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为了建立甘草SRAP技术,采用四因素(Taq酶,Mg~(2+),dNTP,引物)四水平的正交试验设计[L16(44)]对甘草进行SRAP-PCR试验,电泳结果采用软件SPSS分析,退火温度和引物筛选采用单因子试验。结果发现,4种因素对甘草SRAP-PCR的影响依次为dNTPTaq酶Mg~(2+)引物;优化后的甘草SRAP-PCR体系(20μL)为1×PCR缓冲液,引物0.6μmol/L,Mg~(2+)2.5mmol/L,Taq酶1.5U,dNTP 0.3mmol/L,模板DNA 40ng;最佳的退火温度为50℃;81对引物中有22对扩增出明亮、清晰的谱带。该优化的SRAP-PCR反应体系为进行甘草资源遗传分析提供了技术支持。 相似文献