口蹄疫病毒3AB克隆表达及其抗体间接ELISA检测方法建立与应用研究

采用重叠PCR方法人工合成3AB基因片段,将其克隆到PET-28a＋载体,转化导入宿主菌BL21（DE3）中成功表达,获得大小约为33Ku的重组表达蛋白。以纯化的重组表达蛋白为抗原,建立了检测猪FMDV3ABNSP抗体的间接ELISA方法。将本方法与进口口蹄疫非结构蛋白3ABC阻断ELISA试剂盒进行比较,结果显示,本方法可以用于区分猪口蹄疫自然感染动物与疫苗免疫动物。     

美国培育出避孕玉米

美国约翰·霍普金斯大学的科学家最近利用基因技术 ,成功地培育出产生精子抗体的玉米。科学家们首先设法掌握了免疫型不育妇女白血球产生精子抗体的机制 ,然后利用克隆技术克隆大量白血球 ,从中分离出针对精子的遗传物质 ,最后植入玉米的 DNA中 ,培育出避孕玉米。科学家将这种含有精子抗体的玉米与其它物质混合后制成避孕药。预计由于这项技术成本低廉 ,一旦进入商业化生产 ,可使避孕产生革命性的进步。用这种避孕玉米制成的避孕药有望在两年后开始人体实验。美国培育出避孕玉米@纺西     

荷兰进口百合斑驳病毒的分子检测

荷兰进口百合种球,经过隔离试种,采用RT-PCR方法对怀疑感染有百合斑驳病毒的百合植株进行病毒检测,通过对RT-PCR检测扩增到的产物进行克隆测序,分析其序列,并与其他6个已知斑驳毒株进行比较,其同源性达到99%,通过汁液摩擦接种健康植株,3～7天后表现出斑驳症状,确认荷兰进口百合种球携带有百合斑驳病毒(Lily Mottle Virus(LMoV)).     

GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立

[目的] 建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法.[方法] 利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1512).将2.80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测.[结果] 显色反应良好,条带稳定,检测获得成功.[结论] 其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查.     

岩沙海葵毒素直接酶联免疫吸附检测方法的研究

[目的]制备岩沙海葵毒素(PTX)多抗血清,纯化并标记辣根过氧化物酶,建立PTX多克隆直接酶联免疫吸附检测方法.[方法]将纯品毒素PTX与大分子蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)分别巯基化,用化学法偶联二者成为半抗原,以其诱导BALB/c小鼠产生多价抗血清;以辣根过氧化物酶(HRP)标记PTX多抗血清;以PTX纯毒素作为包被抗原,HRP标记的多价抗血清为酶标抗体,建立PTX多抗直接ELISA检测方法.[结果]制备的抗PTX多价抗血清,经纯化后与HRP标记成功;建立的PTX多抗直接ELISA检测法,其最佳工作浓度为180.[结论]本研究制备的PTX人工免疫抗原具有较高的特异性和免疫原性,多克隆抗体为特异性抗PTX抗体,PTX多抗直接ELISA检测法对PTX的检测可达到5～10ug水平,该法应用于海产品中PTX快速检测的结果,待进一步研究.     

鹅细小病毒延边株VP3基因原核表达质粒构建

本试验根据GenBank已公布的鹅细小病毒B株基因序列,设计了一对扩增VP3基因的特异性引物,对鹅细小病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了约为1500bp的VP3基因片段,将其回收纯化后与pMD-18T simple载体连接,然后进行克隆,经双酶切分析、PCR鉴定及测序,验证了所克隆的基因是鹅细小病毒VP3基因.用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-1原核表达载体中,获得重组质粒PGEM-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析,证实了重组质拉的正确性.     

西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究

[目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i＋亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果]（1）重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。（2）Western blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。（3）兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1：50000以上。（4）检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。     

海洋生物岩沙海葵毒素血清免疫抗体的制备

[目的] 为建立岩沙海葵毒素(PTX)的酶联免疫快速测试方法提供特异性免疫抗体.[方法] 巯基化标准PTX成半抗原PTX-PDP;巯基化匙眼血蓝蛋白(KLH)成KLH-SH,两者合成反应人工抗原PTX-PDP-KLH.用PTX-PDP-KLH免疫雌性6～8周龄Balb/c小鼠,制备PTX多克隆抗体.用同样方法制备包被抗原PTX-PDP-BSA,用以检测血清抗体效价.[结果] 紫外检测标准品PTX的最大吸收波长在264nm处,纯品KLH及BSA的最大吸收波长在278nm及279nm处,小鼠血清多克隆抗体PTX-PDP-KLH和PTX-PDP-BSA的最大吸收波长分别在267nm和273nm处.抗血清效价达到13200 ,与正常Balb/c小鼠、昆明小鼠及兔血清间无交叉反应.[结论] 合成的PTX人工抗原纯度高,成功制备PTX多克隆抗体血清.     

泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体构建

克隆人的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)基因,并为实现UFC1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备做准备。方法:采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建并鉴定pGEX-4T-2-UFC1质粒。结果:双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pGEX-4T-2-UFC1重组载体。结论:成功构建泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体,为在原核系统中表达UFC1重组蛋白,并制备多克隆抗体奠定了基础,也为进一步研究UFC1基因功能提供了工具。     

香石竹斑驳病毒属和潜隐病毒属的PCR检测方法研究

根据香石竹斑驳病毒属和香石竹潜隐病毒属主要确定种的外壳蛋白（Coat protein,CP）氨基酸的保守序列分别设计出它们的简并引物,然后对8个香石竹斑驳病毒属的病毒和9个香石竹潜隐病毒属的病毒进行PCR检测验证,结果与预期值相符。     

噬菌体抗体库及其在检验检疫中的应用

介绍了抗体库技术,重点介绍了噬菌体抗体库技术及其在检验检疫中的应用,综述了噬菌体抗体库技术使用的噬菌体种类,所用到的不同衣壳蛋白展示系统,免疫和非免疫抗体库,噬菌体抗体库的不同分子类型,跟踪了噬菌体抗体库技术在检验检疫领域的应用研究,包括生物寄生虫检测、病毒检测、转基因产品检测、药物残留检测,以及单链噬菌体抗体库技术在检验检疫领域的研究进展。     

菜克多巴胺单克隆抗体的制备及竞争性ELISA检测方法的建立

本研究利用偶联的莱克多巴胺（Rac）作为免疫原,筛选出能稳定分泌针对莱克多巴胺的单克隆抗体的细胞株D1289,其分泌的单克隆抗体免疫球蛋白亚类为IgCl,单抗腹水的效价不低于1：1×10^7,与Rac的类似物克伦特罗不发生交叉反应。在此基础上,利用获得的单抗研究建立Rac的竞争性酶联免疫吸附检测法（cELISA）,结果表明：所建立的间接竞争ELISA方法检测校准曲线的线性范围在0．01ng／mL-10ng／mL（RE=-0．9353）。     

3种ELISA试剂盒对牛新孢子虫血清抗体比较检测

用瑞典Svanova公司、美国IDEXX公司和美国VMRD公司生产的3种检测新孢子虫血清抗体ELISA试剂盒对来自澳大利亚牛血清（41份）、新西兰牛血清（40份）、乌拉圭牛血清（30份）和中国新疆牛血清（46份）进行了同步检测和比较分析,并以其中2个试剂盒检测结果均为阳性或阴性的血清为真阳性或真阴性,对另1个试剂盒在诊断相对敏感性和相对特异性方面进行了比较评估。结果表明,3个试剂盒的诊断相对敏感性和诊断相对特异性分别为：85.7%和92.5%（Svanova）、95.8%和98%（IDEXX）、88.5%和98%（VMRD）。3个试剂盒都具有较好的重复性,检测低限相近。在对样品的检测中,IDEXX与VMRD两个试剂盒检测符合率较高,但对不同国家的样品检测符合率差别较大。     

Organic consumers’ preferences and willingness‐to‐pay for locally produced animal products

In Germany, a large share of organic animal products is being produced with imported protein feedstuffs. Products labelled as ‘local’ are also often produced with imported feed. At the point of purchase, animal products are not usually labelled with any information on the feed that was used to produce it. Therefore, it remains unclear what consumers think about the use of imported feed, in particular in the case of products labelled as ‘local’. The aim of the present research study was to analyse whether the use of local feed represents an option for successful product differentiation in the organic animal products market. Discrete Choice Experiments and computer assisted personal interviews were conducted with 597 organic consumers in Germany to investigate their preferences and willingness‐to‐pay for local organic animal products produced with local feed. The choice experiments revealed a strong preference for local feed. The outcome of our investigation also shows that the provision of information on feed imports into Germany can be an important tool for promoting organic animal products produced with local feed. The results suggest the use of local feed could be an option for successful product differentiation in the organic animal products market, especially if effort is put into raising consumer awareness of current organic feed importation practices.     

Calcium,potassium and sodium ion levels in yogurts produced in Northern Ireland

Samples of yogurt produced by local creameries were purchased and analysed for potassium and sodium using flame photometry. Calcium was estimated for by using atomic absorption spectrophotometry because of interference from phosphates. The level of these ions was found to be significantly different from existing documented concentrations     

A Meta-Analysis of Variance Accounted for and Factor Loadings in Exploratory Factor Analysis

A meta-analysis of two factor analysis outcome measures, the percentage of variance accounted for and the average (absolute) factor loading, in 803 substantive factor analyses was undertaken. The average percentage of variance accounted for was 56.6%, and the average (absolute) factor loading was 0.32. Number of variables factor analyzed, nature of the sample from which data were collected, sample size, number of factors extracted, and (minimal) number of scale categories employed influenced the percentage of variance accounted for in a factor analysis. Number of factors extracted, analytical approach, and number of variables analyzed influenced the average factor loading obtained in a factor analysis. Factor analysis of synthetic (random) data possessing the general structure as the observed data in the meta-analysis accounted for 50.2% of the variance in the data and produced an average factor loading of 0.21. The latter figures imply that many factor analyses have produced outcome measures of questionable meaningfulness.     

CO2加H2制甲醇技术研究进展

综述了CO2加H2合成甲醇国内外最新进展,发现CO2加H2合成甲醇研究目前还主要集中在催化剂的研发方面,其中以CuZnAl为主。CO2加氢合成甲醇过程中H2的来源是一个大问题,如果通过化石资源生产氢气又副产大量的CO2,这样达不到从根本上解决CO2的目的。     

高校电子商务档案与纸质档案之关系

电子商务文档是当今信息社会发展的一个重要标志,随着计算机大量应用于高校教学、科研管理等项工作中,因此产生了大量的电子商务文件,进而产生了电子商务文件档案,电子商务文件的产生给高校非电子商务文件档案工作带来新的挑战和机遇。本文就其电子商务文件管理、利用的优势及不足与传统纸质档案管理加以对比,阐明高校电子商务文档不能绝对取代纸质档案,两者在一定时期内应优势互补,并存发展。     

How the Netherlands became a bicycle nation: Users,firms and intermediaries, 1860–1940

In 1925, the Netherlands was a country of cyclists and cycle producers, as all classes cycled and almost all cycles were produced domestically. The bicycle was not a Dutch invention and the country had an open economy, and this raises the question ‘how did the Netherlands become a bicycle nation?’ This article investigates the interactions of users, firms and intermediaries from 1860 to 1940 and how these impacted the bicycle, its production and its use. Furthermore, it analyses knowledge flows and the roles of intermediaries. It illustrates changes in activities and the relevance of interactions between users, firms and intermediaries, and the effects of World War I. It shows how user organisations created an infrastructure and culture which made cycling Dutch. Firms created a cartel which produced bicycles that were wanted and used by all Dutch, as they were made in the Netherlands.     

快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]该试纸条可在15min之内完成检测;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒检测低1个滴度;对89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3份阳性,两种检测的符合率为86.52%,特异性为89.89%。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测西尼罗病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。