弓形虫PCR检测方法的建立

针对人畜共患的寄生虫弓形虫设计特异引物,建立PCR快速检测鉴定方法,并用临床样品和其他6种病原体验证检测方法的特异性、灵敏性等参数,证实了该方法的准确性、可用性.     

PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因

[目的] 建立锦鲤疱疹病毒的PCR检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序.[方法] 分别利用蛋白酶K-酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA,并设计两对特异性引物进行PCR检测.[结果] 异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K-酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段.同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物.[结论] 本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的PCR检测方法.     

应用荧光RT—PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒

在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是最近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.     

PCR技术在食品检测中的应用探究

食品安全问题事关人民群众的切身利益,食品安全的维护对稳定人民生活、促进社会发展具有重要作用。PCR技术以其敏感性、特异性、简便、快速的优点,已广泛应用于微生物检测,尤其在检测培养困难的细菌和鉴定抗原结构复杂的细菌过程中,具有常规方法无法比拟的优越性。     

PCR技术在食品微生物检测中的应用

食品微生物检测是食品检测重要环节,对提高食品安全性有着重要意义。聚合酶链式反应(PCR)因具备灵敏、快速、操作简单等优势被广泛应用在食品微生物检测中,其应用方面的研究也在增多,本文将对PCR技术在食品微生物检测中的具体运用进行分析,以体现其应用前景与价值。     

多重PCR检测食品中转基因成分研究

[目的]建立检测转基因食品的多重PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测体系.[方法]针对转基因大豆、玉米、油菜的多个相对稳定的转基因元件,包括35S、NOS、EPSPS、Cry1A、NPTⅡ等基因,同时选定植物本身固有的大豆Lectin、玉米IVR、油菜Napin基因作为内源参照指示基因,设计、筛选出9对引物分别组成多重PCR,结合高灵敏度的聚丙烯酰胺凝胶电泳组成快速检测体系,对转基因食品进行检测,1～2天能完成整个检测过程.对珠海地区市售的大豆、玉米、油菜及其加工产品共185个样品中的转基因成分进行了初步调查.[结果]建立的多重PCR检测体系稳定可靠、特异性好,灵敏度高.调查的185份可疑食品样品中,转基因阳性率达27.6%.[结论]该检测体系快速可靠、灵敏准确、特异性好,且操作简便、成本低廉,是一种进行转基因食品检测的良好的技术模式.对珠海地区的转基因食品状况有了一定了解.     

犬钩端螺旋体PCR检测方法的应用

采用荷兰皇家热带病研究院WHO钩体病参考中心设计的一对引物进行普通PCR检测。经反应条件与体系优化,对犬钩端螺旋体与霍乱弧菌,伤寒杆菌,沙门氏菌,产毒性大肠杆菌,致病性大肠杆菌,痢疾,溶藻菌,非O1、O139霍乱弧菌,副溶血性弧菌,O157菌进行检测,除犬钩端螺旋体以外均为阴性,表明钩端螺旋体PCR检测方法与以上菌株无交叉反应,证明了该钩端螺旋体PCR检测方法具有特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示PCR方法可以检测到的核酸浓度最低为3×10³拷贝。此结果证明该犬钩端螺旋体PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,可用于犬钩端螺旋体样品的检测。     

PCR技术在快速检测食源性致病菌中的作用

现阶段,我国正以飞快的速度发展,食品微生物检测也由传统的培养方法向分子水平过渡。通过对聚合酶链式反应(PCR)技术的研究分析可知,可以利用这种先进的快速检测技术来检验食品中的食源性致病菌,本文归纳总结了几种不同的PCR技术,旨在提供一些关于食品微生物的快速监测技术。     

应用多重PCR同时检测多种转基因成分

以多重PCR方法在反应体系中加入1对到3对引物同时检测转基因矮牵牛与阳性对照质粒中的1～3个外源基因,包括花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子(NOS)、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NptⅡ)编码基因.结果表明多重PCR方法不但可以提高检测效率、降低检测成本,还可以有效防止假阳性.是一种值得推广的方法.     

应用PCR技术同步检测动物产品中的4种致病菌

本研究根据沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157H7及空肠弯曲菌的不同培养特性,将单一PCR及复合PCR的方法相结合,设计合成了4种针对性的引物,通过检测4种菌不同的特异性基因片段,建立了一种同步检测的PCR方法,具有简便、快速、准确的特点.对95份实物样品检测,结果与经典方法一致,有较好的应用价值.     

实时荧光PCR法检测食品中芝麻过敏原成分

食品安全是现代社会不容忽视的一个问题,也是食品质量最重要、最基本的组成部分,食物过敏就属于食品安全问题。本文阐述食品过敏机制和过敏原特点,并利用实时荧光PCR法检测食品中芝麻过敏原成分,以供相关人员参考。     

PCR技术在口岸传染病检测中的应用

PCR技术即聚合酶链式反应,是一种体外酶促合成特定基因或DNA片段的分子生物学技术,因其灵敏、快速、简便、特异性强等优点,现已广泛应用于多种疫源性疾病的诊断、疫情研判及感染溯源等领域。本文叙述了C-PCR、荧光定量RT-PCR、微滴式数字PCR等技术在甲型流感病毒、中东呼吸综合征冠状病毒及新型冠状病毒中的检测运用,为口岸传染病检测提供思路PCR技术虽应用广泛,但其发展和运用受多种因素的影响有出现假阴性和假阳性结果的可能,利用实验室的质量控制手段来保证检测结果能从根本上减少误差产生的概率,从而为传染病的准确检出提供有力的保证。     

荧光RT—PCR在临床检测的应用

用建立的荧光RT-PCR检测中强毒力新城疫病毒的方法检测了5批临床样品,其中有禽肉、鸡咽喉拭子/泄殖腔拭子、鸽泄殖腔拭子,其中检出3份样品中有中强毒力新城疫病毒,用鸡胚分离方法并经毒力鉴定证实了检测结果的准确性.     

主要呼吸道腺病毒荧光定量PCR检测方法建立与应用

本研究针对引I起人呼吸道感染的腺病毒B组(3型、7型、11型、14型、16型、21型、50型、55型)、C组(1型、2型、5型、6型、57型)和E组(4型)设计2组通用型引物探针,建立了主要呼吸道腺病毒荧光定量PCR检测方法,并测试方法的灵敏度、重复性、特异性,同时应用于临床样本测试.结果显示,该方法可特异性检出呼吸道...     

旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究

根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×10^2拷贝（10^-5条旋毛虫）,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X＋19.70,相关系数R^2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%（n=20）,同一组不同浓度梯度样本（n=9）间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。     

食源性致病微生物中应用于PCR检测的靶基因

介绍了8种常见食源性微生物致病性大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的PCR法检测中常用的靶基因,主要是一些编码特征毒素和其他的毒力因子的基因.     

利用PCR技术检测转基因大豆RoundupReady的研究

1前言 随着分子生物技术的迅速发展,转基因产品已逐步从实验研究走向商品化生产.迄今为止,大约有近百种转基因植物进行了商业种植,有千余种被批准进行田间实验,涉及的植物有50多种,植物基因工程为发展高科技农业、解决世界粮食短缺问题提供了有效手段.     

应用PCR技术快速检测水产品中副溶血弧菌的研究

1前言 副溶血弧菌(Vibrin Parahemolyicus)是海洋和盐湖中微生物区系的重要成员,食品卫生上的重要病原菌.由于水产品自身携带该菌,给该菌在水产品加工中的预防带来难度.近年来,我国出口的水产品曾有多起因副溶血弧菌超标引起的退货、销毁、取消注册代号的恶性事件发生.欧盟3 6 8决议(97/368EC)和587号决议(97/587/EC)更是要求对原产于中国的水产品批批检验副溶血弧菌.流行的副溶血弧菌检测方法-培养法检验周期较长,往往需7天以上才能报告结果,从食品的特定货架期、高额储藏费用和适应食品贸易的角度,我们探索了用PCR技术检测食品中副溶血弧菌的方法.该类研究已有报道,但多集中在实验室方法探索上[1-9],真正从应用的角度对食品中副溶血弧菌的PCR检测方法研究鲜有报道.