟内完成,通过使用链替换核酸聚合酶。基于此,就环介导等温扩增技术的原理及其在食源性病原微生物的检测和食品的转基因成分检测方面做一综述。     

LAMP技术及其在水生动物疫病诊断中的应用

环媒恒温扩增技术（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP）是一种新颖的核酸扩增方法，其基本原理是采用4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶，在65℃左右对核酸进行扩增，短时间扩增效率可达到10^9～10^10个拷贝。LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点，目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测，预计在动植物疫病检疫，尤其是水生动物疫病诊断领域有广阔的应用前景。     

荧光定量PCR技术及其在动物检疫中的应用

荧光定量PCR技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新的实时定量检测特定核酸技术．具有能实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、特异性好等优点,已广泛应用于医学和生物学领域。本文主要对荧光定量PCR技术在动物检疫领域的应用进行综述。     

PCR技术在快速检测食源性致病菌中的作用

现阶段,我国正以飞快的速度发展,食品微生物检测也由传统的培养方法向分子水平过渡。通过对聚合酶链式反应(PCR)技术的研究分析可知,可以利用这种先进的快速检测技术来检验食品中的食源性致病菌,本文归纳总结了几种不同的PCR技术,旨在提供一些关于食品微生物的快速监测技术。     

PCR技术在国内农产品及食品检测标准中的应用

随着PCR技术在农产品及食品检测方面的应用越来越广泛,其标准化程度也日益增加。本文综述了PCR技术在农产品食品致病菌检测、转基因成分检测、过敏源成分检测、病毒毒素检测等方面的贡献,旨在为PCR技术在多领域的发展提供新的思路。     

弓形虫半巢式PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的弓形虫RH株的P30基因（X14080）设计了3条特异性引物P1、P2和P3,建立了半巢式PCR检测体系,并将P1和P3的扩增产物克隆到pUCm-T载体上进行测序。结果表明,该体系能够扩增出约250bp的片段,P1和P3能扩增出约500bp的片段,克隆到pUCm-T载体上的504bp片段与P30基因（X14080）的序列同源性为99.8%。该PCR检测体系的特异性强,不能在健康猪血液、猪链球菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和猪圆环病毒DNA上扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为18fg。     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

食品微生物检测是食品检测重要环节,对提高食品安全性有着重要意义。聚合酶链式反应(PCR)因具备灵敏、快速、操作简单等优势被广泛应用在食品微生物检测中,其应用方面的研究也在增多,本文将对PCR技术在食品微生物检测中的具体运用进行分析,以体现其应用前景与价值。     

聚合酶链反应与自动荧光免疫酶标检测弯曲菌属的试验

弯曲菌属是一种引发人和动物食源性疾病的致病因子,涉及到食品的安全卫生.本文针对弯曲菌属的16sRNA建立快速检测鉴定弯曲菌属的PCR方法.并将其与自动酶联免疫荧光分析方法对原奶、水样、冻禽肉制品及宰前活禽的泄殖腔棉拭样品等多种样品进行检验,实验结果表明PCR扩增方法检测弯曲菌属具有灵敏、高效、特异、稳定的特点,与自动酶联免疫荧光分析方法有很好的互补性.     

多重PCR检测食品中转基因成分研究

[目的]建立检测转基因食品的多重PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测体系.[方法]针对转基因大豆、玉米、油菜的多个相对稳定的转基因元件,包括35S、NOS、EPSPS、Cry1A、NPTⅡ等基因,同时选定植物本身固有的大豆Lectin、玉米IVR、油菜Napin基因作为内源参照指示基因,设计、筛选出9对引物分别组成多重PCR,结合高灵敏度的聚丙烯酰胺凝胶电泳组成快速检测体系,对转基因食品进行检测,1～2天能完成整个检测过程.对珠海地区市售的大豆、玉米、油菜及其加工产品共185个样品中的转基因成分进行了初步调查.[结果]建立的多重PCR检测体系稳定可靠、特异性好,灵敏度高.调查的185份可疑食品样品中,转基因阳性率达27.6%.[结论]该检测体系快速可靠、灵敏准确、特异性好,且操作简便、成本低廉,是一种进行转基因食品检测的良好的技术模式.对珠海地区的转基因食品状况有了一定了解.     

弗尼斯弧菌PCR检测方法的建立及应用

目的:弗尼斯弧菌(Vibrio fumissii)是引起世界范围内胃肠功能紊乱的致病菌之一,一般通过摄人生的或者未煮熟的水产品进行传播。本研究旨在建立高效、可靠的PCR检测方法应用于食品中弗尼斯弧菌的快速检测。方法和结果:根据弗尼斯弧菌的toxS基因分别设计普通PCR引物及实时PCR引物、探针,建立普通PCR和实时荧光PCR方法,分别对两种方法的特异性和灵敏度进行比较分析,同时应用于384份食品样品检测。结果表明,建立的普通PCR和实时荧光PCR方法特异性良好,检测灵敏度分别为:2.4×10^3 CFU/ml和24 CFU/ml,并于5 h内完成整个检测过程,同时对384份食品进行检测,共检出6株阳性菌株。结论:本研究建立的PCR检测技术灵敏度高、特异性好,可应用于食品中弗尼斯弧菌的快速检测。     

新布尼亚病毒流行病学及检测方法的研究进展

着重对近期关于新布尼亚病毒基本特性、国内外流行病学特点、检测方法等方面的研究进展进行综述。应用原子力显微镜观测病毒的基本形貌获得相关数据;流行病学方面SFTS病例也陆续在日本、韩国等国家有发现和报道;检测方面除针对病毒不同基因组的荧光定量方法外,还有反转录环介导的等温扩增技术,以及通过将反转录交叉启动扩增和垂直流偶联快速准确的检测该病毒。     

略谈生物技术在食品检测中的应用

当代社会人类对食品安全的关注度越来越高,相应的食品检测技术也得到改善。其中生物技术也挥了重要的作用,PCR技术、酶联免疫吸附技术（ELISA）、PCR-免疫技术（PCR-ELISA）、免疫亲合色谱（IAC）、生物芯片（Biochips）等技术以各自的优点,被广泛地运用于食品检测领域。     

进口冷冻肉类沙门氏菌快速检验方法的研究

〔目的〕建立一种简便、快速、灵敏、准确的沙门氏菌检验方法。〔方法〕以传统标准方法为基础,与实时荧光PCR快速检测技术结合使用。〔结果〕检验进口冷冻禽畜肉样品3177份,检出沙门氏菌105份。〔结论〕该方法的应用使沙门氏菌阴性样品得以快速放行,沙门氏菌阳性样品的鉴定更准确、科学,在进口动物源性食品的检验检疫工作中具有意义。     

多重PCR检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究

建立快速检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的多重PCR(MPCR)方法.针对古典型霍乱弧菌(CVC)和埃尔托型霍乱弧菌(EVC)的共有序列霍乱肠毒素基因(ctxB)、CVC的毒力协调A亚单位基因(C-tcpA)、EVC的毒力协调A亚单位基因(E-tcpA)、副溶血性弧菌的热稳定性直接溶血素基因(tdh)为靶序列设计引物,建立多重PCR检测方法,相应扩增片段依次为564bp、617bp、471bp和202bp.用该方法检测EVC、CVC、副溶血性弧菌、非O1群霍乱弧菌、沙门氏菌等35株菌株表现出极好的特异性,对人工污染的罗非鱼、小虾、牡蛎、鱼鳃和鱼肠混合物的检出限EVC为2.2 cfu/mL、CVC为2.8 cfu/mL、副溶血性弧菌为6.5 cfu/mL,扩增片段表现出极好的特异性,整个实验过程8～10h完成.实验结果表明该方法是特异性强、省时、省力的检测方法.     

一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

真鲷虹彩病毒一直被世界动物卫生组织列入必报疫病病原目录,该病毒与传染性脾肾坏死病毒在基因序列上没有区别。为了快速检测病原,本文根据传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白序列中一段基因保守区设计引物和TaqMan探针,建立了真鲷虹彩病毒特异性实时荧光定量PCR检测方法,并利用PCR反应扩增出的衣壳蛋白基因制备了pGEM-T/真鲷虹彩病毒重组质粒作为标准阳性对照。经试验,反应在模板量102-106拷贝浓度范围内有较好的线性关系,检测限最低可达100拷贝数,而且与流行性造血器官坏死病毒、甲鱼虹彩病毒等6种水生动物病毒无交叉反应。结果证明该方法具有简便、快速、敏感、特异等特点,它的建立为该病诊断与病原检测提供了一个重要手段。     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

随着人们生活水平的提高,人们越来越重视食品微生物等的质量检测,伴随着近几年技术的不断发展,PCR技术也已经真正应用到食品微生物检测中。PCR技术拥有较强的特异性以及非常高强的灵敏度,同时具有检测准确等特点,被广泛地应用于食品微生物检测的各个领域。本文详细讨论PCR技术的使用原理,同时分析了该技术在食品微生物检测中的应用,希望可以推动我国食品微生物检测工作改革进程。     

食品沙门氏菌检测中PCR技术的应用分析

沙门氏菌已经成为了导致人们食物中毒的重要病源之一,因此创建有效的、科学的检测方法十分重要。而PCR技术主要是一种体外核酸扩增技术,其主要的优点是特异性高、敏感性强、简单快速等,目前已经被广泛运用到了生物学、医学等领域。本文简单阐述了PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用,并对PCR技术在沙门氏菌检测中的应用前景进行总结与展望,旨在提升沙门氏菌检测的质量与效率。     

牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立

[目的]针对牛传染性鼻气管炎病毒建立快速、准确而敏感的分子生物学检测方法,为进出口牛及其遗传物质的IBR检疫把关提供新的技术手段.[方法]采用新型实时荧光PCR技术原理,自行设计荧光标记引物建立检测方法,对不同牛传染性鼻气管炎病毒样品进行敏感性、特异性等检测试验,并与常规PCR检测方法进行比较.[结果]该方法能特异检测I BR病毒,检测时间包括核酸样品制备仅需2h,敏感性比常规PCR检测方法提高达103-104.[结论]本方法适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定.