针对hly基因快速筛检食品中霍乱弧菌实时荧光PCR方法的研究

[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非O1群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系.以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化.[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性.[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致.实验室间验证结果同实验一致.[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用.     

县财政与地方特色经济发展的良性互动

安吉县是浙北山区的一个只有45万人口的小县,县内森林覆盖率70%,其中竹林面积达100万亩,2002年全县实现竹业产值50亿,县财政收入中有20%来自竹产业。县财政与竹业经济发展之间,形成了一种良性互动关系。一、积极的财政扶持政策,是地方经济发展的推动力量。安吉县竹业经济的发展经历了资源主导型、粗加工主导型和精加工主导型三个阶段。我们紧紧把握竹产业的发展规律,在不同的阶段采取不同的扶持政策,收到了良好的效果。首先提供准公共产品,为竹业经济的健康发展奠定良好的基础,致力于交通通讯等基础设施的建设。以交通建设为例,1998—2002年…     

农业特产税征管实践与思考

安吉县地处浙北山区,全县拥有丰富的竹类资源,竹林面积86万亩,其中毛竹67万亩,毛竹积蓄量达1.1亿支,年产商品竹1500万支,被誉为“中国竹乡”。丰富的竹类资源和遍布全县的各类竹加工企业,蕴涵着大量的农业特产税税源。竹类     

用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌

[目的]采用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒.[方法]根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线.以副溶血弧菌菌株8株及同源及非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测.同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测.[结果]该方法有良好的特异性8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,其它15株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.9871.直接进行定量检测,则检测低限在102cfu/g;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfu/g.[结论]该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景.     

荧光定量PCR法检测中国籍海员血清HBV DNA

[目的] 了解远洋海员HBV DNA的实际感染情况,为国境口岸传染病监测策略提供基础数据.[方法] 选广州某口岸2003年3月至12月中国籍远洋海员体检血清标本192例,用ELISA法检测192份血清乙肝五项免疫学指标,以HBSAG阳性121例为实验组,51例HBSAG阴性为对照组.用实时荧光定量PCR法同时检测HBV DNA病毒含量.比较两组HBVDNA检出差异.[结果] 192名远洋海员HBVDNA检出78例(40%).5项血清免疫学指标和HBV DNA全部阴性18例.实验组HBV DNA阳性64例(50.02%),对照组HBVDNA阳性14例(27.45%),两组差异有显著意义(χ2<0.01).14例HBSAG阴性HBV DNA阳性血清中,现行法规规定的三项传染性指标均为阴性,核心抗体均为阳性.[结论] 三项传染性指标阴性的人群仍有传播HBV的危险,建议有关部门修订远洋海员等特殊人群乙肝防治政策,直接检测HBV DNA.