体外诱导大鼠骨髓干细胞向肝细胞样细胞的分化

以贴壁细胞分离法分离大鼠骨髓干细胞，体外扩增，采用细胞因子诱导骨髓干细胞定向分化为肝细胞。大鼠骨髓干细胞（MSCs）体外扩增后数量剧增，各诱导组细胞胞浆内可见红染的糖原颗粒；诱导培养4周，细胞上清尿素合成、ALT、AST水平随诱导时间的延长而增加，于第28天达到高峰。Westem—blot检测表明，诱导4d的细胞开始表达AFP蛋白，7d后达到高峰。以FGF-4联合HGF因子组诱导后肝细胞特征最显著。以细胞因子FGF-4、HGF、EGF为主的诱导培养体系能促使骨髓干细胞定向分化为肝细胞，其中FGF-4联合HGF细胞因子的应用更能提高骨髓干细胞定向分化为肝细胞的转化效率。     

经典瞬时受体电位通道蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达

背景与目的 经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道蛋白是一种非选择性阳离子通道蛋白家族,主要位于细胞膜表面,对钙离子具有通透性.研究认为,TRPC可能构成钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channels,SOCC)并介导钙池操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE),从而参与细胞的增殖、迁移、基因转录等生命活动.本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中TRPC mRNA及蛋白质的表达情况,初步探讨TRPC与NSCLC的可能关系.方法 建立TRPC1-7等7个家族成员的荧光定量PCR检测方法,对24例NSCLC患者的肿瘤组织进行了TRPC mRNA的定量检测,并通过蛋白质免疫印迹法对TRPC在蛋白质水平的表达进行了验证.结果 在NSCLC患者癌组织检测到TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6 mRNA的表达,未检测到TRPC2、TRPC5和TRPC7 mRNA的表达.肺癌组织中TRPC表达丰度为:TRPC1≈TRPC6＞TRPC3＞TRPC4.蛋白质免疫印迹证实了非小细胞肺癌组织中TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6在蛋白质水平的表达.结论 非小细胞肺癌组织在mRNA和蛋白质水平均表达TRPC1、TRPC3、TRPC4和TRPC6,其中主要表达TRPC1和TRPC6,它们在构成肺癌细胞中SOCC、介导产生SOCE中的作用有待进一步研究.     

异基因外周造血干细胞移植术后CD4+ CD25+调节性T细胞相关性研究

为研究异基因外周血干细胞移植(Allogeneic peripheral blood stem cell transplantation,Allo-PBSCT)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 regulatory Tcells,CD4 CD25 Tregs)及其表达的CD28,CD152的变化,选取行ALLO-PBSCT的51例血液病恶性肿瘤患者在移植前,植入,选取 30d, 60d, 120d, 360d 6个时间点,采用流式细胞术动态监测外周血CD4 CD25 Tregs数量及其表达CD28,CD152的百分含量。Allo-PBSCT术后,CD4 CD25 Tregs数量及其表达CD28均先降后升又再次回落到接近植入前水平,二者呈正相关,CD152的表达与移植前比较,在各时间点的表达水平很低,且均无显著性差异。Allo-PBSCT过程中,CD28的表达决定着CD4 CD25 Tregs的稳态,Allo-PBSCT患者外周血CD4 CD25 Tregs的数量增加,但未被激活。     

β-磷酸三钙对大鼠间充质干细胞诱导成骨分化

为了研究组织工程骨的种子细胞和β-磷酸三钙的骨诱导性,全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCS),倒置显微镜下观察显示BMSCS大量增殖,能被β-磷酸三钙诱导成骨分化,并受BMSCS接种密度的影响。在成骨分化过程中BMSCS表现为成骨细胞的形态和集落样生长行为,对硝基苯磷酸盐法和茜素红染色方法检测诱导后细胞的碱性磷酸酶活性及矿化结节形成,结果显示细胞分泌的碱性磷酸酶活性明显强于对照组,茜素红染色呈现红色结节。因此,BMSCS可作为骨缺损修复治疗的种子细胞,在适宜的接种密度下β-磷酸三钙能诱导其成骨分化。     

水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织 CHOP、caspase-3作用

研究水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织CHOP、caspase -3作用的研究．采用单侧输尿管梗阻（ UUO）诱导大鼠肾间质纤维化动物模型,以依那普利为阳性对照药,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、水苏碱高、中、低剂量组．术后第14 d处死大鼠,收集血清测定血肌酐（ Scr ）、尿素氮（ BUN）;采用HE染色检测肾小管损伤指数,Masson染色对肾间质胶原相对面积进行半定量分析;采用免疫组织化学方法检测肾组织中内质网应激特异转录因子（ CHOP ）、细胞凋亡因子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达．各治疗组与模型组比较大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化程度、血清Scr、BUN水平及肾组织CHOP、caspase-3蛋白表达有差异（P＜0．05; P＜0．01）．水苏碱与依那普利组比较,大鼠肾组织CHOP、caspase-3表达降低（P＜0．05）,肾小管间质损伤及肾间质纤维化程度明显降低（P＜0．05）,肾功能Scr、Bun明显降低（P＜0．05）．水苏碱可能通过下调内质网应激相关凋亡途径CHOP、caspase-3表达,干扰内质网应激特异转录因子的传导通路,抑制细胞凋亡的表达,从而减缓肾间质纤维化的发生和发展．     

原癌基因RAS的系统发育分析

原癌基因（proto-oncogene）是细胞的正常基因，其编码的蛋白质参与调节正常细胞的生长与分化，在控制细胞增殖的信号转导途径中起作用。一旦受到致癌因子的影响，其活性就会发生变化，引起细胞癌变。基于目前GenBank的数据，运用相关的生物信息分析工具和分析方法，可对Ras原癌基因的转录本序列进行比对、筛选。该文是在此基础上选用目前较常用的构建系统发育树方法，建出系统发育树。结果表明，构建出来的树有三个大分枝，在分类学上分别是真菌界（Fungi）、四足动物（Tetrapoda）、体腔动物（Coelomata）。后两者又是处于后生动物，这样就可以初步确定Ras原癌基因的起源分枝。     

体外培养兔成骨细胞的改进方法

为了提高体外培养兔成骨细胞的效果,实验选用了出生15天幼兔的颅盖骨,将酶消化法和组织块法相结合,体外分离培养了成骨细胞并对其进行了鉴定.倒置显微镜及Giemsa染色观察培养细胞的形态及生长特征,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色分别显示培养细胞的碱性磷酸酶活性和矿化能力,结果显示培养细胞具有体内成骨细胞的形态学特征和生物学行为.改进的兔颅盖骨成骨细胞体外培养方法是成功的,且具有操作简单、费用低以及细胞几乎不受损伤的优点.     

高表达HER2／neu小鼠乳腺癌肿瘤模型的建立

用不同数量的处于对数生长期的D2F2细胞接种于BALB／C小鼠的胸部皮下，建立高表达HER2／neu的小鼠乳腺癌肿瘤模型，并观察小鼠肿瘤的生长特点，应用免疫组织化学染色方法进行鉴定，归纳总结接种细胞数与肿瘤发生率的关系和肿瘤生长对小鼠生活状态的影响。结果显示：在接种细胞数大于5×10^9／L时，BALB／c小鼠的肿瘤模型全部建立成功，免疫组织化学结果显示，肿瘤组织高表达HER2／neu且D2F2细胞接种于BALB／C小鼠的肿瘤模型成功率与接种细胞数成正比。     

地塞米松降低顺铂对肝癌原代细胞的毒性效果

分离2例经病理学确诊为原发性肝细胞性肝癌的原代细胞，悬于20％小牛血清的RPMI 1640培养液，置于37℃、5％CO2培养箱培养，并进行显微镜观察和细胞计数。再经不同浓度的顺铂＋／-地塞米松处理，采用MTT法检测肝细胞癌原代细胞增殖状况，评价地塞米松对肝癌化疗效果的影响。在2例肝细胞癌的原代细胞培养中，地塞米松均有降低顺铂对肝细胞癌的原代细胞的坏死作用，增加了肝癌细胞的存活率。说明地塞米松对顺铂的细胞毒性有降低作用，可以缓解肝癌伴肝功能减低患者的化疗毒性作用。     

组织工程角膜上皮治疗兔角膜缘干细胞缺损模型的实验研究

采用全板层切除术制作兔眼角膜缘干细胞完全缺损模型,取对侧眼角膜缘组织进行干细胞培养,并以纤维蛋白为基质网架构建组织工程角膜上皮.将实验动物随机分为实验组和对照组,对照组移植不含干细胞的凝胶膜,术后观察1个月.以角膜上皮染色、角膜混浊及新生血管3项指标进行效果评价.结果显示,实验组角膜上皮是一个逐渐修复的过程,角膜水肿、炎性反应逐渐减轻,新生血管明显减少,由此得出,以纤维凝胶膜为一种新型的组织工程材料制备的组织工程角膜上皮经移植术后证实可修复角膜上皮的损伤.     

肿瘤干细胞与乳腺癌的研究进展

肿瘤干细胞学说认为肿瘤来源于一小群具有干细胞特征的＂癌生成＂细胞。已有研究表明：带有CD44＋/CD24-表型的乳腺癌细胞被认为具有干细胞样及肿瘤浸润的特征;ALDH1阳性表达的乳腺癌患者预后最差,因此带有ALDH1表型的乳腺癌细胞也被认为是一种乳腺癌干细胞。乳腺癌干细胞的发现将有助于进一步认识乳腺癌发生发展的机制。另外,前期的研究表明＂拟血管生成＂可能是早期肿瘤血管形成的主要方式之一,而且肿瘤干细胞可能与肿瘤的血管形成有关。     

中西医结合疗法促进柯萨基病毒感染者免疫功能的恢复

探索用中西医结合疗法对柯萨基病毒感染者免疫功能恢复的促进作用。方法:64例柯萨基病毒感染引起的外感风热证患者,随机分为两组,一组为单纯西医治疗组,另一组为中西医结合治疗组。用流式细胞仪分别检测他们入院初和出院前外周血中作为各功能群淋巴细胞标志的几种CD抗原,并将检测结果与当地健康人群和这两组病人之间作对比分析。结果:二组患者入院初外周血CD8 淋巴细胞百分率明显高于对照组,而CD4 、CD16 和CD5 6淋巴细胞百分率及CD4 /CD8 明显低于对照组(P值均<0.01),而两组患者之间无显著差异。出院前单纯西医治疗组上述各项检测指标仍异于对照组(P<0.01),而中西医结合治疗组上述各项检测指标却与对照组无显著差异(p>0.05)。显示中西医结合治疗更有利于柯萨基病毒感染患者免疫功能的恢复。     

创伤弧菌诱导小鼠树突状细胞DC2．4凋亡的实验研究

通过建立Vvl_1758标准菌株与小鼠树突状细胞DC2．4的细胞感染模型,计算其感染率,并采用FITC—AnnexinV／PI荧光标记流式细胞术检测小鼠树突状细胞DC2．4的凋亡情况。结果显示：Vvl．1758标准菌株与小鼠树突状细胞Dc2．4混合培养1h后,即见有创伤弧菌的侵入,混合培养2h、3h、4h、5h、6h后,细菌侵入细胞现象明显,侵入率分别为（36．3±3．4）％、（55．1±4．7）％、（67．9±6．3）％、（83．9±5．8）％和（91．9±8．3）％,与混合培养lh（12．1±1．3）比较,细菌侵入率明显升高（P〈0．05）;Vv1．1758标准菌株与小鼠树突状细胞DC2．4混合培养1h,2h,3h,4h,5h,6h后,细胞凋亡率分别为（6．2±1．1）％、（26．9±8．8）％、（35．5±10．2）％、（43．3±11．7）％、（60．8±13．8）％和（76．1±15．3）％,由此得出,创伤弧菌可侵入DC2．4细胞,诱导细胞凋亡可能是其损伤DC2．4的主要机制。     

环行交叉路口雨水口布设的研究

环行交叉路口的雨水口布设问题是城市道路排水系统设计和建设中不可忽视的问题。针对环行路口与直线道路的差异,在分析了道路积水的基础上,引入以环行路口中心线所构成圆环中雨水口间的角度进行汇水面积的计算,以雨水口之间角度确定位置的雨水口布设方法。新的环行交叉路口雨水口布设方法以雨水流量的计算为基础,较现有均匀布设雨水口的方法合理。     

不同工艺条件对Ni-Cr合金表面烤瓷效果的影响

文章主要研究了热处理和酸蚀及它们的组合对Ni-Cr合金表面烤瓷效果的影响。研究发现单独热处理或热处理结合酸蚀均可提高材料的显微硬度,单独热处理效果最好。酸蚀与热处理均可提高材料的结合强度,酸蚀和酸蚀+热处理是2种提高结合强度的有效处理方式,其界面结合强度分别达到40.4MPa和37.87MPa,大大高于不做处理的样品。SEM观察发现,样品经处理后其表面往往更粗糙,基体与瓷层之间的界面更加曲折,有利于界面结合强度的提高。     

短切玄武岩纤维增强沥青混合料作用机理研究

为了有效提高玄武岩纤维表面对沥青的吸附力,将玄武岩纤维表面通过硅烷偶联剂处理后,使纤维表面与偶联剂之间形成si一0一si键的同时形成一层亲有机薄膜,使其与沥青具有较好的亲和性．并对掺入玄武岩纤维的沥青混合料进行了研究．结果表明,在沥青混合料中掺入一定比例的玄武岩短切纤维,能使混合料的稳定度提高、流值增大．     

制冷剂流量和风量对再循环蒸发器传热性能影响

蒸发器超倍供液系统中的制冷剂有较大流速,增加了液体制冷剂和蒸发管内表面的接触,从而改善换热,增大传热系数,提高蒸发器的效率。本文对再循环蒸发器制冷剂流量和配用风机的风量对蒸发器的净制冷量的影响作了理论计算分析,为合理设计再循环蒸发器提供了理论依据。