人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行鉴定。将p EGFPRAD9A转染至肾癌细胞786-0中,荧光显微镜观察GFP-RAD9A融合蛋白的表达及亚细胞定位,Western blot免疫印记法检测转染p EGFP-RAD9A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9A基因编码区的真核表达载体p EGFP-RAD9A。与对照组相比,转染p EGFP-RAD9A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达,为研究RAD9A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。     

AKT1S1-pBABE重组逆转录病毒载体的构建及其稳定过表达细胞系的筛选

AKT Substrate 1 (AKT1S1)又名富含脯氨酸AKT1底物蛋白(proline-rich AKT1 substrate of 40 kDa,PRAS40)。作为经典的AKT1激酶底物,其在肿瘤生成过程中发挥着重要功能。为研究AKT1S1具体的相互作用蛋白以及作用通路,通过逆转录的方法获得了来自293T细胞的cDNA库。通过基因克隆的方法,成功克隆到AKT1S1基因,并将该基因插入至重组逆转录病毒载体pBABE-Flag质粒中,构建了Flag-AKT1S1-pBABE质粒。在辅助质粒的帮助下,在p293T细胞中包装病毒,侵染293T细胞,使用嘌呤霉素筛选目标细胞,经过蛋白质免疫印迹试验鉴定,获得了Flag-AKT1S1-pBABE稳定过表达细胞系,为下一步开展AKT1S1相互作用蛋白的质谱鉴定及其在肿瘤发生中的研究打下坚实基础。     

HCV结构蛋白重组杆状病毒表达载体的构建

丙型肝炎病毒(HCV)结构蛋白的核心蛋白(C)和包膜蛋白2(E2)合有多个T细胞表位和中和抗体表位，可诱导机体产生保护性免疫应答。该实验用PCR扩增HCV结构区基因，克隆到载体pFastBacl中，构建了重组杆状病毒表达载体pFB1-CEE，为HCV结构基因在真核细胞中的表达奠定了工作基础。     

发作性运动诱发性运动障碍患者的致病基因鉴定

为了鉴定散发性和家族性发作性运动诱发性运动障碍(Paroxysmal Kinesigenic Dyskinesia, PKD)的致病基因,收集散发性和家族性PKD病例,采集患者及亲属的外周血样本,提取基因组DNA,Sanger测序进行PRRT2基因的突变分析。从收集到的13例散发性PKD病例中鉴定到5个PRRT2突变,其中2个重复突变c.621dupA和c.649dupC,3个错义突变c.796CT,c.913GA和c.430CG,散发性患者中突变检测率为38.5%。另外,在1个家族性PKD家系中鉴定到1个PRRT2插入突变c.984insATC。在13个散发性PKD病例和1个家族性PKD家系中鉴定到6个PRRT2突变,这说明对家族性或散发性PKD患者进行PRRT2基因的突变分析有很重要的临床诊断意义。     

高表达HER2／neu小鼠乳腺癌肿瘤模型的建立

用不同数量的处于对数生长期的D2F2细胞接种于BALB／C小鼠的胸部皮下,建立高表达HER2／neu的小鼠乳腺癌肿瘤模型,并观察小鼠肿瘤的生长特点,应用免疫组织化学染色方法进行鉴定,归纳总结接种细胞数与肿瘤发生率的关系和肿瘤生长对小鼠生活状态的影响。结果显示：在接种细胞数大于5×10^9／L时,BALB／c小鼠的肿瘤模型全部建立成功,免疫组织化学结果显示,肿瘤组织高表达HER2／neu且D2F2细胞接种于BALB／C小鼠的肿瘤模型成功率与接种细胞数成正比。     

基于基因的医药研究和医药产业

基于基因的医药研究和医药产业基因序号和蛋白质序号之间的关系基因与生物体演变之间的关系基因代码(cDNA)基因诊断基因治疗基因工程无代码DNA(基因内区,其他序列DNA)包括:RNA,甲基化物,等等。基因治疗中的一个基本方法有性细胞工程与有性细胞修复     

经典瞬时受体电位通道蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达

背景与目的 经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道蛋白是一种非选择性阳离子通道蛋白家族,主要位于细胞膜表面,对钙离子具有通透性.研究认为,TRPC可能构成钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)并介导钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE),从而参与细胞的增殖、迁移、基因转录等生命活动.本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中TRPC mRNA及蛋白质的表达情况,初步探讨TRPC与NSCLC的可能关系.方法 建立TRPC1-7等7个家族成员的荧光定量PCR检测方法,对24例NSCLC患者的肿瘤组织进行了TRPC mRNA的定量检测,并通过蛋白质免疫印迹法对TRPC在蛋白质水平的表达进行了验证.结果 在NSCLC患者癌组织检测到TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA的表达,未检测到TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA的表达.肺癌组织中TRPC表达丰度为:TRPC1≈TRPC6＞TRPC3＞TRPC4.蛋白质免疫印迹证实了非小细胞肺癌组织中TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6在蛋白质水平的表达.结论 非小细胞肺癌组织在mRNA和蛋白质水平均表达TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,其中主要表达TRPC1和TRPC6,它们在构成肺癌细胞中SOCC、介导产生SOCE中的作用有待进一步研究.     

C—erbB-2、bcl-2禾口nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及意义

为探讨C—erbB-2、bcl-2及nm23蛋白在结肠癌组织中的表达及意义，采用免疫组化S—P法检测45例原发性结肠癌组织中C—erbB-2、bcl-2及nm23蛋白的表达。结果为bcl-2、nm23蛋白的表达与结肠癌肿块大小无关（P〉0．05），C—erbB-2的表达与结肠癌肿块大小相关（P〈0．01）；c—erbB-2、bcl-2与分化程度相关，nm23蛋白表达与肿瘤分化程度无关（P〉0．05）；C—erbB-2、bcl-2、nm23蛋白表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和远隔转移有关。结论为C—erbB-2、bcl-2和nm23蛋白异常表达在结肠癌发生发展和浸润转移中起重要作用；联合检测C—erbB-2、bcl-2和nm23蛋白对判断结肠癌患者预后和转移有一定的价值。     

金黄色葡萄球菌A蛋白基因的克隆、表达和纯化

通过PCR方法从金黄色葡萄球菌CowanⅠ菌株中克隆获得的A蛋白基因,与表达载体pET21a连接,将带有目的基因的质粒转化到表达宿主E.coli BL21(DE3)中并进行IPTG诱导表达,表达产物进行Q-sepharose纯化,初步获得了金黄色葡萄球菌A蛋白。     

我国科学家揭示胆固醇吸收的分子机制及新药原理

高胆固醇血症直接引起动脉粥样硬化，最终导致冠心病和脑中风等致死、致残性疾病。阐明胆固醇吸收的分子机制将为防治这类疾病提供重要基础。中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所宋保亮研究组发现，一个名叫NPCIL1的蛋白质像”载重卡车“一样在细胞表面和细胞内循环转运，将位于细胞外的胆固醇”运输”进细胞，并鉴定出这个过程依赖于细胞内的微丝系统和Clathrin／AP2蛋白复合体。     

K2O-B2O3-SiO2/Al2O3低温共烧陶瓷介质材料研究

采用1 500℃高温熔融水淬制得K2O-(n-x) B2O3-xSiO2玻璃粉,掺入Al2O3陶瓷填充料来制备K2O-(n-x)B2O3xSiO2/Al2O3低温共烧陶瓷介质材料.系统研究了玻璃基中SiO2/B2O3比例变化和玻璃掺入量对玻璃/陶瓷材料结构和性能的影响规律.研究结果表明,B2O3含量增加抑制了玻璃Y中SiO2析晶,使复合材料的介电常数、介电损耗在一定程度上有所减小,复合材料的抗弯强度也有一定程度的减小.     

有机掺杂的TiO2-SiO2复合薄膜的光学性能

在TiO2-SiO2溶胶-凝胶体系中掺杂表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB,采用溶胶-凝胶技术,通过简单提拉迅速蒸发溶剂、后期热处理去除表面活性剂的方法制备出具有纳米结构的有机掺杂TiO2-SiO2复合光学薄膜。利用红外光谱(IR)研究掺杂薄膜表面结构特征;紫外分光光度计UV-VIS-NIR研究不同实验条件下制备的复合薄膜吸收透过性的影响;利用反射式椭圆偏振光谱仪(ELLIP)测试薄膜的椭偏参数及Cauchy模型对椭偏参数进行计算机数据拟和,获得了掺杂的TiO2-SiO2复合薄膜光学常数在300-700nm波长范围的色散关系。     

溶胶-凝胶法制备SiO2/TiO2多层膜的研究

通过对溶胶、热处理温度以及溶胶-凝胶过程中反应和存放的环境温度及湿度等参数的调整,研究了在实验室条件下制备SiO2/TiO2多层膜的方法.已制备出折射率可调的溶胶,所镀制的SiO2薄膜折射率在1.18～1.41之间可调,TiO2薄膜折射率在1.80～2.20之间可调.采用椭偏仪、红外分光光度计、紫外-可见分光光度计等对所制得的多层膜的性能进行了研究,结果表明,实验条件对SiO2/TiO2多层膜的制备非常重要.     

多孔SiO2-TiO2复合薄膜的制备及研究

在多孔TiO2-SiO2溶胶一凝胶体系中掺杂表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB,采用溶胶-凝胶技术,通过简单提拉迅速蒸发溶剂、后期热处理去除表面活性剂的方法制备出具有纳米结构的有机掺多孔TiO2-SiO2复合光学薄膜．利用红外光谱（IR）研究掺杂薄膜表面结构特征;用SEM观察薄膜表面形貌;紫外分光光度计UV—VIS—NIR研究不同实验条件下制备的复合薄膜吸收透过性的影响．     

2×2算子矩阵的数值域扰动问题

给出了有限维H ilbert空间中2×2算子矩阵的数值域扰动定理的两种证明方法,并且将该定理推广到无限维H ilbert空间上的自伴算子。     

激辩C2B

企业面对的消费环境正发生巨大的变化,传统的商业运作逻辑,正遭遇着新一轮的挑战.其中一个明显的信号便是:消费者正开始主导商业的整个商业链条.在这一背景下,C2B模式逐渐受商家追捧,部分商家亦积极投身实践,但质疑声并不算少.究其缘由,每一个模式在兴起之初,都需要与现实的磨合与不断的创新,才能逐渐被接受,被肯定.     

新方法合成配合物草酸锌(Ⅱ)

在水热条件下以配体草酸与Zn(NO3)2.6H2O为反应原料,得到了配合物草酸锌。通过X-射线单晶衍射对其结构进行表征,结果表明,晶体属于三斜晶系,空间群为C2/c。晶胞参数为:Z=1,a=11.690(6),b=5.416(3),c=9.725(4),α=90,β=126.40(2),γ=9.919(2)°,V=495.6(4)3;R1=0.1507。晶体结构分析表明每个锌离子与6个氧原子配位(ZnO6),形成了八面体构型,其中与锌离子配位的6个氧原子中,有4个氧原子来自2个草酸根配体,另2个氧原子来自配位水分子,邻近的金属离子通过草酸根连接成一维链状结构,链间通过氢键作用连接为三维网络结构。     

有机掺杂的TiO2-SiO2复合薄膜的光学性能

在TiO2-SiO2溶胶-凝胶体系中掺杂表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB，采用溶胶-凝胶技术，通过简单提拉迅速蒸发溶剂、后期热处理去除表面活性剂的方法制备出具有纳米结构的有机掺杂TiO2-SiO2复合光学薄膜。利用红外光谱（IR）研究掺杂薄膜表面结构特征；紫外分光光度计UV—VIS—NIR研究不同实验条件下制备的复合薄膜吸收透过性的影响；利用反射式椭圆偏振光谱仪（ELLIP）测试薄膜的椭偏参数及Cauchy模型对椭偏参数进行计算机数据拟和，获得了掺杂的TiO2-SiO2复合薄膜光学常数在300—700hm波长范围的色散关系。     

TiO2/SiO2复合薄膜的制备及光学性能研究

采用溶胶-凝胶法制备TiO2/SiO2复合薄膜,在TiO2/SiO2溶胶-凝胶体系中掺杂表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB,通过简单提拉、迅速蒸发溶剂、后期热处理去除表面活性剂的方法制备出具有纳米结构的有机掺杂TiO2/SiO2复合光学薄膜.利用红外光谱(IR)研究掺杂薄膜表面的结构特征;利用紫外分光光度计UV-VIS-NIR研究不同实验条件下制备的复合薄膜吸收透过性的影响;结合椭偏仪和分光光度计等手段对实验结果进行测量,研究了在实验室条件下TiO2/SiO2复合薄膜的性能及制备方法,结果表明,实验条件对TiO2/SiO2复合薄膜的制备非常重要.