Lea14基因原核表达载体的构建

Lea基因编码的LEA蛋白作为一种晚期胚胎丰富脱水保护蛋白,当植物处于逆境状态下时,其能够高水平的表达,通过降低其脱水的程度来达到抵御逆境的功能。为了进一步研究Lea14基因在逆境反应中的功能,本研究以拟南芥cDNA为模板,扩增出Lea14基因,再将Lea14基因克隆到原核表达载体pET-28a中,获得了Lea14基因的原核表达载体pET-28a-Lea14,测序结果表明：pET-28a-Lea14载体构建成功,可用于后续蛋白表达研究工作。     

鹅细小病毒延边株VP3基因原核表达质粒构建

本试验根据GenBank已公布的鹅细小病毒B株基因序列,设计了一对扩增VP3基因的特异性引物,对鹅细小病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了约为1500bp的VP3基因片段,将其回收纯化后与pMD-18T simple载体连接,然后进行克隆,经双酶切分析、PCR鉴定及测序,验证了所克隆的基因是鹅细小病毒VP3基因.用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-1原核表达载体中,获得重组质粒PGEM-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析,证实了重组质拉的正确性.     

西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究

[目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i＋亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果]（1）重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。（2）Western blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。（3）兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1：50000以上。（4）检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。     

PRRSV SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM（de-letingM）,克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组M蛋白。以纯化的重组M蛋白作为抗原,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立ELISA最佳工作条件。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验验证,结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。     

弓形虫P30基因的克隆及其在E．coli中的融合表达

【目的】研究弓形虫P30基因的克隆及其在E．coli中的融合表达。【方法】参照弓形虫P30序列设计引物,应用PCR技术扩增出弓形虫RH株P30的部分基因,将扩增产物克隆到pUCm—T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET-30a中,得到重组质粒pET-30a—P30并将其转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Westen-blot分析。【结果】P30基因在E．coli中得到了高效表达,表达的融合蛋白的分子量在30kDa附近,可以被鼠抗Toxoplasma gondii阳性血清特异性识别。【结论】该研究为Toxoplasma gondii的检测和疫苗研制及综合防制奠定了基础。     

以腺病毒为载体的基因疗法

C种类人类腺病毒血清型2（Ad2）和5（Ad5）载体拥有很多特点,从而使它们被广泛应用于体外与体内的基因传递中。本文叙述了腺病毒极其载体的生物学特性,腺病毒质粒的设计、载体的构建、生产及纯化,以及腺病毒载体的应用。     

马冠状病毒核衣壳蛋白基因片段的克隆及其表达

根据NCBI发表ECV核衣壳基因序列,用PCR方法扩增出ECV核衣壳基因片段,插入表达型载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX-ECV-N.以IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE凝胶电泳分析,结果成功表达了42KD GST-ECV-N融合蛋白.将ECV-N从pGEX-ECV-N载体亚克隆到的杆状病毒转移载体pFastBac1,筛选出重组转移载体pFastBac-ECV-N,在DH1O细菌的转座子作用下,构建重组穿梭质粒Bacmid-ECV-N.提取正确重组的穿梭质粒DNA转染Sf9昆虫细胞,结果获得了重组杆状病毒rBac-ECV-N.PCR和间接免疫荧光试验结果证明,ECV-N在Sf9细胞中得到了很好的表达.该结果对我国马群中冠状病毒感染的流行病学调查及深入研究有指导意义.     

论企业思想政治教育载体的构建

思想政治教育载体是连接着其他教育要素的桥梁,是实现教育目的、任务、目标与内容的手段与形式。在企业思想政治教育中,加强管理载体,创设活动载体,规划文化载体,运用传媒载体,开拓网络载体,是增强思想政治教育实效的科学选择。     

双表达系统制备新型冠状病毒N基因装甲RNA颗粒的研究

人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质粒pACYC-MS2-CoV2 N.将p...     

牛朊病毒正常蛋白特异性片段的克隆表达和纯化

[目的] 表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段.[方法] 用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达产物(包涵体)用8mol/L尿素溶解,在变性条件下用Cu2+氧化复性纯化.[结果] 重组表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,目的蛋白分子量约为15KD,Western blotting分析表明,目的蛋白具有朊病毒蛋白的抗原特性,变性条件下用Cu2+氧化复性纯化得到电泳纯的重组蛋白.[结论] 这一工作为下一步制备抗体和进行结构、功能的研究打下扎实基础.     

在构建和谐社会中思想政治教育工作的新思考——思想政治教育文化载体与构建和谐社会

我国十分重视思想政治教育,但在社会中仍有很多的问题存在.针对此现状我们要借助多种措施加以调控与监督,其中思想政治教育的文化载体是十分重要的一环.本文就加强和改进思想政治教育文化载体对构建和谐社会的一些思考.     

AD公司BRCA1/2基因检测服务营销策略研究

乳腺癌在我国女性发病是最高的,每年新发乳腺癌约28万,近几年随着生活和工作压力的增大,乳腺癌发病率逐年增高;我国卵巢癌的病人每年大约有5万,每年约2.2万人死于卵巢癌,死亡率非常高。而BRCA1/2基因是评估乳腺癌、卵巢癌发病风险的重要生物标志物,也是影响患者个体化治疗方案选择的生物标志物,所以BRCA检测具有重要的临...     

在构建和谐社会中思想政治教育工作的新思考——思想政治教育文化载体与构建和谐社会

我国十分重视思想政治教育,但在社会中仍有很多的问题存在.针对此现状我们要借助多种措施加以调控与监督,其中思想政治教育的文化载体是十分重要的一环.本文就加强和改进思想政治教育文化载体对构建和谐社会的一些思考.     

中国科学家成功克隆到竹子的部分成花基因

经过十余年研究，浙江林学院研究人员日前成功克隆到竹子的部分成花基因，在探究竹子开花奥秘的道路上迈出了重要一步。     

在构建和谐社会中思想政治教育工作的新思考——思想政治教育文化载体与构建和谐社会

我国十分重视思想政治教育,但在社会中仍有很多的问题存在。针对此现状我们要借助多种措施加以调控与监督,其中思想政治教育的文化载体是十分重要的一环。本文就加强和改进思想政治教育文化载体对构建和谐社会的一些思考。     

口蹄疫病毒3AB基因的表达及活性分析

通过重叠PCR合成口蹄疫病毒3AB基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/3AB,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.重组蛋白主要以包涵体的形式表达,将包涵体洗涤溶解后,采用Na2 离子金属螯合亲和层析柱纯化,逐步透析法复性.ELISA实验表明,目的蛋白能与猪口蹄疫阳性血清发生特异性反应.本研究为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件.     

试论进城务工人员利益表达机制的构建

目前我国进城务工人员群体人口已经达到1亿多,他们虽是城市建设的推进者,却没有城市居民的身份,缺乏城市居民的各种保障制度。进城务工人员利益表达机制的构建就是要建立一套行之有效的保障制度,使进城务工人员利益表达渠道畅通,采取规范的表达方式,达到利益的实现。     

和谐社会视角下的农民利益表达机制构建

建立科学的利益表达机制是公正合理地整合社会利益关系、构建和谐社会的基本前提。当前由于农民利益表达机制不健全,部分农民采取制度外的利益表达方式,使利益表达呈现无序状态,这需引起相关部门的高度警惕和高度重视。农民利益表达机制缺损主要表现在:农民利益表达权利不平等,农民利益表达组织载体不健全,农民利益表达渠道不顺畅。为此,我国应从完善保障农民享有平等利益表达权利的制度体系、提高农民的组织化程度,拓宽和疏通农民利益表达渠道等方面入手,重构农民利益表达机制。     

和谐社会视角下的农民利益表达机制构建

建立科学的利益表达机制是公正合理地整合社会利益关系、构建和谐社会的基本前提.当前由于农民利益表达机制不健全,部分农民采取制度外的利益表达方式,使利益表达呈现无序状态,这需引起相关部门的高度警惕和高度重视.农民利益表达机制缺损主要表现在:农民利益表达权利不平等,农民利益表达组织载体不健全,农民利益表达渠道不顺畅.为此,我国应从完善保障农民享有平等利益表达权利的制度体系、提高农民的组织化程度,拓宽和疏通农民利益表达渠道等方面入手,重构农民利益表达机制.     

广西巴马小型猪白细胞介素-2基因cDNA的克隆和序列分析

[目的] 对地方猪种广西巴马小型猪淋巴细胞IL-2基因进行克隆和序列分析,为进一步研究猪IL-2基因的功能及其在免疫调节方面的应用奠定基础.[方法] 将猪外周淋巴细胞进行体外培养,在刀豆球蛋白A(conA)刺激培养15h后,提取培养淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增巴马小型猪淋巴细胞白细胞介素-2(IL-2)基因,并连接到PMD18-T载体上,进行测序.[结果] 扩增的cDNA全长513个碱基,包含465个碱基开放阅读框架,编码155个氨基酸,分子量为16.98KD.[结论] 此cDNA与人、牛、山羊、绵羊、狗和鼠的IL-2基因核苷酸比较,同源性分别为85.2%、85.3%、83.4%、86.0%、84.2%和69.5%,与其他猪种IL-2基因核苷酸比较同源性为100%.