奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法研究

[目的] 建立和提出奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法.[方法] 利用细菌16S和23S rDNA的保守区作为通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S～23S rDNA间区序列(ISR)进行了扩增和测序,在比较阪崎肠杆菌与其近源株16S1～23S rDNA间区序列的基础上,设计了11条阪崎肠杆菌PCR检测引物,组合成30对PCR引物并筛选出一对阪崎肠杆菌PCR检测的特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法.[结果] 用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为2.2～5.4cfu/100g,灵敏度高;新建的PCR方法与FDA BAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合.[结论] 本文提出的奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法填补了国内空白,达到了国际先进水平,可在实际工作中推广.     

婴儿食品中阪崎肠杆菌检测方法的改进

目前常用的阪崎肠杆菌的分离鉴定方法存在许多不足。通过改进目前常用方法,使得选择性大大提高,可疑菌落易于识别,检测周期缩短,可检测出仅含1个阪崎肠杆菌的接种样品。改进方法与原标准方法的定性验证实验结果一致,定量重复实验结果良好。用改进方法开展市场上婴幼儿奶粉、婴幼儿补充食品中的阪崎肠杆菌污染情况调查,婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌检出率为7．3％,婴幼儿补充食品中阪崎肠杆菌检出率为25％。     

阪崎肠杆菌检测方法的研究进展与优化

阪崎肠杆菌（Enterobacter Sakazakii）是乳制品中近几年新发现的一种致病菌,是肠杆菌科的一种。目前国际社会上针对该菌的研究无论是在医学还是公共卫生学上都具有极其重要的意义。阪崎肠杆菌菌型繁多,传统的血清学鉴定、选择性和非选择性增菌等检测方法存在灵敏度低、耗时长等缺点,难以满足食品及,临床应用。国内外学者对阪崎肠杆菌检测技术进行了大量研究,并取得了一定的进展。检测方法主要分为以免疫学为基础的方法、分子生物学方法、联合方法三类方法。该文就这三类方法研究进展进行概述。     

溶血曼氏杆菌微滴式数字PCR定量检测方法的建立及应用

基于溶血曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.haemolytica)单拷贝基因sodA,通过优化反应条件和体系,建立了溶血曼氏杆菌ddPCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)定量检测方法。结果显示,所建立的溶血曼氏杆菌ddPCR方法特异性好;检出限(limit of detection,LOD)和定量值(limit of quantification,LOQ)均为170 CFU/m L,3个平行检测的变异系数均小于25%,重复性良好。针对系列稀释的溶血曼氏杆菌纯菌液,ddPCR法能够实现对溶血曼氏杆菌的准确定量,与平板计数结果偏差小于4%。运用所建立的ddPCR方法对15份牛鼻拭子样品进行检测,结果在10份样品中检出溶血曼氏杆菌,含量在3.07×10²～9.52×10⁴ CFU/mL之间。本研究所建立的ddPCR方法适用于临床鼻拭子样品中溶血曼氏杆菌的精准定量分析,可为牛群中溶血曼氏杆菌的监测和治疗提供有效的技术支持。     

显色培养基分离婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的效果比对和应用

分析广东环凯公司阪崎肠杆菌显色培养基(CRM006)和科玛嘉阪崎肠杆菌显色培养基(DFI)的实验应用效果,为检测婴幼儿乳粉中的阪崎肠杆菌选用培养基提供依据。按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》(GB/T 4789.40-2010)分离及生化鉴定阪崎肠杆菌,并分析培养基的分离效果。结果表明,36份样品中,检出阪崎肠杆菌2份,检出率为5.56%;CRM平板和DFI平板阳性符合率为100%;疑似菌落检出率分别为16.67%和13.89%(P0.05)。CRM平板和DFI平板用于培养分离阪崎肠杆菌均有良好效果。