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SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]利用SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR检测传染性鲑鱼贫血病.[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物.利用阳性质控品建立SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR方法,对反应体系进行优化,进行特异性和敏感性分析,并制作标准曲线.[结果]最佳引物终浓度为0.51μmol/L.所建立的SYBR-GreenⅠ实时荧光PCR方法能够特异地检出ISAV;最低检出浓度为9.5× 10-8 μg/μL,其灵敏度比传统PCR高1000倍;能够从阳性样品中检出ISAV,Tm值为82.5℃.建立了标准曲线,其r2>0.99. 相似文献
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锦鲤疱疹病毒病的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
锦鲤疱疹病毒(KHV),属于疱疹病毒科,是双链DNA病毒,有囊膜,与其同科的CHV、CCV之间有免疫交叉反应。Waltzek TB等通过比较疱疹病毒的主要囊膜蛋白基因、衣壳蛋白基因、DNA聚合酶基因、螺旋酶基因4个基因,认为,KHV与carp pox herpesvirus(Cyprinid herpesvirus 1,CyHV-1)和haematopoietic necrosis herpesvirus of goldfish(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)十分相近, 相似文献
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环境DNA(Environmental DNA,eDNA)的丰度往往较低,不容易被检测到。为加强养殖海水中急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease,AHPND)副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VpAHPND)的监测,对疫病进行早期预警,需要对大容量的水体进行富集。采用滤膜法浓缩水体,探究不同体积养殖海水、不同材质不同孔径的滤膜、不同核酸抽提试剂盒,对水体中VpAHPND富集效果的影响。结果表明,采集500 mL养殖海水,用0.45μm硝酸纤维素膜富集水体,经过天根海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取滤膜核酸,荧光定量PCR结果显示富集后的水体中VpAHPND的拷贝数放大了1000倍以上。同时,采用滤膜法对17批进口亲虾携带水和13批广东湛江凡纳滨对虾虾苗养殖海水进行eDNA检测,从虾苗场检出3批VpAHPND阳性,经富集后水体中eDNA检测结果与虾苗组织检测结果一致。因此,基于0.45μm硝酸纤维素膜的滤膜法可以... 相似文献
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LAMP技术及其在水生动物疫病诊断中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
环媒恒温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)是一种新颖的核酸扩增方法,其基本原理是采用4条特异引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在65℃左右对核酸进行扩增,短时间扩增效率可达到10^9~10^10个拷贝。LAMP具有高特异性、高效性、快速、简便、易检测等特点,目前已应用于人类及动植物细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的检测,预计在动植物疫病检疫,尤其是水生动物疫病诊断领域有广阔的应用前景。 相似文献
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蛙病毒属PCR检测方法的建立及其在甲鱼“红脖子”病病原鉴定中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
在GenBank中搜寻EHNV相关序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,扩增蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)410 bp的DNA片段.用该方法从患"红脖子"的甲鱼中分离的病毒毒株(9701株)中扩增出特异性的片段.对扩增产物进行基因克隆、序列测定和序列分析,结果表明该片段和蛙病毒属其他病毒MCP的编码基因同源性都在96%以上,和牛蛙虹彩病毒的基因序列相似性为100%,因此初步判定9701株属于蛙病毒属. 相似文献
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在GenBank中搜寻EHNV相关序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列设计引物,建立了聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,扩增蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)410 bp的DNA片段.用该方法从患“红脖子“的甲鱼中分离的病毒毒株(9701株)中扩增出特异性的片段.对扩增产物进行基因克隆、序列测定和序列分析,结果表明该片段和蛙病毒属其他病毒MCP的编码基因同源性都在96%以上,和牛蛙虹彩病毒的基因序列相似性为100%,因此初步判定9701株属于蛙病毒属. 相似文献
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