婴儿食品中阪崎肠杆菌检测方法的改进

目前常用的阪崎肠杆菌的分离鉴定方法存在许多不足。通过改进目前常用方法,使得选择性大大提高,可疑菌落易于识别,检测周期缩短,可检测出仅含1个阪崎肠杆菌的接种样品。改进方法与原标准方法的定性验证实验结果一致,定量重复实验结果良好。用改进方法开展市场上婴幼儿奶粉、婴幼儿补充食品中的阪崎肠杆菌污染情况调查,婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌检出率为7．3％,婴幼儿补充食品中阪崎肠杆菌检出率为25％。     

阪崎肠杆菌检测方法的研究进展与优化

阪崎肠杆菌（Enterobacter Sakazakii）是乳制品中近几年新发现的一种致病菌,是肠杆菌科的一种。目前国际社会上针对该菌的研究无论是在医学还是公共卫生学上都具有极其重要的意义。阪崎肠杆菌菌型繁多,传统的血清学鉴定、选择性和非选择性增菌等检测方法存在灵敏度低、耗时长等缺点,难以满足食品及,临床应用。国内外学者对阪崎肠杆菌检测技术进行了大量研究,并取得了一定的进展。检测方法主要分为以免疫学为基础的方法、分子生物学方法、联合方法三类方法。该文就这三类方法研究进展进行概述。     

阪崎肠杆菌——食品安全控制新目标

2004年初，联合国粮农组织和世界卫生组织在日内瓦召开了有关婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌及其他病原微生物(包括沙门氏菌、肉毒杆菌等)的专家咨询会，认为婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌和沙门氏菌等是导致婴幼儿感染、疾病和死亡的主要原因。阪崎肠杆菌可以对任何年龄段的人群引起疾病，但对1岁以下、特别是出生28天以内、早产儿、低体重儿或免疫缺陷的婴幼儿更容易被感染。     

克罗诺阪崎肠杆菌微滴数字PCR定量方法的建立

为建立克罗诺阪崎肠杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速定量检测方法,针对克罗诺阪崎肠杆菌的特异性单拷贝PapC基因设计引物探针,进行特异性、灵敏度和重复性实验,本文通过对纯菌液进行检测,比较平板计数法、实时PCR和ddPCR...     

显色培养基分离婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的效果比对和应用

分析广东环凯公司阪崎肠杆菌显色培养基(CRM006)和科玛嘉阪崎肠杆菌显色培养基(DFI)的实验应用效果,为检测婴幼儿乳粉中的阪崎肠杆菌选用培养基提供依据。按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》(GB/T 4789.40-2010)分离及生化鉴定阪崎肠杆菌,并分析培养基的分离效果。结果表明,36份样品中,检出阪崎肠杆菌2份,检出率为5.56%;CRM平板和DFI平板阳性符合率为100%;疑似菌落检出率分别为16.67%和13.89%(P0.05)。CRM平板和DFI平板用于培养分离阪崎肠杆菌均有良好效果。     

进口乳制品中阪崎杆菌的耐药性分析

本文对从进口乳制品中分离到的3株阪崎杆菌和2株阪崎杆菌标准株进行了药敏试验,实验结果显示该细菌对头孢类、青霉素类、氨基糖甙类、单环β-内酰胺类、喹诺酮类等抗生素均敏感,与国外报道相一致,说明该细菌在肠杆菌科细菌里属耐药性不显著的细菌。     

能力验证试验中阪崎肠杆菌的检测

目的:完善和强化实验室质量管理体系,增强和提高实验室的市场竞争力。方法:采用食品安全国家标准GB 4789.40-2016《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》。结果:采用多种鉴定方法对样品和标准菌株进行对照检测,结果为未检出阪崎肠杆菌。结论:中国合格评定国家认可委员会(CNAS)对本实验室检测的能力验证样品试验结果判断为满意。     

脉冲强光对牛奶中阪崎肠杆菌杀菌效果的影响

本文采用响应面法优化脉冲强光对鲜牛奶细菌杀灭工艺条件,以闪照次数、闪照距离和牛奶质量为影响因子,以灭菌率作为响应值。基于此,本文就响应曲面法用于优化脉冲强光对牛奶中阪崎肠杆菌杀菌工艺的效果展开相关叙述。     

食品中阪崎肠杆菌和单增李斯特氏菌检测能力验证结果与分析

目的:验证本实验室对食品中阪崎肠杆菌和单增李斯特氏菌的检出能力。方法:按照能力验证作业指导书、《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》(GB 4789.40-2010)和《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30-2010)进行检验。结果:样品14-P346检出阪崎肠杆菌,样品14-T795检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论:组织者对本实验室此次能力验证实验结果评价满意,说明本实验室同时具有阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力。     

坂崎肠杆菌（E．sakazakii）的危害及其检测方法

介绍了由坂崎肠杆菌(E.sakazakii)引起疾病的特点和坂崎肠杆菌检验方法,并对此提出了建议.     

牛传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

[目的]建立牛传染性鼻气管炎的PCR检测方法.[方法]根据牛传染性鼻气管炎病毒的gB基因序列设计一对引物,进行PCR检测,并对反应条件及反应体系进行优化.[结果]得到与预期大小(362bp)一致的特异性片段.最佳退火温度为58～64℃,Mg2+最佳浓度为1.6mM,dNTPs为0.36mM,引物为0.2 pmol/μL,聚合酶0.8U/100μL.用这对引物扩增IBRV、HCV、PRRSV、PRV,只有IBRV扩增出特异性条带.[结论]该PCR方法的检测灵敏度为2.4ng/100μL,较其他方法敏感.     

奶粉中单增李斯特氏菌热抵制特性的研究

[目的]对奶粉中单增李斯特氏菌的热抵制特性进行研究.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按107cfu/mL的浓度分别添加于提前预热的60℃的灭菌蒸馏水、复水的原料粉和复水的高糖高脂奶粉中,在此温度下分别作用5min和10min,通过菌落计数分析单增李斯特氏茵的热抵制特性.[结果]在灭菌蒸馏水中单增李斯特氏菌衰减得最快,在复水的原料奶粉中单增李斯特氏菌衰减得较慢,而在复水的高糖高脂奶粉中单增李斯特氏菌衰减得最幔.[结论]奶粉中的单增李斯特氏菌具有热抵制特性,而且高糖高脂成分可提高单增李斯特氏菌的热抵制能力.     

干奶粉中单增李斯特氏菌的生存评估

[目的]对不同水活度干奶粉中的单增李斯特氏菌在不同温度条件下的生存特性进行评估.[方法]通过人工方法将单增李斯特氏菌按103cfu/g的浓度添加于不同水活度的干奶粉样品中,在不同温度(冰箱温度4℃和室温25℃)下贮存,通过菌落计数来分析单增李斯特氏菌的生存特性.[结果]在低温条件下,单增李斯特氏菌可在较低水活度的干奶粉中长期保持生长活力,并且当水活度较高时,会有增长趋势.在较高的环境温度中,干奶粉中的单增李斯特氏菌的生长活力很快减退,细菌处于亚损伤状态,但在适宜的营养环境条件下,这种亚损伤状态可以得到修复.细菌仍然可以恢复活力.[结论]高温条件更易使干奶粉中单增李斯特氏菌生长活力减退,干奶粉中如果污染了单增李斯特氏菌.于室温(25℃)条件下贮存会抑制单增李斯特氏菌的生长.     

几种液体培养基对奶粉中单增李斯特氏菌富集效果的比较

[目的]选择适合奶粉中单增李斯特氏菌富集的液体培养基.[方法]参考ISO/TS11133-2中的培养基验证方法并有所改进,对国际上常用的5种液体培养基进行比较选择.[结果]5种液体培养基对奶粉中单增李斯特菌的增菌效果差异不显著.[结论]5种液体培养基的增菌效果基本相同.但由于BLEB的增菌过程是先用无添加剂的肉汤预增菌后再加入添加剂,Fraser肉汤的增菌过程是用含有半量添加剂的肉汤预增菌后再转入含有全量添加剂的肉汤中,这两种方法有利于使损伤的细菌得以恢复活力.对奶粉中单增李斯特氏菌进行富集,如果采用一步增菌法建议使用BLEB,如果采用两步增菌法建议采用Fraser肉汤.     

复水奶粉中单增李斯特氏菌的生存评估

[目的]对复水奶粉中单增李斯特氏菌的生长与存活进行评估.[方法]通过人工方法以102cfu/mL的浓度添加单增李斯特氏菌于复水奶粉样品中,在不同温度和pH值条件下贮存,通过菌落计数分析单增李斯特氏菌的生存特性.[结果]在-1.5～37℃之间,单增李斯特氏菌能够生长,在-1.5℃时生长速率最慢,随温度升高生长速率也随之加快,在37℃时生长最快,在45℃时不能生长.在接近中性pH值范围内的复水奶粉中,单增李斯特氏菌在高温条件下(30℃)比在低温条件下(4℃)生长快,但在低温条件下(4℃),单增李斯特氏菌对酸和碱的耐受程度比在高温条件下(30℃)的耐受程度大.[结论]由于复水奶粉的pH值接近中性,比较适合单增李斯特氏菌的生长,如果污染了单增李斯特氏菌,在低温条件下贮存能够控制单增李斯特氏菌的生长.     

PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因

[目的] 建立锦鲤疱疹病毒的PCR检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序.[方法] 分别利用蛋白酶K-酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA,并设计两对特异性引物进行PCR检测.[结果] 异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K-酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段.同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物.[结论] 本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的PCR检测方法.     

荷兰进口百合斑驳病毒的分子检测

荷兰进口百合种球,经过隔离试种,采用RT-PCR方法对怀疑感染有百合斑驳病毒的百合植株进行病毒检测,通过对RT-PCR检测扩增到的产物进行克隆测序,分析其序列,并与其他6个已知斑驳毒株进行比较,其同源性达到99%,通过汁液摩擦接种健康植株,3～7天后表现出斑驳症状,确认荷兰进口百合种球携带有百合斑驳病毒(Lily Mottle Virus(LMoV)).     

贝类产品中诺沃克病毒RT-PCR检测方法

本文建立了贝类产品中诺沃克病毒检测的普通RT-PCR方法.用8对引物对诺沃克病毒进行检测研究,发现GII-SKF/GII-SKR引物检测GII型病毒特异性强且灵敏度高.用引物GI-SKF/GI-SKR和GII-SKF/GII-SKR分别对系列稀释度的质粒进行检测,检测灵敏度均能达到102拷贝.将诺沃克病毒添加于牡蛎肠胃组织中并提取RNA,并用引物GI-SKF/GI-SKR 和GII-SKF/GII-SKR对其进行扩增,检出GII型诺沃克病毒.     

检测猪传染性胃肠炎病毒RT—PCR方法的建立

[目的]建立对猪传染性胃肠炎病毒的RT-PCR检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供可靠的和敏感的手段.[方法]根据Genbank收录的TGEV-Miller毒株S蛋白的基因序列,设计合成一对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了检测TGEV的RT-PCR方法.[结果]两条引物扩增目的片段长度为1262bp.经测序分析,与Miller毒株的同源性为99.1%.[结论]该RT-PCR方法灵敏,可靠,具有很强的临床检测意义,可用于TGEV的快速诊断和流行病学调查.