应用荧光RT—PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒

在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是最近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.     

7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法的比较和验证

[目的]比较和验证7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法,筛选出可用于实验室日常检测的方法,并证实实验室具有正确操作这些方法的能力。[方法]应用7种方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,包括5种SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法和2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒,用于方法比较和验证的参考样品包括猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、能力验证样品等不同来源的核酸。[结果]2种预期用于猪流感H1N1病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均能达到预期目的;3种预期用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均无法区分2009年新甲型H1N1流感病毒核酸和猪流感H1N1病毒核酸;2种Taqman探针荧光RT-PCR试剂盒均能正确检出2009年新甲型H1N1流感病毒核酸,但只有1种可检出能力验证阳性样品。[结论]5种SYBRGreen Ⅰ荧光RT-PCR法中有2种能用于猪流感H1N1病毒核酸的检测,另外3种不能用于新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒能用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸的检测。     

荧光RT—PCR检测活禽和禽组织中禽流感病毒的研究

本研究根据A型流感病毒的核酸保守区共有序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的通用型"一步法"检测活禽或禽产品中所有A型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测技术.该方法敏感性高、特异性强,与国际标准方法--世界动物卫生组织(OIE)确定的鸡胚病毒分离相比,敏感性基本一致,可直接用来检测咽喉/泄殖腔拭子和禽肉中的禽流感病毒,将检测时间从原来最短所需要的21d缩短为4h.     

应用荧光RT-PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒

在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是最近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.     

完善我国H7N9禽流感疫情防控的政策建议

禽流行性感冒是一个威胁人类健康并造成重大损失的动物疫病。2013年H7N9高致病性禽流感在全国范围内发生广泛传播。有效防控重大动物疫病,已经由生产性、技术性问题演变成为社会性、政治性问题,甚至是全球性问题。     

荧光RT-PCR快速检测技术检测鸭场环境中禽流感病毒

本研究应用荧光RT-PCR方法和鸡胚病毒分离方法,对两个禽流感发病后康复鸭场和一个健康鸭场采集的环境样品、部分健康和死鸭的拭子脏器进行检测,结果显示荧光RT-PCR方法同病毒分离方法的符合情况较好,阴性符合率为100%,病毒分离检出阳性样品经荧光RT-PCR检测全部为阳性.表明该方法在检测禽流感病毒的环境释放方面有重要应用价值,能够检出环境样品中的禽流感病毒.但其中的8份样品荧光RT-PCR显示为弱阳性或可疑,鸡胚分离的结果为阴性.推测这些样品中的病毒虽被灭活,但核酸并没有完全降解.     

对家鸭在禽流感传播中作用的新认识

新的研究结果显示，家鸭在高致病性H5N1禽流感在动物间以及人间的传播中起着十分重要的作用。实验结果证实，用2004．年分离到的几株H5N1病毒感染的家鸭，比用2003年分离到的毒株感染的家鸭要在更长的时间内排出更多的病毒，而且尽管大部分试验鸭存在这种现象，它们却没有表现出临床症状。     

检测禽流感病毒H5、H7和H9亚型的正向基因芯片的制备

通过分析比较禽流感病毒H5、H7和H9亚型不同毒株的基因组序列,设计出H5、H7和H9亚型特异性引物与探针,将扩增产物点制在芯片上,分别用H5、H7和H9亚型特异性探针与芯片杂交,研制出用于禽流感病毒H5、H7和H9亚型检测的正向杂交基因芯片,同时对正向基因芯片进行特异性、敏感性试验,并用该方法对待检样品进行了检测。结果表明,禽流感病毒正向基因芯片与新城疫病毒、传支病毒等6种禽类常见病毒无反应,其敏感性高于常规PCR方法。     

荧光RT—PCR在临床检测的应用

用建立的荧光RT-PCR检测中强毒力新城疫病毒的方法检测了5批临床样品,其中有禽肉、鸡咽喉拭子/泄殖腔拭子、鸽泄殖腔拭子,其中检出3份样品中有中强毒力新城疫病毒,用鸡胚分离方法并经毒力鉴定证实了检测结果的准确性.     

工业品品牌推广的5W1H分析

随着市场越来越规范、透明和公开化，企业面临的竞争也越来越激烈，品牌在工业品采购决策中的重要性越来越明显，不少企业开始意识到产品是一时的，只有品牌才有长久的生命力。品牌塑造成为工业品发展的必由之路。但由于各种原因，人们对工业品牌的建立和传播仍有不少误区，本文通过管理学当中5W1H分析方法就工业品的品牌建立和传播进行分析，通过对工业品牌传播的研究现状及问题的分析，进一步地看清工业品传播的本质所在。     

食品检测中的快速检测技术

随着社会和经济的不断发展,人们的生活水平不断提高,对于物质生活的需求也在不断提高,加上近年来不断出现的食品安全问题,人们对于食品的安全问题越来越重视。国家相关部门为了保证食品的安全,需要不定期地随机抽查食品进行检测,为了减轻检测部门的工作量和提高检测效率,在食品检测中出现了快速检测技术。本文将对食品检测中的快速检测技术的使用情况进行分析。     

工业品品牌推广的5W1H分析

随着市场越来越规范、透明和公开化,企业面临的竞争也越来越激烈,品牌在工业品采购决策中的重要性越来越明显,不少企业开始意识到产品是一时的,只有品牌才有长久的生命力。品牌塑造成为工业品发展的必由之路。但由于各种原因,人们对工业品牌的建立和传播仍有不少误区,本文通过管理学当中5W1H分析方法就工业品的品牌建立和传播进行分析,通过对工业品牌传播的研究现状及问题的分析,进一步地看清工业品传播的本质所在。     

基于甲型H1N1防御系统的数据分析系统算法描述

本文介绍了甲型H1Nl疫情防御决策支持系统的基本框架,重点描述了防御系统的数据分析系统算法。     

H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因克隆及分子进化分析

用RT-PCR方法,以1株H2N2亚型禽流感病毒分离株RNA为模板,扩增了HA全基因cDNA.将HAcDNA克隆于pMD18-T载体,并对其进行了测序.测序结果表明所克隆的1685bp核苷酸片段包含了全部HA基因阅读框架和上下游引物,编码区为1683个核苷酸,编码560个氨基酸.将其序列与其他8株H9N2亚型禽流感病毒HA基因及推导的氨基酸序列进行比较,其核苷酸同源性在85.3%～98.6%之间,氨基酸同源性在88.8%～98.9%之间,HA基因裂解位点氨基酸序列没有连续碱性氨基酸插入.本研究结果为国内基因工程疫苗等研究奠定了基础,同时通过分子进化分析揭示了各毒株间的亲源关系.     

应用RT—PCR检测灭活疫苗中口蹄疫病毒（核酸）

应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测口蹄疫灭活疫苗中的病毒RNA.设计相应于病毒基因组VP1序列保守区段20mer长度的引物.分离出灭活疫苗水相,萃取总RNA,反转录合成cDNA,进行PCR扩增和电泳检测扩增产物,本引物对扩增片段长度483bp,并设计一个Marker作为对照.     

企业5W1H新员工培养方案设计

随着人才竞争的日益加剧,企业对人才培养特别是新员工培养的重视程度正在提高。本文基于新员工培养的需求特点,提出5W1H培养方案框架,并给出分阶段、多角色协同的新员工培养体系建设思路。     

常用禽流感检测技术及其在检验检疫领域中的应用

通过对目前常用的禽流感检测技术如琼脂凝胶扩散试验(AGP)、血细胞凝集抑制试验(HI)、鸡胚病毒分离试验、FLISA方法、免疫荧光技术、RT-PCR技术和荧光RTPCR技术等试验方法和技术收集和分析,以及这些技术在检验检疫领域的应用,探讨了这些方法的优缺点和在检验检疫领域应用的实用性.最后重点介绍了在检验检疫领域最具有应用优势的荧光RT-PCR方法检测禽流感的技术.     

基于H5技术的童书出版创新研究

现阶段,H5已经在不同终端上发挥着自己独有的传播作用,主要呈现出的“灵活、互动、趣味”等特点,和童书的出版理念不谋而合.基于H5“快传播”“强交互”“有乐趣”等特征,有策略地通过H5打造童书,不仅能够使童书更具互动性,而且能丰富儿童群体的阅读方式,为数字出版的多元化发展探索了一条新路径.