昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT—PCR检测方法的建立

[目的]建立昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法。[方法]利用Beacon Designer7．0软件设计引物,以人工合成昆津病毒巴马哈森林病毒E基因的片段作为模板,验证该方法的灵敏度及特异性。[结果]最低检出限：昆津病毒1．83106copies／μL,巴马哈森林病毒2．02×106copies／μL。[结论]建立的昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法具有灵敏度高、特异性好等特点,适合于昆津病毒和巴马哈森林病毒的快速检测。     

产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学检测方法研究

[目的]建立快速准确检测食品中产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学方法.[方法]针对产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的stx1、stx2、eaeA、hlyA 4种毒力基因,设计了4对特异性引物.[结果]采用多重PCR(multiplexPCR)方法,得到614bp、779bp、450bp和300bp 4条片断.[结论]实验结果表明,本文建立的mPCR方法较常规的大肠杆菌检测方法简便、快速、灵敏度高,灵敏度可达15cfu/mL.     

多重PCR检测食品中转基因成分研究

[目的]建立检测转基因食品的多重PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测体系.[方法]针对转基因大豆、玉米、油菜的多个相对稳定的转基因元件,包括35S、NOS、EPSPS、Cry1A、NPTⅡ等基因,同时选定植物本身固有的大豆Lectin、玉米IVR、油菜Napin基因作为内源参照指示基因,设计、筛选出9对引物分别组成多重PCR,结合高灵敏度的聚丙烯酰胺凝胶电泳组成快速检测体系,对转基因食品进行检测,1～2天能完成整个检测过程.对珠海地区市售的大豆、玉米、油菜及其加工产品共185个样品中的转基因成分进行了初步调查.[结果]建立的多重PCR检测体系稳定可靠、特异性好,灵敏度高.调查的185份可疑食品样品中,转基因阳性率达27.6%.[结论]该检测体系快速可靠、灵敏准确、特异性好,且操作简便、成本低廉,是一种进行转基因食品检测的良好的技术模式.对珠海地区的转基因食品状况有了一定了解.     

实时RT-LAMP与实时荧光RT-PCR检测贝类中GII型诺如病毒的研究

[目的]建立、评价GII型诺如病毒的一步法实时RT-LAMP快速检测方法。[方法]选取GII型诺如病毒ORF1与ORF2接头处高度保守基因序列设计RT-LAMP引物,经条件优化,分析该方法的检测灵敏性和特异性,并与实时荧光RT-PCR进行比较。[结果]GII型诺如病毒RT-LAMP的最佳反应条件是65℃,内外引物浓度比达1：10。该方法同其余常见食源性病毒没有交叉反应。对RNA参照品其检测低限可达10个RNA拷贝/反应,同实时荧光RT-P C R的检测水平相当;在人工感染的牡蛎和缢蛏中,RT-LAMP较实时荧光RT-P C R的检测灵敏度略低10倍。[结论]本研究所建立的RT-LAMP方法为GII型诺如病毒提供了一种灵敏、快速且简便的检测方法。     

应用荧光PCR方法检测食品中的单核细胞增生李斯特氏菌

[目的]发展一种快速、敏感、特异的荧光PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌.[方法]针对单增李斯特氏菌溶血素基因(hly A),设计特异的引物和TaqMan探针,优化体系,建立荧光PCR检测方法,对该方法的特异性和敏感性进行评价,并且在对188个进出口食品样本的检测中与传统方法进行对比.[结果]经对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株检测,结果显示该方法具有良好的特异性.灵敏度检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h.在实际样本的检测中,检测结果与传统方法结果一致.[结论]该方法能快速、简便和准确地检出单核细胞增生李斯氏菌,具有良好的应用前景.     

十二种食源性致病菌可见光基因芯片检测方法的建立

[目的]利用可见光基因芯片技术,针对12种常见食源性致病菌,建立快速、准确、高通量的诊断方法。[方法]设计靶细菌16S rDNA和23S rDNA的通用引物,反向引物5’端标记生物素;特异寡核苷酸探针设计在两对引物之间的可变区,5’端标记氨基基团。将探针点样于固相载体制备基因芯片,优化PCR反应体系后,PCR产物与芯片点制探针区域进行杂交,然后通过化学显色直接观察结果,并评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性等指标。收集临床样本28例,同时制备双盲模拟污染样本10例,对检测方法进一步评价。[结果]：本试验所建立的基因芯片方法可同时检测志贺菌、耶尔森氏菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单增李氏菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7等12种食源性致病菌,特异性高,操作简便;针对纯培养食源性致病菌反应体系的灵敏度为10^3cfu/mL,模拟样本的灵敏度为10^4cfu/mL;重复性好;采用可见光基因芯片方法检测28例临床样本,26例与常规培养方法结果完全一致,符合率达到92.9%;双盲模拟样本的检测符合率达到100%。     

GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立

[目的] 建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法.[方法] 利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1512).将2.80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测.[结果] 显色反应良好,条带稳定,检测获得成功.[结论] 其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查.     

O9群沙门氏菌胶体金检测试剂盒的研制

[目的] 为快速检测O9群沙门氏菌研制检测试剂盒.[方法] 应用胶体金免疫层析法研制O9群沙门氏菌胶体金检测试剂盒,并与国标法进行水平测试.[结果] 该试剂盒测定的结果与国标法基本一致,且该试剂盒具有灵敏度高,特异性强,无交叉反应,精密准确.[结论] 可用于食物中毒流行病调查、食品卫生、动物疫病监测中的快速检测.     

抗草甘膦转基因大豆DNA标准分子构建及多重荧光PCR检测体系的建立

[目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS外源基因的质粒,设计TaqMan探针建立三重荧光PCR检测体系。[结果]成功构建融合抗草甘膦转基因大豆3种外源基因质粒PMD18T/SOY,并建立三重荧光PCR检测体系,检测限值为10-3 ng/μL,线性关系良好r,2在0.998以上。[结论]构建同时含有多种外源基因的质粒作为转基因检测的阳性参照物并建立多重PCR检测体系,不仅可降低试剂成本、节省时间和人力,而且可以减少PCR反应次数和加样环节,降低PCR污染的几率。     

五种马病毒基因芯片检测方法的建立

[目的]既保护我国畜牧业的安全,又在检验检疫口岸实现马匹的快速通关,探索建立马病毒基因芯片检测方法。[方法]采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒核酸序列、通过分子克隆技术获得西尼罗热、马冠状病毒、马鼻肺炎病毒和马动脉炎病毒的特异基因片段,设计合成五种马病病毒高度保守的特异性核酸序列作为检测探针点制于芯片上,再用多重不对称PCR以拼接、克隆的核酸序列为模板扩增目的片段,与芯片上探针特异结合。[结果]建立了五种病毒的基因芯片快速检测方法,实现了五种马病同时检测。[结论]本研究建立的芯片快速高通量基因芯片检测方法可应用于大规模出入境马属动物的快速筛查。     

医用手套表面残余矿物粉末快速鉴别技术研究

[目的]建立了一种采用XRD粉末衍射快速鉴别医用手套表面残余矿物粉末的方法。[方法]乳胶手套表面残余粉末通过水洗、过滤收集后,采用XRD方法测定了三种不同生产厂家的医用手套表面残余粉末。[结果]三种医用有粉手套的表面残余粉末均为矿物混合物粉末,含有滑石、白云石、菱镁矿、绿泥石、石英和方解石等几种矿物质,从XRD谱图中很容易辨别出矿物粉末和玉米淀粉。[结论]XRD是一种快速、准确的鉴别一次性医用有粉手套表面残余矿物粉末的方法。     

石墨炉原子吸收分光光度法测定水样中铬的不确定度

[目的]通过对影响测定结果的不确定度因素的分析和量化,评价石墨炉原子吸收光谱法测定水样中铬的不确定度。[方法]调节仪器最佳测定条件,测定铬标准工作溶液系列并依据工作软件自动建立工作曲线和数学模型;连续测量10次水样,根据标准曲线获得未知样品铬浓度;分析石墨炉原子吸收分光光度法测定水样中铬的误差性质和来源,确定不确定度的主要因素,计算水样中铬的测量不确定度。[结果]扩展不确定度U95=0.016mg/L（Veff=20）。[结论]根据分析仪器的测定数据输出方式建立数学模型,进行不确定度评定,方法直观简明,与实际工作相符合。     

基于SAS的调整人群归因危险度评估法在口岸流行病学调查中的应用研究

[目的]探索调整人群归因危险度评估法在口岸流行病学调查中的应用。[方法]基于回归模型的调整RR估计加入到PAR估计中,以一整套公式计算调整控制一个或多个变量后的PAR指标,评估多因素影响的口岸流行病发生频率及控制效果,并采用国际权威的统计分析标准软件SAS分析平台进行编程实现。[结果]以宁波口岸某病流行病学调查资料为数据源,对与该病相关的四种风险影响因素由计算机分别自动计算调整人群归因危险度,在校正其他三种因素的基础上,评估每种风险因素所致的危害程度,结果为风险因素A所致的危害占11.8%,风险因素B占30.8%,风险因素C占15.9%,风险因素D占38.2%。[结论]调整人群归因危险度能够评估导致口岸传染病流行风险因素的单独效应,可作为评价流行病发生与控制效果的有效评估方法。     

Willingness to consume and produce transgenic bananas in Costa Rica

An exploratory study of the willingness to produce and consume transgenic bananas was carried out in Costa Rica. Transgenic crops are plants with novel genes incorporated into their genome through the use of genetic engineering techniques. Farm managers’ opinions were gathered using faxed questionnaires while final consumers’ opinions were obtained through personal intercept interviews. Consumers expressed a lack of knowledge about transgenic crops and had received non‐favour but also non‐negative information through the media about their adoption. The results of a probit regression model show that, other things being equal, younger, wealthier consumers, with higher levels of education, with smaller households are more likely to consume transgenic bananas. All producers included in the study consider they would adopt a new transgenic variety. Producers’ willingness to pay for such a variety would depend on its capacity to reduce pest management costs and is estimated to range between $500 and $999 per hectare. This study stresses the potential for development and adoption of a new transgenic variety that would alleviate the current issues faced by banana farmers. On the other hand, final consumers should be better informed on the nature of such products, their benefits and risks.     

酶联免疫分析法测定猪肠衣中磺胺二甲基嘧啶残留量

建立测定猪肠衣中磺胺二甲基嘧啶残留量的ELISA分析法。方法检测低限为5μg/kg;在5μg/kg、20μg/kg和100μg/kg三个添加水平进行加标回收试验,回收率分别为82.0%-96.0%、87.5%-102.0%和83.9%-105%;重复性试验：CV%分别为5.3%、5.3%和8.2%;重现性试验：CV%分别为8.0%、7.9%和7.5%。本方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于猪肠衣中磺胺二甲基嘧啶残留量的快速检测。     

弧菌显色培养基（ChromID Vibrio）对霍乱弧菌检测效果的探讨

[目的]探讨梅里埃弧菌显色培养基（简称ChromID Vibrio）对霍乱弧菌的检测效果。[方法]通过ChromID Vibrio弧菌显色培养基同硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖（简称TCBS）琼脂培养基进行比对,采用阳性菌株直接平板计数、人工污染样品和实际样品检测的方法,对ChromID Vibrio的灵敏性、特异性和检测效果进行了评价。[结果]ChromID Vibrio弧菌显色培养基上霍乱弧菌典型菌落是蓝绿色。阳性菌株直接平板计数及人工污染试验均表明ChromID Vibrio平板的敏感性均比TCBS平板高。对采集的300份实际样品进行检测,都未检出霍乱弧菌。[结论]ChromID Vibrio具有较好的灵敏性、特异性,能提高霍乱弧菌检测效率。     

MALDI Biotyper高通量微生物鉴定系统在台湾进口鳖蛋检疫中的初步应用

[目的]应用MALDI-TOF-MS和Biotyper分析软件对台湾进口的鳖蛋进行携带病原菌的检测。[方法]按照病原菌检测标准进行培养,选取可疑菌株,肉汤培养后,按照MALDI-TOF-MS要求进行样品制备、点靶以及样品质谱图的获取,并运用Biotyper分析软件对所获取的质谱图进行分析。[结论]应用MALDI-TOF-MS方法从进口鳖蛋中分离出绿脓杆菌、奇异变形杆菌、肺炎克雷伯氏菌等致病菌,为进出口商、检验机构及其他相关部门敲响警钟。此鉴定方法简单快速,能够加快鳖蛋的通关速度,为两岸建设作贡献。     

副溶血性弧菌REP-PCR分型研究

[目的]了解食品中分离的副溶血性弧菌REP-PCR分子型别,探讨DiversiLab系统对副溶血性弧菌的分型能力。[方法]采用以REP-PCR为原理的DiversiLab系统对食品中分离的21株副溶血性弧菌进行分子分型,分析菌株之间的相关性,并与PFGE分型结果比较。[结果]DiversiLab将21株副溶血性弧菌分成16个群,菌株之间的相似度64.5%-99.1%,分离自相同食品中的副溶血性弧菌在REP-PCR聚类图中分在同一个群;7株副溶血性弧菌PFGE分型结果产生7种不同的PFGE型别,菌株之间不相关,在REP-PCR聚类图中分在7个不同的群中。[结论]食品中分离的副溶血性弧菌REP-PCR型别分散,未表现出地区特异性;DiversiLab简便、快速、分辨率高,可应用于副溶血性弧菌的快速分型和溯源。     

两种SPE净化测定克伦特罗等β2-受体激动剂的基质效应

[目的]本文考察了MCX固相萃取柱和C18-SCX串联柱净化,液相色谱-串联质谱法测定猪肝、猪肉及鱼肉等样品中克伦特罗（CL）、沙丁胺醇（SAL）和特布他林（TE）等β2-受体激动剂的基质效应。[方法]样品采用乙酸铵缓冲溶液酶解提取,并分别经过MCX固相萃取柱和C18-SCX串联柱净化,洗脱液经浓缩吹干后,残渣用标准溶液溶解定容,LC-MS/MS测定。[结果]两种净化方法均存在较强的基质效应。[结论]在样品定量时需要采用基质匹配标准溶液或同位素内标及其他净化手段来消除基质效应。