应用PCR技术同步检测动物产品中的4种致病菌

本研究根据沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157H7及空肠弯曲菌的不同培养特性,将单一PCR及复合PCR的方法相结合,设计合成了4种针对性的引物,通过检测4种菌不同的特异性基因片段,建立了一种同步检测的PCR方法,具有简便、快速、准确的特点.对95份实物样品检测,结果与经典方法一致,有较好的应用价值.     

能力验证试验中阪崎肠杆菌的检测

目的:完善和强化实验室质量管理体系,增强和提高实验室的市场竞争力。方法:采用食品安全国家标准GB 4789.40-2016《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》。结果:采用多种鉴定方法对样品和标准菌株进行对照检测,结果为未检出阪崎肠杆菌。结论:中国合格评定国家认可委员会(CNAS)对本实验室检测的能力验证样品试验结果判断为满意。     

7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法的比较和验证

[目的]比较和验证7种甲型H1N1流感病毒核酸检测方法,筛选出可用于实验室日常检测的方法,并证实实验室具有正确操作这些方法的能力。[方法]应用7种方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,包括5种SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法和2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒,用于方法比较和验证的参考样品包括猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、能力验证样品等不同来源的核酸。[结果]2种预期用于猪流感H1N1病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均能达到预期目的;3种预期用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸检测的SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法均无法区分2009年新甲型H1N1流感病毒核酸和猪流感H1N1病毒核酸;2种Taqman探针荧光RT-PCR试剂盒均能正确检出2009年新甲型H1N1流感病毒核酸,但只有1种可检出能力验证阳性样品。[结论]5种SYBRGreen Ⅰ荧光RT-PCR法中有2种能用于猪流感H1N1病毒核酸的检测,另外3种不能用于新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;2种Taqman探针荧光RT-PCR法的商业试剂盒能用于2009年新甲型H1N1流感病毒核酸的检测。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检出能力验证结果与分析

为了提升单核细胞增生李斯特氏菌检测能力,本实验室参加了弗帕斯(FAPAS)分析实验室能力验证机构组织的实验室能力验证。结果表明,编号为M228d02A的样品检出单核细胞增生李斯特氏菌,M228d02B未检出单核细胞增生李斯特氏菌。2个样品检验结果均取得优秀等级。     

能力验证中金黄色葡萄球菌定量检测结果分析与方法比较

目的:能力验证中运用不同金黄色葡萄球菌定量检测方法,提升实验室对金黄色葡萄球菌定量检测能力。方法:按照能力验证作业指导书规定的方法要求进行检测,并采用金黄色葡萄球菌测试片同步进行检测。结果:两种方法对编号1~9的样品均检出金黄色葡萄球菌,编号为10的样品未检出金黄色葡萄球菌。按照Baird-Parker平板计数法的结果上报,阳性样品的Z值结果均2;阴性样品的结果为10 CFU/g,10个样品测试均取得满意结果。结论:金黄色葡萄球菌定量检测能力验证中获得满意结果,通过开展能力验证工作可以更好地提高实验室的检测能力。     

国外农业科技信息摘编

美国加工食品研究所研究生产各种色泽的以水果和蔬菜为基本原料的可食膜，它含有抗菌成分，能抑制病原菌。 美国微生物学家把一种噬菌体混合物喷在鲜切的生菜上，它可以杀死在生菜表面的大肠杆菌O157H7株系。     

犬钩端螺旋体PCR检测方法的应用

采用荷兰皇家热带病研究院WHO钩体病参考中心设计的一对引物进行普通PCR检测。经反应条件与体系优化,对犬钩端螺旋体与霍乱弧菌,伤寒杆菌,沙门氏菌,产毒性大肠杆菌,致病性大肠杆菌,痢疾,溶藻菌,非O1、O139霍乱弧菌,副溶血性弧菌,O157菌进行检测,除犬钩端螺旋体以外均为阴性,表明钩端螺旋体PCR检测方法与以上菌株无交叉反应,证明了该钩端螺旋体PCR检测方法具有特异性;双链DNA灵敏度检测结果显示PCR方法可以检测到的核酸浓度最低为3×10³拷贝。此结果证明该犬钩端螺旋体PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,可用于犬钩端螺旋体样品的检测。     

入境缅甸水产品病原微生物感染携带情况调查

[目的]了解入境缅甸水产品中病原微生物的污染情况,掌握各类入境水产品的疫病疫情动态,为口岸入境食品的监测预警和分类管理提供科学依据.[方法]采用国标和检验检疫行标方法进行实验室检测.[结果]从进口鲜鳝鱼及其包装箱内水样中检出O139群霍乱弧菌6批、O1群小川血清型霍乱弧菌1批.从进口冰冻鱼、冰冻虾中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7 34批,从进口冰冻鱼中检出单增李斯特菌27批,从进口冰冻鱼、冰冻牡蛎鱿鱼和鲜螃Ζ蟹、鲜海螺中检出副溶血性弧菌52批,从进口冰冻带鱼中检出异尖线虫73批,病原微生物合计检出率冰冻鱼为13.8%,冰冻虾为9.2%,牡蛎等其他冰冻水产品为0.3%,鲜螃蟹为8%,鲜鳝鱼为3.8%,海螺等其他鲜活水产品为0.2%.[结论]从缅甸进口的各类水产品中病原微生物的感染携带情况有明显不同,在口岸检验过程中针对不同的品种,选择性地开展实施检验项目,不仅可以提高检测准确性,降低检验检疫风险,还可以减少重复劳动,节约检验成本.     

入境缅甸水产品病原微生物感染携带情况调查

[目的]了解入境缅甸水产品中病原微生物的污染情况,掌握各类入境水产品的疫病疫情动态,为口岸入境食品的监测预警和分类管理提供科学依据.[方法]采用国标和检验检疫行标方法进行实验室检测.[结果]从进口鲜鳝鱼及其包装箱内水样中检出O139群霍乱弧菌6批、O1群小川血清型霍乱弧菌1批.从进口冰冻鱼、冰冻虾中检出肠出血性大肠杆菌O157:H7 34批,从进口冰冻鱼中检出单增李斯特菌27批,从进口冰冻鱼、冰冻牡蛎鱿鱼和鲜螃Ζ蟹、鲜海螺中检出副溶血性弧菌52批,从进口冰冻带鱼中检出异尖线虫73批,病原微生物合计检出率冰冻鱼为13.8%,冰冻虾为9.2%,牡蛎等其他冰冻水产品为0.3%,鲜螃蟹为8%,鲜鳝鱼为3.8%,海螺等其他鲜活水产品为0.2%.[结论]从缅甸进口的各类水产品中病原微生物的感染携带情况有明显不同,在口岸检验过程中针对不同的品种,选择性地开展实施检验项目,不仅可以提高检测准确性,降低检验检疫风险,还可以减少重复劳动,节约检验成本.     

一次巧克力中沙门氏菌检验能力验证结果与分析

目的:考察实验室对沙门氏菌的检验能力。方法:样品的前处理按作业指导书要求,检验按照GB4789.4-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》对编号分别为CODE0461、CODE0593、CODE0615的3份巧克力样品进行沙门氏菌检验,并对阳性菌株进行血清学鉴定。结果:CODE0461、CODE0615样品均未检出沙门氏菌,CODE0593检出双相亚利桑那沙门氏菌。结论:通过此次能力验证,辽宁省食品检验检测院微生物检测所的检测能力得到了有效验证和提高。     

食品中阪崎肠杆菌和单增李斯特氏菌检测能力验证结果与分析

目的:验证本实验室对食品中阪崎肠杆菌和单增李斯特氏菌的检出能力。方法:按照能力验证作业指导书、《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》(GB 4789.40-2010)和《食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验》(GB 4789.30-2010)进行检验。结果:样品14-P346检出阪崎肠杆菌,样品14-T795检出单核细胞增生李斯特氏菌。结论:组织者对本实验室此次能力验证实验结果评价满意,说明本实验室同时具有阪崎肠杆菌和单核细胞增生李斯特氏菌的检测能力。     

理化检测实验室标准物质的控制与管理

以CNAS／CL01：2006《检测和校准实验室能力认可准则》为依据,结合CNAS认可实验室标准物质控制与管理的工作实际,详细阐述了理化检测实验室标准物质的正确选择、验收和验证、期间核查、标识和记录,以及标准物质的溯源性、不确定度、有效期、最小称样量和适应性等控制和管理要点。     

黑麦草腥黑穗病菌的快速鉴定

从进境美国黑麦草种子中发现一种类似小麦印度腥黑穗病菌(Tilletia indica)的冬孢子.选取小麦印度腥黑穗病菌的特异性引物Tin3/Tin4和黑麦草腥黑穗病菌(T.ualkeri)的特异性引物Tin11/Tin4以及两者的通用引物H4/H7、H11/H12对样品中的冬孢子进行套式PCR扩增,检出该批样品中含有黑麦草腥黑穗病菌(T.ualkeri).检测灵敏度为3个冬孢子,检测时间约为6h.与常规检测方法相比,工作效率至少提高了6倍.     

针对hly基因快速筛检食品中霍乱弧菌实时荧光PCR方法的研究

[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非O1群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系.以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化.[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性.[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致.实验室间验证结果同实验一致.[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用.     

食品中副溶血性弧菌检测能力验证分析

目的:通过参加FAPAS(food analysis performance assessment scheme)食品中副溶血性弧菌检测能力验证计划来确认及提高本验室对副溶血性弧菌的检验检测能力。方法:采用国家标准法GB 4789.7-2013和环介导等温扩增技术对收到的两份鱼肉盲样进行检测。结果:编号为M230d21A盲样未检出副溶血性弧菌,编号为M230d21B盲样检出副溶血性弧菌。结论:通过参加此次FAPAS能力验证来评价和监控实验员检验能力的持续状况,为自身的持续改进和质量管理提供信息,进一步促进实验室管理体系完善。     

检测禽流感病毒H5、H7和H9亚型的正向基因芯片的制备

通过分析比较禽流感病毒H5、H7和H9亚型不同毒株的基因组序列,设计出H5、H7和H9亚型特异性引物与探针,将扩增产物点制在芯片上,分别用H5、H7和H9亚型特异性探针与芯片杂交,研制出用于禽流感病毒H5、H7和H9亚型检测的正向杂交基因芯片,同时对正向基因芯片进行特异性、敏感性试验,并用该方法对待检样品进行了检测。结果表明,禽流感病毒正向基因芯片与新城疫病毒、传支病毒等6种禽类常见病毒无反应,其敏感性高于常规PCR方法。     

十二种食源性致病菌可见光基因芯片检测方法的建立

[目的]利用可见光基因芯片技术,针对12种常见食源性致病菌,建立快速、准确、高通量的诊断方法。[方法]设计靶细菌16S rDNA和23S rDNA的通用引物,反向引物5’端标记生物素;特异寡核苷酸探针设计在两对引物之间的可变区,5’端标记氨基基团。将探针点样于固相载体制备基因芯片,优化PCR反应体系后,PCR产物与芯片点制探针区域进行杂交,然后通过化学显色直接观察结果,并评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性等指标。收集临床样本28例,同时制备双盲模拟污染样本10例,对检测方法进一步评价。[结果]：本试验所建立的基因芯片方法可同时检测志贺菌、耶尔森氏菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、单增李氏菌、布鲁氏菌、变形杆菌、肠出血性大肠杆菌O157：H7等12种食源性致病菌,特异性高,操作简便;针对纯培养食源性致病菌反应体系的灵敏度为10^3cfu/mL,模拟样本的灵敏度为10^4cfu/mL;重复性好;采用可见光基因芯片方法检测28例临床样本,26例与常规培养方法结果完全一致,符合率达到92.9%;双盲模拟样本的检测符合率达到100%。     

海外来风

<正>英国南部一农场爆发大肠杆菌疫情英国卫生防护局于2009年9月12日宣布,英国南部萨里郡一农场因爆发O157大肠杆菌疫情而关闭。据介绍,由于疫情发生时正值暑假,有大批儿童曾到这个农场参观并接触各种动物。英国卫生防护局在当天发布的新闻公报中说,这是     

HPLC法同时测定番茄沙司中7种违禁色素

建立了同时测定了番茄沙司中的罗丹明B、碱性橙Ⅱ，碱性嫩黄O,苏丹红Ⅰ-Ⅳ等7种染料含量的高效液相色谱法（HPLC）。样品乙腈超声提取、浓缩过滤后，进行HPLC分离检测；结果在17min内可达到对以上七种非食用色素完全分离。试验表明：该方法的线性范围和相关系数为0.5-50mg/L和0.9993,检出限为3-10μg/kg;相对标准偏差（RSDs,n=6）为1.3％-3.0％     

鲤春病快速诊断技术的临床应用

本文在建立的鲤春病病毒荧光RT-PCR快速检测技术基础上,对国内外收集的19株SVCV病毒悬液进行了验证试验,验证结果良好.另外,还通过人工动物感染试验,将感染SVC病毒的鲤鱼组织样品在同经典的细胞培养分离病毒方法对比研究后,认为应用该方法检测SVCV的组织研磨样品悬液时,最多能将3尾鱼的组织器官混合后制备待检样品.本文还用本实验室制备的SVCV单抗.运用间接免疫荧光抗体技术(IFAT)对SVCV欧洲株和亚洲株感染的鲤鱼上皮瘤细胞进行检测,结果表明,该抗体可特异性检出接毒后感染细胞中的SVCV欧洲株和亚洲株,表明应用该单抗可以检测出SVCV的欧洲株或亚洲株,不会造成漏检现象.