百合无症病毒检测方法的研究

[目的]建立从百合种球幼芽中直接检测百合无症病毒(LSV)的体系.[方法]通过DAS-ELISA和一步法RT-PCR两种方法对百合种球幼芽和百合植株叶片中的百合无症病毒(LSV)进行对比检测研究.[结果]从百合种球幼芽和叶片中均可用DAS-ELISA检测到LSV,且两种方法检测阳性结果表现高度一致性.[结论]两种方法均可实现对百合无症病毒LSV的检测,但DAS-ELISA法更经济,更便于操作.     

昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT—PCR检测方法的建立

[目的]建立昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法。[方法]利用Beacon Designer7．0软件设计引物,以人工合成昆津病毒巴马哈森林病毒E基因的片段作为模板,验证该方法的灵敏度及特异性。[结果]最低检出限：昆津病毒1．83106copies／μL,巴马哈森林病毒2．02×106copies／μL。[结论]建立的昆津病毒和巴马哈森林病毒双重RT-PCR检测方法具有灵敏度高、特异性好等特点,适合于昆津病毒和巴马哈森林病毒的快速检测。     

鲤春病毒核酸检测方法研究进展

对鲤春病毒核酸检测方法的基本原理和应用情况进行了论述,主要包括RT-PCR、荧光定量RT-PCR、环介导等温扩增技术等,并总结了各方法的特点和发展前景。     

实时RT-LAMP与实时荧光RT-PCR检测贝类中GII型诺如病毒的研究

[目的]建立、评价GII型诺如病毒的一步法实时RT-LAMP快速检测方法。[方法]选取GII型诺如病毒ORF1与ORF2接头处高度保守基因序列设计RT-LAMP引物,经条件优化,分析该方法的检测灵敏性和特异性,并与实时荧光RT-PCR进行比较。[结果]GII型诺如病毒RT-LAMP的最佳反应条件是65℃,内外引物浓度比达1：10。该方法同其余常见食源性病毒没有交叉反应。对RNA参照品其检测低限可达10个RNA拷贝/反应,同实时荧光RT-P C R的检测水平相当;在人工感染的牡蛎和缢蛏中,RT-LAMP较实时荧光RT-P C R的检测灵敏度略低10倍。[结论]本研究所建立的RT-LAMP方法为GII型诺如病毒提供了一种灵敏、快速且简便的检测方法。     

上海检验检疫局从泰国进境草虾中检出虾黄头病毒

[目的]准确检出进口虾体携带的虾黄头病毒,防止该病毒传入.[方法]OIE推荐的方法和SN/T1151.4-2003的方法.[结果]从泰国进境2批草虾中检出黄头病毒,并经基图片扩增和测序,其相应基图片的同源性为99%.[结论]从泰国进境的这两批草虾均感染有YHV.     

应用RT—PCR检测灭活疫苗中口蹄疫病毒（核酸）

应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测口蹄疫灭活疫苗中的病毒RNA.设计相应于病毒基因组VP1序列保守区段20mer长度的引物.分离出灭活疫苗水相,萃取总RNA,反转录合成cDNA,进行PCR扩增和电泳检测扩增产物,本引物对扩增片段长度483bp,并设计一个Marker作为对照.     

7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法的比较和验证

[目的]比较和验证7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法,筛选出可用于实验室日常检测的方法,并证实实验室具有正确操作这些方法的能力。[方法]应用7种方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,包括5种SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法和2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒,用于方法比较和验证的参考样品包括猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、能力验证样品等不同来源的核酸。[结果]2种预期用于猪流感H1N1病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均能达到预期目的;3种预期用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均无法区分2009年新甲型H1N1流感病毒核酸和猪流感H1N1病毒核酸;2种Taqman探针荧光RT-PCR试剂盒均能正确检出2009年新甲型H1N1流感病毒核酸,但只有1种可检出能力验证阳性样品。[结论]5种SYBRGreen Ⅰ荧光RT-PCR法中有2种能用于猪流感H1N1病毒核酸的检测,另外3种不能用于新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒能用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸的检测。     

人类札幌病毒检测研究进展

札幌病毒属于杯状病毒科,是非细菌性急性胃肠炎的主要病原体之一,札幌病毒可分为5个型别,感染人的主要型别为GI型、GⅡ型、GIV型和GV型。目前,札幌病毒可以通过电镜、ELBA、RT-PCR等方法进行检测,其中应用最广泛的是RT—PCR。本文就目前札幌病毒检测的研究进展作以综述。     

产黄青霉苯乙酰CoA连接酶基因phl的克隆表达及其纯化酶的性质分析

笨乙酸与CoA反应,生成苯乙酰CoA,利用RT-PCR方法成功地从产黄青霉中扩增得到1737 bp不舍内含子的phl基因,并将其克隆到pET30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中低温诱导表达.经SDS-PAGE检测分析,获得与预期大小(62.1kDa) -致的蛋白表达特异条带.通过Ni-NTA亲和层析柱纯化...     

Genetic and Protein Sequence Analysis of rpS29 from Ailuropoda melanoleuca （giant panda）

To explore the structural characteristic of ribosomal protein S29 (rpS29) gene of Ailuropoda melanoleuca (giant panda), primers were designed based on the known...