食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR检测方法研究

利用沙门氏菌fim Y基因设计特异性引物、探针，优化叠氮溴化丙锭(propidium azide bromide,PMA)染料浓度及相关反应条件，使用高亮度蓝色发光二极管(Light Emitting Diode,LED)光解仪代替卤素光源，建立了食品中沙门氏菌活菌的Taq Man实时荧光PCR快速检测方法。实验表明，设计的引物、探针特异性强，能特异性扩增7株沙门氏菌，其他非沙门氏菌均无扩增，对沙门氏菌纯培养物检测灵敏度可达10² CFU/m L。经反应条件优化后，在PMA浓度为20μmol/L，暗反应5 min，曝光反应10 min条件下，对10⁶ CFU/m L的沙门氏菌热致死菌抑制效果最好，活菌的扩增不受影响。利用优化的PMA处理方法结合Taq Man实时荧光PCR和不经PMA处理的Taq Man实时荧光PCR，分别检测3种不同浓度(5 CFU/25 g、50 CFU/25 g、500 CFU/25 g)活菌和高浓度死菌(10⁶ CFU/25 g)的沙门氏菌人工混合污染样品，以及仅高浓度沙门氏菌死菌污染的人工污染样...