岩沙海葵毒素直接酶联免疫吸附检测方法的研究

[目的]制备岩沙海葵毒素(PTX)多抗血清,纯化并标记辣根过氧化物酶,建立PTX多克隆直接酶联免疫吸附检测方法.[方法]将纯品毒素PTX与大分子蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)分别巯基化,用化学法偶联二者成为半抗原,以其诱导BALB/c小鼠产生多价抗血清;以辣根过氧化物酶(HRP)标记PTX多抗血清;以PTX纯毒素作为包被抗原,HRP标记的多价抗血清为酶标抗体,建立PTX多抗直接ELISA检测方法.[结果]制备的抗PTX多价抗血清,经纯化后与HRP标记成功;建立的PTX多抗直接ELISA检测法,其最佳工作浓度为180.[结论]本研究制备的PTX人工免疫抗原具有较高的特异性和免疫原性,多克隆抗体为特异性抗PTX抗体,PTX多抗直接ELISA检测法对PTX的检测可达到5～10ug水平,该法应用于海产品中PTX快速检测的结果,待进一步研究.     

海洋生物岩沙海葵毒素血清免疫抗体的制备

[目的] 为建立岩沙海葵毒素(PTX)的酶联免疫快速测试方法提供特异性免疫抗体.[方法] 巯基化标准PTX成半抗原PTX-PDP;巯基化匙眼血蓝蛋白(KLH)成KLH-SH,两者合成反应人工抗原PTX-PDP-KLH.用PTX-PDP-KLH免疫雌性6～8周龄Balb/c小鼠,制备PTX多克隆抗体.用同样方法制备包被抗原PTX-PDP-BSA,用以检测血清抗体效价.[结果] 紫外检测标准品PTX的最大吸收波长在264nm处,纯品KLH及BSA的最大吸收波长在278nm及279nm处,小鼠血清多克隆抗体PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的最大吸收波长分别在267nm和273nm处.抗血清效价达到13200 ,与正常Balb/c小鼠、昆明小鼠及兔血清间无交叉反应.[结论] 合成的PTX人工抗原纯度高,成功制备PTX多克隆抗体血清.