免疫胶体金技术及其在检验检疫中的应用

免疫胶体金技术是四大免疫标记技术之一,问世20多年来发展十分迅速,在生物医学各研究领域特别是在医学检验中得到了日益广泛的应用.本文从胶体金技术的基本原理、制备方法、标记技术和实际应用等几个方面对胶体金技术作较系统的介绍,分析胶体金技术在检验检疫中的广阔应用前景.     

马流感血凝及血凝抑制试验的研究与应用

研究马血清的4种前处理方法,同时对比研究了吐温80/乙醚处理马流感病毒的血凝效果,筛选出了能有效去除马血清中非特异性血凝抑制因子的最佳方法.最后,通过对852例进口马的血清检测,普查了从北京口岸进口马匹中马流感抗体的有无,及其抗体水平的高低,为马流感抗体水平的检测提供了一种灵敏度比较高的方法.     

从古巴和瑞士进境信鸽强致病力新城疫病毒的分离及鉴定

1前言 新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)主要危害鸡、火鸡和其他禽类(如鸽、野鸟),引起急性、热性、败血性和高度传染性疾病.强致病力新城疫病毒对养禽业和养鸽业可造成毁灭性的打击,世界动物卫生组织(OIE)将其列为一类传染病.为保障我国养禽业的健康发展,对出、入我国境的禽类必须予以高度重视,严把国门关.     

基因芯片技术快速检测SARS病毒

本研究以SARS冠状病毒TOR2株序列为设计标准,研制出用于检测SARS病毒的全基因芯片,芯片探针长度为70nt,相邻探针序列重复25nt,共660条病毒探针,覆盖了SARS冠状病毒的全部序列,另外设计了内对照探针和阴性对照探针.应用该基因芯片对病人、出入境食品、动植物及其产品进行检测,结果表明基因芯片技术检测SARS冠状病毒灵敏度高、特异性强、准确性好,稳定快速,在检验检疫中应用是可行的.     

液相芯片——高通量检测技术的新亮点

1前言 液相芯片（liquichip）技术是20世纪90年代中期美国Luminex公司开发出的被喻为后基因组时代的芯片技术。它将流式检测与芯片技术有机地结合在一起，大大延伸了流式的检测平台，以微球体代替细胞作为反应载体，在这个开放的反应体系中可进行蛋白、核酸等生物大分子的检测，不仅从细胞水平深入到分子水平，其检测范围也得到了前所未有的扩展；另外，它也使芯片技术的应用取得重大突破。     

荧光RT—PCR检测活禽和禽组织中禽流感病毒的研究

本研究根据A型流感病毒的核酸保守区共有序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的通用型"一步法"检测活禽或禽产品中所有A型禽流感病毒的荧光RT-PCR检测技术.该方法敏感性高、特异性强,与国际标准方法--世界动物卫生组织(OIE)确定的鸡胚病毒分离相比,敏感性基本一致,可直接用来检测咽喉/泄殖腔拭子和禽肉中的禽流感病毒,将检测时间从原来最短所需要的21d缩短为4h.     

基因芯片技术快速检测SARS病毒

以SARS冠状病毒TOR2株序列为设计标准,研制出用于检测SARS病毒的全基因芯片,芯片探针长度为70nt,相邻探针序列重复25nt,共660条病毒探针,覆盖了SARS冠状病毒的全部序列,另外设计了内对照探针和阴性对照探针.应用该基因芯片对病人、出入境食品、动植物及其产品进行检测,结果表明基因芯片技术检测SARS冠状病毒灵敏度高、特异性强、准确性好,稳定快速,在检验检疫中应用是可行的.     

基因芯片在犬病病原体检测中的应用

为了实现犬病的快速诊断,本研究利用高通量的基因芯片技术,建立了犬传染性肝炎、犬瘟热和犬细小病毒病基因芯片快速检测方法,同时提取DNA和RNA病毒核酸,再用多重不对称PCR扩增目的片段,与芯片上探针特异结合,实现了3种犬病同时检测,CDV、CAV的检测灵敏度达10^2copies,CPV的检测灵敏度达10^3copies。     

转Bt基因作物恒温扩增快速检测技术

[目的]建立一种快速检测转Bt基因作物的方法。[方法]利用Bt的Cry1ab/ac基因序列设计特异性引物,建立LAMP检测方法以及优化反应体系,并进行LAMP的特异性和灵敏度试验。[结果]成功建立转Bt基因作物的LAMP检测方法,得到最优的反应体系。在特异性试验中,转Bt基因作物基因组DNA均呈阳性,而非转基因作物、转Bar基因作物、转CPTI基因作物、转EPSPS基因作物等均为阴性;在灵敏度试验中,转Bt基因作物的最低检测限为10个拷贝。[结论]LAMP方法具有很高的特异性和灵敏度,可用于转Bt基因作物的现场快速检测。     

中强毒力新城疫病毒（NDV）荧光RT—PCR检测方法建立及体系优化

根据新城疫病毒F基因序列,选择能够反应裂解位点特性且缺乏二级结构的保守区设计多对引物和探针,从中筛选出最佳引物、探针配对,对引物、探针的浓度、Taq酶用量、逆转录酶、循环数、逆转录反应体积、样品RNA提取方法等进行了优化,建立了快速检测中强毒力新城疫病毒的方法-荧光RT-PCR.