快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]该试纸条可在15min之内完成检测;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒检测低1个滴度;对89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3份阳性,两种检测的符合率为86.52%,特异性为89.89%。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测西尼罗病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。     

瘦肉精胶体金快速检测二联卡的研制

目的:研制用于现场检测肉制品中盐酸克伦特罗和沙丁胺醇(瘦肉精)的二联快速检测试纸条。方法:利用胶体金免疫层析技术,通过对标记抗体的pH、抗体浓度以及重悬液的条件优化进行二联卡的制备。结果:盐酸克伦特罗检出限为3 ng·mL~(-1),沙丁胺醇检出限达到5 ng·mL~(-1)。结论:瘦肉精快速检测二联卡灵敏度、特异性、稳定性、重复性都符合要求,可应用于肉制品和饲料样品的现场快速检测。     

水产品中孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒产品的比较和应用选择

目的:对市售4款孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒的符合性、灵敏度、重复性和适应性进行验证。方法:多种类水产样品重复试验。结果:实验结果表示市售4款试剂盒操作简单,方法各异,但是质量参差不齐,结果差强人意,甚至假阴性和假阳性率居高,通过实验发现只有2款能满足现场检测要求。结论:2款快速检测试剂盒中,其中一款操作更为简便,对人员操作技巧和实验器材的需求较低,通过多次反复多种样品实验验证得出,能满足实验需求,可以推广,但是仅限于检测隐色孔雀石绿。建议:由于市售水产品中孔雀石绿残留免疫胶体金快速检测试剂盒品种繁多,产品质量不一,建议使用前经多次试验再投入大量使用。     

4种检测技术对冷冻食品沙门氏菌检测效果的比较

[目的]探讨不同检测技术在冷冻加工食品沙门氏茵检测中的实际应用的适用性.[方法]利用Reveal 抗体夹心技术,Vidas自动酶标免疫测试仪、DNA杂交探针技术和SN常规培养生化技术对4008份加工冷冻产品和11株菌种进行检测.[结果]Reveal测试条阳性数151,阳性率3.77%,无假阴性,假阳性数133;Vidas测试条阳性数27,阳性率0.67%,假阴性数3,假阳性数12;DNA杂交探针试剂盒阳性数18,阳性率0.45%,无假阴性,假阳性数1;SN培养法阳性数15,阳性率0.37%,假阴性数3,无假阳性.[结论] Reveal试剂盒敏感性高,但特异性不强,操作简便,所需材料、设备少、适于现场和多样品批量检验;Vidas自动酶标免疫测试仪有假阴性,说明有漏检可能,SN培养法结果可靠,但耗时长、操作繁琐;DNA杂交探针试剂盒法敏感特异,准确性高,适用于对准确性要求较严行业的检验.     

甲霜灵试纸实地检测与色谱检测比对结果分析

本文介绍了甲霜灵胶体金免疫层析检测试纸实地应用的验证研究成果。甲霜灵胶体金免疫层析试纸设定的Cutoff值为0.5mg/kg,样品中农残含量低于Cutoff值时为阴性,试纸检测表现为两条红线;高于Cutoff值时为阳性,试纸检测表现为一条红线。用胶体金检测试纸检测表现为阴性的样品,经色谱检测结果均低于Cutoff值,阳性样品和添加Cutoff值样品经色谱检测结果与胶体金试纸检测结果一致,相关性良好。与色谱法相比较,胶体金免疫层析检测试纸检测蔬菜中农药残留具有操作简便、直观、快速、准确的特点,其特异性、敏感性高,适用性强,可作为蔬菜采摘前农药残留自我检测的手段。     

酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法

随着社会经济的持续发展、人们生活水平的日益提高,人们对于畜产品的质量要求越来越高,优质高效的畜产品已经成为人们日常生活的基本要求。但是,受到利益的驱使,仍有部分不法分子在畜产品的饲料中添加不同含量的盐酸克伦特罗以改善动物肉质,获取非法利益,严重威胁人民群众的身体健康。基于此,本文以猪肉中的盐酸克伦特罗的测定为例,从酶联免疫吸附法的原理、操作步骤以及注意要点等方面出发,分析总结酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法,研究结果发现,采用胶体金免疫法进行初筛,使用酶联免疫吸附对初筛结果为阳性的样品进行二次检测,是提高检测准确率的有效途径。     

3种ELISA试剂盒对牛新孢子虫血清抗体比较检测

用瑞典Svanova公司、美国IDEXX公司和美国VMRD公司生产的3种检测新孢子虫血清抗体ELISA试剂盒对来自澳大利亚牛血清（41份）、新西兰牛血清（40份）、乌拉圭牛血清（30份）和中国新疆牛血清（46份）进行了同步检测和比较分析,并以其中2个试剂盒检测结果均为阳性或阴性的血清为真阳性或真阴性,对另1个试剂盒在诊断相对敏感性和相对特异性方面进行了比较评估。结果表明,3个试剂盒的诊断相对敏感性和诊断相对特异性分别为：85.7%和92.5%（Svanova）、95.8%和98%（IDEXX）、88.5%和98%（VMRD）。3个试剂盒都具有较好的重复性,检测低限相近。在对样品的检测中,IDEXX与VMRD两个试剂盒检测符合率较高,但对不同国家的样品检测符合率差别较大。     

结核菌快速检测方法用于口岸检疫的研究

[目的]评价两种结核菌快速检测方法在口岸卫生检疫中的应用价值。[方法]以＂中华人民共和国行业标准-肺结核诊断标准WS288-2008＂选取结核病人100例,有呼吸道症状的疑似病人50例,以罗氏L-J固体培养结果为标准,考核荧光实时定量PCR（RT-PCR）、分枝杆菌直接检测（MDT）在结核病诊断的敏感性、特异性。[结果]100例结核病人标本培养后均为阳性,50例可疑者标本培养后均为阴性;100例培养阳性的标本,荧光实时定量PCR检测出98例阳性,MDT检测出100例阳性;50例培养阴性标本,荧光实时定量PCR检测出1例阳性,MDT未检测阳性。RT-PCR的敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值为98.04%、98.04%、99.01%、96.15%;MTD检测敏感性、特异性、阳性预期值、阴性预期值均为100%。[结论]与传统培养方法相比较,两种方法有着很高的敏感性和特异性,但检测时间大大缩短,适合应用于口岸卫生检疫中。     

盐酸克仑特罗检测试剂盒的研制

本研究通过将盐酸克仑特罗分别与自制血清白蛋白、牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联后,制成免疫原和包被抗原,利用单克隆抗体制备技术,制备了能够分泌抗盐酸克仑特罗的单克隆抗体细胞株.以自制血清白蛋白效价最好,且该株细胞分泌的抗体特异性强,与其它克仑特罗类药物无交叉反应.在筛选出盐酸克仑特罗单克隆抗体的基础上,首次研制出利用单克隆抗体对动物组织中残留的盐酸克仑特罗进行检测的试剂盒.本试剂盒的最低检测限为0.1ng/mL,检测范围为0.1-10ng/mL,通过对24份阳性样品检测并与德国r-biopharm公司和英国的RANDOX公司同类试剂盒作对比试验,阳性符合率95.8%.     

旋毛虫实时荧光PCR检测方法的建立与应用研究

根据旋毛虫隔离种线粒体Ls-rRNA基因序列,设计一对特异性引物及TaqMan MGB探针。以Ls-rRNA阳性重组质粒为模板,建立了旋毛虫实时荧光PCR检测方法。该检测方法对各旋毛虫隔离种具有良好的特异性,而对小鼠、狗和猪正常肌肉组织、猪鞭虫、猪蛔虫、猪钩虫、犬蛔虫等无交叉反应。最小检出量为1.32×10^2拷贝（10^-5条旋毛虫）,建立的标准曲线拟合良好,扩增方程Y=-3.43X＋19.70,相关系数R^2=0.9984,扩增效率为95%。平行检测组内变异系数为1.11%（n=20）,同一组不同浓度梯度样本（n=9）间隔30d重复检测,结果无显著性差异。人工感染不同剂量猪旋毛虫的小鼠,在攻虫14d后检出率100%。对经压片镜检、人工胃液消化、胶体金试纸条检测结果为阴性的63份送检狗肉样本中敏感地检出8个阳性。     

广东省水产中孔雀石绿残留检测和分析

运用胶体金免疫层析法对广东省水产品中孔雀石绿的残留情况进行筛查。通过加标盲样测试和高效液相色谱-质谱串联LC-MS验证,该方法检出限、假阳性率和假阴性率均达到国家规定标准。在2016年7月至2019年6月,利用该方法共检测孔雀石绿项目42 458批次,检出不合格449批次,合格率为98.9%,本文同时对这三年的孔雀石绿检出情况进行了分析,为广东省相关部门开展水产品安全监督管理工作提供了参考依据。     

高效液相色谱检测猪肉盐酸克伦特罗的方法优化

通过对样品前处理方式、色谱仪器条件的优化研究改进了高效液相色谱测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法。采用高氯酸一步提取法并补充正己烷脱脂步骤,应用混合阳离子交换柱净化提取液,可有效去除杂质,避免干扰;色谱流动相选择硫酸铵+甲醇+乙腈体系,检测波长210 nm,峰形良好。验证表明改进后的方法线性范围为0.01~0.5μg/m L,线性相关系数r=0.9994,峰面积RSD为1.47%,加标回收率达90.88%。本方法前处理过程简化,分析时间缩短,适合于盐酸克伦特罗含量的快速、准确测定。     

乳及乳制品中β-内酰胺酶快速检测试剂盒的比较研究

目的:对乳及乳制品中β-内酰胺酶的两种快速检测方法进行对比,并以杯碟法作为参比方法,探求准确、快速和可靠的检测方法。方法:分别采用华安麦科β-内酰胺酶快速检测试纸条和Charmβ-内酰胺酶检测试剂盒对150份乳制品进行β-内酰胺酶检测,通过与国家指定方法杯碟法比较两种快速检测方法的检出率,进一步确证定性方法性能指标。结果:两种快速检测试剂盒均无假阴性样品出现,其中Charm检测试剂盒与国家指定方法有较好的相关性和一致性,可选用Charm检测试剂盒作为对大批量样品快速筛查的方法。     

进出口中成药中黄曲霉毒素检测方法的研究

[目的] 建立免疫亲和柱-溴化荧光分光光度法检测中成药中黄曲霉毒素总量的常规方法和免疫亲和柱高效液相色谱法检测检测黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的确认方法.[方法] 采用免疫亲和柱(IAC)净化、柱后光化学衍生的高效液相色谱/荧光检测器技术(HPLC/FLD)及溴化荧光光度法(BFS)分别测定两种中成药(水丸和蜜丸)中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2及其总量.[结果] IAC-HPLC/FLD法平均回收率为86.2%;最低检出限1.0μg / kg;BFS法平均回收率为92.1%;最低检出限1.0μg/kg.[结论] 本方法检测结果尚未发现假阳性现象,假阴性率为零.     

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法的建立和应用

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的"猪伪狂犬病抗体免疫胶体金标快速检测试纸法",该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒同时对16份猪血液或血清进行抗体水平检测,符合率达100%.同时对100份猪血液和对应血清进行检测,结果也相同.试验结果显示,本法与ELISA一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,而本方法不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查.     

酶联免疫法检测动物组织中磺胺嘧啶残留方法的建立

为了建立具有我国自主知识产权的快速检测农兽药残留的试剂以及相关的试剂盒,利用已有的科研资源,建立了快速检测磺胺嘧啶残留的酶联免疫检测法和试剂盒,其实验结果为除磺胺嘧啶外,与其他异构嘧啶类的交叉反应率约10%,与克伦特罗、氯霉素、四环素等其他药物无交叉反应,方法的特异性较好;方法的灵敏度为0.3ng/ml,定量直线范围为0.1-8.1ng/ml;样品经预处理,其检测时间约需5h;方法的回收率约60%以上;方法标准工作曲线的重复性试验的相关系数r2=0.92.同时,检测10份农兽药残留监控鸡肝样品,测定结果与理化方法HPLC结果有一定的趋同性.     

PRRSV SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM（de-letingM）,克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组M蛋白。以纯化的重组M蛋白作为抗原,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立ELISA最佳工作条件。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验验证,结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。     

水产品中氯霉素残留的放射免疫分析

[目的]建立CharmⅡ放射免疫系统测定水产品中氯霉素残留的分析方法.[方法]用CharmⅡ检测氯霉素残留试剂盒中的MSU萃取缓冲液,对样品中的氯霉素残留进行提取,通过竞争性受体免疫反应,采用液体闪烁计数仪计数.[结果]方法检测低限为0.15μg/kg;在0.15μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg3个添加水平,样品的cpm读数均落在相应控制点60%～100%的范围内;cpm读数的相对标准偏差为2.4%～8.8%.[结论]本方法灵敏度、准确度和精密度、选择性均符合残留分析质量控制指南的要求,适用于水产品中氯霉素残留的快速检测.     

用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌

[目的]采用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒.[方法]根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线.以副溶血弧菌菌株8株及同源及非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测.同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测.[结果]该方法有良好的特异性8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,其它15株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.9871.直接进行定量检测,则检测低限在102cfu/g;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfu/g.[结论]该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景.     

食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法的建立与应用

目的:建立多种食源性疾病监测中副溶血性弧菌现场快速检测方法并观察应用效果。方法:选取高密市疾病预防控制中心1年内收集的211份肠道门诊腹泻患者样本,以及以海水产品为主的150份食品样本作为研究材料,应用多种快速检测方法对研究材料进行检测并观察检测情况。结果:20株副溶血性弧菌中有1株为PCR阴性,19株3种检测方法均为阳性;3种检测方法中,海水产品的检出率最高,均为18.7%。结论:典型生化联合筛检法、实时荧光定量PCR法、恒温扩增-核酸试纸条法在快速检测副溶血性弧菌方面具有重大应用价值。