应用PCR技术快速检测水产品中副溶血弧菌的研究

1前言 副溶血弧菌(Vibrin Parahemolyicus)是海洋和盐湖中微生物区系的重要成员,食品卫生上的重要病原菌.由于水产品自身携带该菌,给该菌在水产品加工中的预防带来难度.近年来,我国出口的水产品曾有多起因副溶血弧菌超标引起的退货、销毁、取消注册代号的恶性事件发生.欧盟3 6 8决议(97/368EC)和587号决议(97/587/EC)更是要求对原产于中国的水产品批批检验副溶血弧菌.流行的副溶血弧菌检测方法-培养法检验周期较长,往往需7天以上才能报告结果,从食品的特定货架期、高额储藏费用和适应食品贸易的角度,我们探索了用PCR技术检测食品中副溶血弧菌的方法.该类研究已有报道,但多集中在实验室方法探索上[1-9],真正从应用的角度对食品中副溶血弧菌的PCR检测方法研究鲜有报道.     

利用PCR方法快速检测食品中的沙门氏菌

本文介绍了一种快速检测食品中沙门氏菌的方法.操作步骤为,在缓冲蛋白胨水(BPW)中增菌18-24h,生理盐水洗菌2次后煮沸裂解细胞,以invA为目的基因进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测,两天时间即能得到明确结果.以全脂奶粉、生牛肉和加工过的鸡肉为实验对象,人为添加沙门氏菌,检测结果与传统培养方法和BAX(r)系统检测结果一致.实验检出限为100cfu/25g,准确性达100%.     

PCR技术在快速检测食源性致病菌中的作用

现阶段,我国正以飞快的速度发展,食品微生物检测也由传统的培养方法向分子水平过渡。通过对聚合酶链式反应(PCR)技术的研究分析可知,可以利用这种先进的快速检测技术来检验食品中的食源性致病菌,本文归纳总结了几种不同的PCR技术,旨在提供一些关于食品微生物的快速监测技术。     

弓形虫PCR检测方法的建立

针对人畜共患的寄生虫弓形虫设计特异引物,建立PCR快速检测鉴定方法,并用临床样品和其他6种病原体验证检测方法的特异性、灵敏性等参数,证实了该方法的准确性、可用性.     

多重PCR快速检测四种蚕微粒子病原体

1前言 蚕微粒子病（pebrine disease of chinese silkworm，PDS）又称为锈病、斑病、微孢子病等，是由原生动物孢子虫纲的微孢子虫（microsporidia）寄生引起的一类蚕的传染性原虫病。普遍发生的家蚕微粒子病的病原是属原生动物门，孢子虫纲，微孢子虫目，微孢子虫科，微孢子虫属：蚕微孢子虫（Nosema bombycis naegeli）。微粒子病的第一次流行是1845年发生于法国，后来传遍意大利、西班牙、叙利亚及罗马尼亚。     

食品微生物检测中快速检测方法的运用

随着经济的不断发展,人们对食品的安全问题也越来越重视,在食品微生物检测中运用快速检测法不仅可检测出食品中的微生物,提升检测效率,还可确保人们的健康与食品的安全。本文主要探讨食品微生物检测中快速检测方法,以此提升食品的安全性,推动食品行业的持续发展。     

犬钩端螺旋体PCR检测方法的应用

采用荷兰皇家热带病研究院WHO钩体病参考中心设计的一对引物进行普通PCR检测。经反应条件与体系优化,对犬钩端螺旋体与霍乱弧菌,伤寒杆菌,沙门氏菌,产毒性大肠杆菌,致病性大肠杆菌,痢疾,溶藻菌,非O1、O139霍乱弧菌,副溶血性弧菌,O157菌进行检测,除犬钩端螺旋体以外均为阴性,表明钩端螺旋体PCR检测方法与以上菌株无交叉反应,证明了该钩端螺旋体PCR检测方法具有特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示PCR方法可以检测到的核酸浓度最低为3×10³拷贝。此结果证明该犬钩端螺旋体PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,可用于犬钩端螺旋体样品的检测。     

论快速检测食品微生物方法

快速检测食品中微生物的方法在食品卫生检验方面起着越来越重要的作用,最终将达到预防肠道传染病和食物中毒的发生的目的。快速方法包括选择鉴定用培养基法、即用型纸片法、免疫学技术、细菌直接计数法、全自动微生物分析系统等。本文对上述各种快速检测食品中微生物的方法的作一综述。     

食源性致病微生物中应用于PCR检测的靶基因

介绍了8种常见食源性微生物致病性大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的PCR法检测中常用的靶基因,主要是一些编码特征毒素和其他的毒力因子的基因.     

旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究

根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×10^2拷贝（10^-5条旋毛虫）,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X＋19.70,相关系数R^2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%（n=20）,同一组不同浓度梯度样本（n=9）间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

蛙病毒属PCR检测方法的建立及其在甲鱼“红脖子”病病原鉴定中的应用

在GenBank中搜寻EHNV相关序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,扩增蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)410 bp的DNA片段.用该方法从患"红脖子"的甲鱼中分离的病毒毒株(9701株)中扩增出特异性的片段.对扩增产物进行基因克隆、序列测定和序列分析,结果表明该片段和蛙病毒属其他病毒MCP的编码基因同源性都在96%以上,和牛蛙虹彩病毒的基因序列相似性为100%,因此初步判定9701株属于蛙病毒属.     

奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法研究

[目的] 建立和提出奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法.[方法] 利用细菌16S和23S rDNA的保守区作为通用引物,对6株阪崎肠杆菌16S～23S rDNA间区序列(ISR)进行了扩增和测序,在比较阪崎肠杆菌与其近源株16S1～23S rDNA间区序列的基础上,设计了11条阪崎肠杆菌PCR检测引物,组合成30对PCR引物并筛选出一对阪崎肠杆菌PCR检测的特异性引物,建立了奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法.[结果] 用10株阪崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉样品中阪崎肠杆菌检测低限为2.2～5.4cfu/100g,灵敏度高;新建的PCR方法与FDA BAM方法比较试验表明,两种方法的检测结果完全符合.[结论] 本文提出的奶粉中阪崎肠杆菌PCR检测方法填补了国内空白,达到了国际先进水平,可在实际工作中推广.     

ELISA与小白鼠生物法检测贝类中麻痹性贝毒的比较

[目的] 通过用酶联免疫(ELISA)与小白鼠生物法对麻痹性贝类毒素(PSP)检测结果的比较研究,选择适合于对贝类毒素进行快速筛选的检测方法.[方法] 应用ELISA技术对贝类产品中PSP进行了检测试验,对10类、52份贝类样品进行了PSP含量的定量检测,同时进行了小鼠生物法检测,以进行比较.[结果] 表明ELISA与小白鼠生物法检测PSP的结果吻合程度很好,但当PSP含量较高时,则结果存在一定差异,可能ELISA方法更适合于检测PSP含量低的样品.[结论] 采用ELISA技术对PSP进行检测,具有检测限低、特异性高及阳性结果与其他方法相一致等优点,非常适合于对贝类毒素进行快速筛选和定量检测.     

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT-PCR方法.用8对引物对诺沃克病毒进行检测研究,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高.用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测,检测灵敏度均能达到102拷贝.将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA,并用引物GI-SKF/GI-SKR 和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增,检出GII型诺沃克病毒.     

检测猪传染性胃肠炎病毒RT—PCR方法的建立

[目的]建立对猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的和敏感的手段.[方法]根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白的基因序列,设计合成一对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR方法.[结果]两条引物扩增目的片段长度为1262bp.经测序分析,与Miller毒株的同源性为99.1%.[结论]该RT-PCR方法灵敏,可靠,具有很强的临床检测意义,可用于TGEV的快速诊断和流行病学调查.     

食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法所用引物的特异性比较

[目的]对食品中单增李斯特氏菌PCR检测方法目前常用的引物进行特异性比较.[方法]用36株单增李斯特氏菌、非单增李斯特氏菌以及其他菌属的细菌,将我室的2对引物与其他作者设计的5对引物进行特异性比较.[结果]我室采用的引物FM1/FM2只对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段,引物LI1/U1只对所有李斯特氏菌属的细菌扩增出特异性片段.其他引物除了对单增李斯特氏菌扩增出特异性片段外,对其他细菌也会扩增出与特异性片段大小一致的片段.[结论]单增李斯特氏菌的特异引物FM1/FM2与李斯特氏菌属的特异引物U1/LI1组合应用,可以成为检测单增李斯特氏菌的最佳方法.     

食品中单增李斯特菌快速、敏感、特异PCR检测方法的建立

[目的]建立食品中单增李斯特菌的PCR检测方法.[方法]根据单增李斯特菌的hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因各设计了一对引物,两对引物组合建立PCR方法,用人工污染食品对该方法进行验证,于37℃经24h预增菌和24h增菌后直接进行PCR分析.[结果]在消毒奶、冰淇淋、酸奶、奶酪、熟肉和香肠等即食食品中单增李斯特菌的检出限为1cfu/25g(mL),在原奶和生肉中的检出限分别为1～10 cfu/25mL和25 cfu/25g.[结论]该方法快速、敏感、特异,适合不同类型食品的常规检测分析,可用于食品工业中单增李斯特菌的检测.