食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法所用引物的特异性比较

[目的]对食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法目前常用的引物进行特异性比较.[方法]用36株单增李斯特氏菌、非单增李斯特氏菌以及其他菌属的细菌,将我室的2对引物与其他作者设计的5对引物进行特异性比较.[结果]我室采用的引物FM1/FM2只对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段,引物LI1/U1只对所有李斯特氏菌属的细菌扩增出特异性片段.其他引物除了对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段外,对其他细菌也会扩增出与特异性片段大小一致的片段.[结论]单增李斯特氏菌的特异引物FM1/FM2与李斯特氏菌属的特异引物U1/LI1组合应用,可以成为检测单增李斯特氏菌的最佳方法.     

肉骨粉中羊源性成分检测方法研究

发现行业标准SN1119-2002检测羊源性成分的引物与山羊线粒体基因完全匹配,而与绵羊线粒体基因有7个碱基不匹配,对该引物的特异性和灵敏度进行了分析,发现该引物检测绵羊成分的灵敏度较低.根据绵羊线粒体基因序列重新设计了引物OV1/OV2、OV3/OV4,并对其特异性和灵敏度进行了分析.用以上引物对进口肉骨粉进行了检测,从14批进口肉骨粉中检测出羊源性成分,美国检疫专家确认了中方的检测结果,这些肉骨粉已经或正在被退运出境.     

粉丝中植物源性成分的PCR定性检测方法研究

本研究针对绿豆、豌豆、玉米、红薯与马铃薯这5个物种的特异基因序列,设计出多对引物,并分别从每个物种中选择特异与扩增效率最好的一对引物进行实验.通过特异性实验、重复性实验及灵敏性实验后,最终获得5对引物,即绿豆引物MP4、豌豆引物PEP2、玉米引物CP1、红薯引物SP2、马铃薯引物POP2.采用这5对引物进行PCR扩增,就可以检测出粉丝中这5种植物源性成分.本方法准确、灵敏、快速,检测的灵敏度达5%.     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT—PCR鉴别诊断方法

本研究通过对不同毒力的新城疫病毒(NDV)的融合蛋白基因(F基因)核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计出3对引物P1+P2,P1+P3,P1+P4,建立了一种可以迅速鉴定新城疫病毒并且同时鉴别毒株毒力强弱的RT-PCR方法.引物P1+P2能特异性地对所有新城疫病毒可扩增出一条362bp的片段,引物P1+P3能特异性地针对所有新城疫强毒株扩增出一条254bp的片段,引物P1+P4能特异性地针对所有新城疫弱毒株扩增出一条254bp的片段,整个试验过程可在6小时内完成.对实验室分离的4株病毒进行检测,结果同常规检测方法的结果一致.     

PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因

[目的] 建立锦鲤疱疹病毒的PCR检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序.[方法] 分别利用蛋白酶K-酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA,并设计两对特异性引物进行PCR检测.[结果] 异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K-酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段.同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物.[结论] 本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的PCR检测方法.     

黑麦草腥黑穗病菌的快速鉴定

从进境美国黑麦草种子中发现一种类似小麦印度腥黑穗病菌(Tilletia indica)的冬孢子.选取小麦印度腥黑穗病菌的特异性引物Tin3/Tin4和黑麦草腥黑穗病菌(T.ualkeri)的特异性引物Tin11/Tin4以及两者的通用引物H4/H7、H11/H12对样品中的冬孢子进行套式PCR扩增,检出该批样品中含有黑麦草腥黑穗病菌(T.ualkeri).检测灵敏度为3个冬孢子,检测时间约为6h.与常规检测方法相比,工作效率至少提高了6倍.     

关于预防菜豆食物中毒的风险提示

<正>根据国家卫生计生委通报,今年以来因食用未烧熟菜豆导致的食物中毒事件报告起数和中毒人数均较去年同期有所上升。为预防食用菜豆中毒,保障公众安全,国家食品药品监督管理总局特发出以下风险提示:菜豆,包括扁豆、四季豆、芸豆、刀豆等。食用未烧熟煮透的菜豆会导致食用者中毒,中毒一年四季均可发生,以夏、秋季为多。生的或未煮熟的菜豆含有较丰富的红细胞凝集素和皂苷,这两种生物毒素分别具有红细胞凝集和溶血的作用,进入人体后发挥生物作用而致病。皂苷主要在菜豆的外皮内,只要     

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT-PCR方法.用8对引物对诺沃克病毒进行检测研究,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高.用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测,检测灵敏度均能达到102拷贝.将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA,并用引物GI-SKF/GI-SKR 和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增,检出GII型诺沃克病毒.     

关于预防菜豆食物中毒的风险提示

<正>根据国家卫生计生委通报,今年以来因食用未烧熟菜豆导致的食物中毒事件报告起数和中毒人数均较去年同期有所上升。为预防食用菜豆中毒,保障公众安全,国家食品药品监督管理总局特发出以下风险提示:菜豆,包括扁豆、四季豆、芸豆、刀豆等。食用未烧熟煮透的菜豆会导致食用者中毒,中毒一年四季均可发生,以夏、秋季为多。生的或未煮熟的菜豆含有较丰富的红细胞凝集素和皂苷,这两种生物毒素分别具有红细胞凝集和溶血的作用,进入人     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

抗草甘膦转基因大豆DNA标准分子构建及多重荧光PCR检测体系的建立

[目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS外源基因的质粒,设计TaqMan探针建立三重荧光PCR检测体系。[结果]成功构建融合抗草甘膦转基因大豆3种外源基因质粒PMD18T/SOY,并建立三重荧光PCR检测体系,检测限值为10-3 ng/μL,线性关系良好r,2在0.998以上。[结论]构建同时含有多种外源基因的质粒作为转基因检测的阳性参照物并建立多重PCR检测体系,不仅可降低试剂成本、节省时间和人力,而且可以减少PCR反应次数和加样环节,降低PCR污染的几率。     

基因芯片在犬病病原体检测中的应用

为了实现犬病的快速诊断,本研究利用高通量的基因芯片技术,建立了犬传染性肝炎、犬瘟热和犬细小病毒病基因芯片快速检测方法,同时提取DNA和RNA病毒核酸,再用多重不对称PCR扩增目的片段,与芯片上探针特异结合,实现了3种犬病同时检测,CDV、CAV的检测灵敏度达10^2copies,CPV的检测灵敏度达10^3copies。     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR鉴定简单异尖线虫方法的建立

根据GenBank发表的简单异尖线虫保守的ITS-2基因序列设计一对引物,用以扩增简单异尖线虫114 bp基因片段。用简单异尖线虫的重组质粒（AS-ITS-pGM）为模板建立SYBR Green I荧光定量PCR检测简单异尖线虫的方法,并用该方法对经PCR-RFLP鉴定为简单异尖线虫的样品进行鉴定。结果表明,本研究建立的简单异尖线虫SYBR Green I荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高,稳定性好,可用于简单异尖线虫的鉴定。     

应用DNA条形码技术鉴定口岸截获的国内未见分布蚊种

[目的]利用DNA条形码技术对口岸截获的形态特征破坏严重的未知蚊类进行种类鉴定。[方法]提取从荷兰进口的废纸中截获的一头形态严重破坏的蚊类的基因组DNA。采用无脊椎动物线粒体细胞色素氧化酶I（COI）的通用引物LCO1490和HCO2198扩增目的片段。然后纯化、克隆测序、序列分析、与BOLD中的序列进行比对。[结果]该未知蚊类的DNA条形码序列与BOLD中环带林蚊（Sylvicola cinctus）的序列相似性超过99.8%;并与原产地专家交流确认截获的蚊种为环带林蚊。经科技查新,确认为首次截获的国内未见分布蚊种。[结论] DNA条形码能克服传统物种鉴定依靠完整的外部形态的局限,有效提高外来物种的种类鉴别能力,大大缩短检测周期,降低外来物种对我国生态和公共卫生安全的危害。     

实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒

对虾白斑病由白斑综合征病毒（WSSV）感染引起,所有养殖对虾对该病高度易感,蟹类、小龙虾、淡水虾以及各种龙虾也易感,但发病率和死亡率有很大差别。多种虾类常表现为持续感染或终身隐性感染。隐性感染虾体内的病毒含量极低,需建立一种快速、灵敏、准确的检测方法。本文应用TaqMan探针技术设计了探针和引物,建立了检测WSSV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR反应的主要因素Mg^2＋浓度和退火温度等进行了优化,证明当Mg2＋浓度为3.5～4.0 mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳的扩增和检测效果。     

犬钩端螺旋体PCR检测方法的应用

采用荷兰皇家热带病研究院WHO钩体病参考中心设计的一对引物进行普通PCR检测。经反应条件与体系优化,对犬钩端螺旋体与霍乱弧菌,伤寒杆菌,沙门氏菌,产毒性大肠杆菌,致病性大肠杆菌,痢疾,溶藻菌,非O1、O139霍乱弧菌,副溶血性弧菌,O157菌进行检测,除犬钩端螺旋体以外均为阴性,表明钩端螺旋体PCR检测方法与以上菌株无交叉反应,证明了该钩端螺旋体PCR检测方法具有特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示PCR方法可以检测到的核酸浓度最低为3×10³拷贝。此结果证明该犬钩端螺旋体PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,可用于犬钩端螺旋体样品的检测。     

Nutritive value of germinated mung beans and lentils

Changes in the nutritive value of germinated mung beans (Phaseolus aereus) and lentils (Lens esculenta) were studied. Water, energy, protein, amino acids, vitamins B₂ and C, iron and zinc contents increased with germination. The possible use of these germinated seeds for human consumption was determined by sensory evaluation.     

Promoting remote workers' psychological health: Effective management practices during the COVID-19 crisis

The aim of this study was to identify specific management practices that promote the psychological health of remote workers in the context of the COVID-19 crisis. A two-round Delphi study was conducted among 28 teleworkers and 22 managers. A list of 60 specific management practices was presented and participants had to identify whether each one could be used in the current remote working context and, if so, how useful it was to promote psychological health at work. Results indicate that most specific management practices usually used in a face-to-face setting can also be used in a remote context (85%). Practices that show consideration, establishing work structure, and allowing flexibility were also identified as the most useful to promote remote workers' psychological health during the pandemic. This study contributes to the advancement of knowledge about specific management practices, remote working, and crisis management. It also suggests specific practices that managers can adopt to promote the psychological health of their employees during a period of crisis, even while managing from a distance.     

The Influence of Sociodemographic and Lifestyle Factors on Consumers’ Healthy Cereal Food Choices

An increase in the dietary intake of wholegrain cereals can reduce the risk of developing certain non-communicable diseases and can play an important role in a healthy diet. However, consumption of wholegrain cereals across many countries is lower that the recommended guidelines. The main objective of this research was to gather purchase-related information from end users on different types of cereal foods. A mixed research methodology was used to identify key sociodemographic and lifestyle factors that may influence consumer acceptance of new cereal foods. Three distinct clusters were identified based on six identified lifestyle dimensions. This research suggested that the combined use of sociodemographic and lifestyle segmentation variables could help identify specific consumer segments that can be used in the market-oriented development of new cereal foods.     

十二种食源性致病菌可见光基因芯片检测方法的建立

[目的]利用可见光基因芯片技术,针对12种常见食源性致病菌,建立快速、准确、高通量的诊断方法。[方法]设计靶细菌16S rDNA和23S rDNA的通用引物,反向引物5’端标记生物素;特异寡核苷酸探针设计在两对引物之间的可变区,5’端标记氨基基团。将探针点样于固相载体制备基因芯片,优化PCR反应体系后,PCR产物与芯片点制探针区域进行杂交,然后通过化学显色直接观察结果,并评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性等指标。收集临床样本28例,同时制备双盲模拟污染样本10例,对检测方法进一步评价。[结果]：本试验所建立的基因芯片方法可同时检测志贺菌、耶尔森氏菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单增李氏菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7等12种食源性致病菌,特异性高,操作简便;针对纯培养食源性致病菌反应体系的灵敏度为10^3cfu/mL,模拟样本的灵敏度为10^4cfu/mL;重复性好;采用可见光基因芯片方法检测28例临床样本,26例与常规培养方法结果完全一致,符合率达到92.9%;双盲模拟样本的检测符合率达到100%。