单增李斯特菌内化素A单克隆抗体制备及胶体金免疫层析试纸条的研制

将单增李斯特菌的内化素A(InlA)基因片段进行密码子优化后,合成基因并插入到质粒载体pET28a中,构建原核表达重组质粒。经过乳糖自诱导表达后,获得了大小为48 kD的重组蛋白。用Ni亲和层析方法纯化重组表达后的InlA蛋白片段。用该蛋白免疫BALB/C小鼠,筛选高效的InlA单克隆抗体细胞株,并制备单克隆抗体,共筛选出3株亲和力较高的单克隆抗体,筛选得到的InlA单克隆抗体经过Protein G亲和层析纯化。研制双抗夹心法胶体金免疫层析试纸条,并对其敏感性、特异性等指标进行评价。该试纸条灵敏度达到1×10~6CFU/m L,用实际样本加标后,对该胶体金试纸条进行验证,并用国标方法做了对比。结果表明,该试纸条能满足样本中单增李斯特菌的检测要求。