hTNF β、h1FN γ融合基因(h γ TNF β)的重组与其表达产物的纯化和功能研究

rhTNF β和rhIFN γ均为多效性细胞因子,因TNF β N端和IFN γ C端的缺失体,不仅可增加其抗癌的细胞毒效应并可降低对机体的副作用,而两者对瘤细胞的杀伤又有一定的协同作用.据此,应用高效表达质粒pBV220、pREST和pET等分别构建成hlFN γ突变体表达质粒及其与hTNF β N端缺失体相融合的h γ TNF β表达质粒,并获得表达量分别为18%和45%的工程菌株(表达产物均以IB存在于菌体),与此同时还构建了表达量为15%左右的His6-hTNF β的质粒及其工程菌,并对产物纯化和保持其活性等方法进行了研究.……     

hTNF β、h1FN γ融合基因(h γ TNF β)的重组与其表达产物的纯化和功能研究

rhTNF β和rhIFN γ均为多效性细胞因子,因TNF β N端和IFN γ C端的缺失体,不仅可增加其抗癌的细胞毒效应并可降低对机体的副作用,而两者对瘤细胞的杀伤又有一定的协同作用.据此,应用高效表达质粒pBV220、pREST和pET等分别构建成hlFN γ突变体表达质粒及其与hTNF β N端缺失体相融合的h γ TNF β表达质粒,并获得表达量分别为18%和45%的工程菌株(表达产物均以IB存在于菌体),与此同时还构建了表达量为15%左右的His6-hTNF β的质粒及其工程菌,并对产物纯化和保持其活性等方法进行了研究.     

嗜水气单胞菌穿梭质粒载体pBKPU01的构建、表达和鉴定

为构建嗜水气单胞菌穿梭质粒载体,试验根据质粒pBK760基因序列设计特异性引物,对质粒pBK760进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物连接到pMD20载体中,构建嗜水气单胞菌穿梭质粒载体pBKPU01,提取重组质粒载体进行鉴定,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性转化子,最后将阳性转化子转入嗜水气单胞菌,获得具有标记抗性基因的嗜水气单胞菌。结果显示,构建的嗜水气单胞菌穿梭质粒载体pBKPU01经PCR和酶切鉴定正确,并且能在大肠杆菌中表达,表明质粒pBK760成功插入pMD20载体中,嗜水气单胞菌穿梭质粒pBKPU01构建成功。     

禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗在小鼠体内免疫效果试验

应用PCR技术扩增获得禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体,再亚克隆到真核表达质粒载体pCDNA3.1(+)上,构建重组质粒pcA,体外转染Vero细胞,RT-PCR和间接免疫荧光试验检测其转录表达情况.动物免疫分为3组:pCDNA3.1(+)组、PBS对照组和pcA组,每组16只BALB/c小鼠,pCDNA3.1(+)组和pcA组以100μg/只的剂量肌注免疫,PBS组每只小鼠肌注100μL 1×PBS,各组均免疫3次,每次间隔2周.间接ELISA检测免疫后小鼠血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况,三免2周后检测脾淋巴细胞IFN-γ分泌情况.强毒攻击,计算小鼠存活数目及保护率.结果显示,间接免疫荧光试验和RT-PCR检测结果均表明pcA可在体外培养的Vero细胞中表达目的蛋白.动物免疫后,pcA组免疫小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)组和PBS组相比差异极为显著(P＜0.01).经提取的禽多杀性巴氏杆菌总外膜蛋白(Omps)刺激后,pcA组的刺激值(SI值)与pCDNA3.1(+)组及PBS免疫组相比均差异显著(P＜0.05).脾细胞产生的IFN-γ极显著高于两对照组(P＜0.01).强毒攻击后pcA组保护率明显高于两对照组,可达60%.结果表明,成功构建了禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗,该疫苗可诱导免疫小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答及一定的保护效果.     

心衰大鼠心肌细胞过表达β_2受体对SERCA2a/PLB的影响及分子机制研究

目的:检测过表达β_2-AR蛋白的慢性心衰大鼠心肌细胞SERCA2a/PLB的改变及相关信号转导通路的改变,初步探讨过表达β_2-AR基因影响心衰大鼠心肌细胞收缩功能的分子机制。方法:通过腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭模型并采用胶原酶消化法分离心衰大鼠心肌细胞,转染携带β_2-AR目的基因的重组腺病毒,通过免疫印迹方法检测β_2-AR的过表达对心衰时SERCA2a/PLB的影响,及其导致的心肌收缩功能的改变,探讨过表达β_2-AR保护心衰大鼠心肌细胞的分子信号机制。结果:心衰后β_2-AR的过表达改善了PLB与SERCA2a的结合与解离,从而调节了SERCA2a对Ca~(2+)的摄取(P0.05)。结论:心衰大鼠心肌细胞过表达β_2-AR后,增加的β_2-AR通过PLB/SERCA2a调节了心肌细胞的收缩舒张功能。     

β-环糊精接枝聚丙烯酰胺处理含Cr~(3+)废水

以β-环糊精和聚丙烯酰胺为原料,接枝反应合成β-CD-PAM絮凝剂,分别用β-CD-PAM、β-环糊精、聚丙烯酰胺处理模拟含Cr3+废水,研究药品用量、温度、pH值等因素对去除效果的影响。试验结果表明:β-CD-PAM与β-环糊精、聚丙烯酰胺相比,对Cr3+去除能力皆有明显提高;β-CD-PAM处理浓度为10mg/L的Cr3+标准溶液,最优化条件组合为:药品投加量1.5g/L、温度35℃、pH值5⁶,去除率可达到87.23%。     

γ谱快速测定土壤中226Ra的含量

根据226Ra及其子体的累积规律,推导出226Ra活度的计算公式,研究了该公式在高纯锗γ谱仪对土壤样品测量分析中的应用效果,并与传统γ能谱法的结果进行比对.研究结果表明,该方法能够快速测定土壤中226Ra的含量,适用于时间要求较紧的测量工作.     

大孔树脂NG-13处理含β-萘磺酸废水的研究

采用新型大孔吸附树脂NG-13,对2-萘酚生产过程中产生的高浓度含β-萘磺酸废水进行吸附处理.结果表明,经树脂吸附处理后,废水中β-萘磺酸质量浓度由8 500 mg/L降低为1 000 mg/L以下,β-萘磺酸回收率大于87％,树脂经脱附后可重复使用.该处理工艺投资少、运行稳定、操作简便且已实现工业化.     

863计划成果

表达狂犬病毒不同蛋白的重组痘苗 病霉的构建及其生物学特征的研究 用狂犬病毒CVS株的糖蛋白(G)和核蛋白(N)基因,先后构建了6株重组痘苗病毒,其中4株表达G的,以G基因插入应苗病毒天坛株的不同部位(TK区或Hind Ⅲ M区),并在痘苗病毒P11或P7.5K启动子控制下,以及控不同的DNA转染方式在细胞内重组(用TK拯救技术或避开     

结核分枝杆菌HspX基因真核表达载体构建

为构建结核分枝杆菌Hsp X基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,文章采用PCR法扩增Hsp X基因,定向插入到质粒p EGFP-N1的多克隆位点。结果显示,融合基因真核表达载体,经双酶切鉴定、基因测序鉴定克隆片段大小和序列正确。文章成功构建了p EGFP-N1-Hsp X融合基因真核表达载体。     

山东省城镇居民消费结构的ELES模型分析

一、理论模型的建立和估计方法消费结构分析的首要步骤是建立合适的理论模型,我们选用在西方国家有较大影响并被广泛使用的线性支出系统和扩展线性支出系统模型。扩展线性支出系统（ＥＬＥＳ：ＥｘｔｅｎｄｅｄＬｉｎｅａｒＥｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅＳｙｓｔｅｍ）是由陆弛（Ｌｉｕｃｈ）提出的。其基本形式是：ｐｉｑｉ＝ｐｉγｉ＋βｉ（Ｉ－ｎｊ＝１ｐｊγｊ）（１）其定义域是ｑｉ＞γｉ＞０,ｉ＝１,２…ｋ…ｎ。ｐｉ、ｑｉ分别是商品ｉ的价格和实际需求量;γｉ是维持生活的基本需求量;βｉ为总收入除去基本生活消费支出后剩余部分…     

西安城市标识系统设计中的文化性研究

本文在对城市标识系统的内涵及其文化性分析的基础上，采用了文献研究和调查研究相结合的研究方法，指出了西安城市标识系统设计中文化缺失的现象，并提出了西安城市标识系统设计中文化功能构建的方法和意义。     

论P2P网贷平台下的消费金融发展新模式

P2P平台与消费金融融合是金融创新的必然产物,是促进资本与商品交换的有效手段,是在金融资源配置中实现公平与效率的有机统一。文章通过分析P2P消费金融优势与不足,从现实角度出发提出要从资金端、平台端、项目端和全流程监管进行改造与升级,构建符合包容性金融体系的P2P消费金融生态体系。     

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立亨廷顿病(HD)细胞模型

目的:探索CRISPR/Cas9基因编辑技术在构建亨廷顿病(Huntington's Disease,HD)细胞模型中的应用。方法:借助CRISPR/Cas9靶点设计网站对IT15基因进行分析并设计gRNA靶点序列,检测gRNA靶点序列的体外Cas9酶切活性。选择体外活性较好的一对gRNA靶点序列并装载到VK001-05打靶质粒上,根据靶点位置设计并构建50个CAG(Poly Q)重复且有EGFP和PuroR标记的Donor质粒。将打靶质粒和Donor质粒混合并借助转染试剂转染CATH-a细胞,提取转染后细胞基因组DNA鉴定gRNA靶点位置的基因型。结果:转染后CATH-a细胞的gRNA靶点位置准确无误地敲入50个CAG重复碱基。结论:研究进一步拓展了CRISPR/Cas9基因编辑技术在构建遗传性基因突变疾病模型方面的应用,同时也为未来临床治疗该类疾病提供了参考基础和研究平台。     

用正交法探讨粘结砂浆和抹面砂浆的试验分析

本文采用正交法试验粘结砂浆和抹面砂浆，结果表明，粘结砂浆中纤维素醚的最佳掺量宜为0．40％，可再分散乳胶粉最佳掺量宜为2．5％，憎水剂最佳掺量宜为0．30％。抹面砂浆中纤维素醚的最佳掺量宜为0．40％，可再分散乳胶粉最佳掺量宜为2．5％，木质纤维素最佳掺量宜为0．20％，憎水剂最佳掺量宜为0．30％。     

城市社区社会资本的概念、缺失与路径重构——兼谈深圳社区社会资本的培育

城市社区社会资本对于解决社区建设中出现的许多矛盾起着重要作用。可由于种种原因,当下城市社区社会资本严重缺失,这对和谐城市社区的构建形成极大挑战。文章以社会资本理论为分析视角探讨城市社区社会资本缺失与路径重构,着重分析社区社会资本的概念,城市社区社会资本缺失的根源及以深圳社区培育社会资本为例简述社区社会资本的路径重构。     

关于取保候审若干问题的思考

取保候审制度对我国建设社会主义法治社会具有重要意义。但由于基本理念的缺失和客观条件的限制，我国的取保候审无论在制度设计上还是在司法实践中都存在诸多问题，亟需完善。笔者分析了我国取保候审存在的问题及其原因，并就理性构建符合我国国情的取保候审制度提出思考。     

农村空心化与社区建设创新

伴随着中国改革开放和城镇化进程的加快,农村剩余劳动力大规模迁移流动,导致空心化现象产生并严重阻滞着农村经济、社会的可持续发展。农村社区作为我国新时期乡村社会转型需求的产物,是弥补政府公共管理缺失的重要主体,通过其利益聚合、服务提供、关系协调、诉求表达以及文化引导等多项治理功能的发挥,为农村空心化问题的攻克提供了科学的路径选择。     

β晶体含量及结晶形态对无规共聚聚丙烯韧性的影响

采用广角X射线衍射(WAXD)、差示扫描量热仪(DSC)及偏光显微镜(PLM)等研究了β改性PPR的结晶行为,并测试其力学性能。结果表明:通过调节β成核剂含量能够调控PPR的结晶结构和结晶形态,成核剂含量为0.05wt%和0.1wt%时,β晶体含量分别达到36.0%和29.7%,且分别形成"花瓣状"和"树枝状"β晶体,该类β晶体超分子结构更有利于提高PPR的力学性能。     

上海市部分地区饮用水中总α、总β放射性水平检测

本文目的评价上海市部分地区生活饮用水总α、总β放射水平。方法为利用241Am和40KCl作为总α、总β放射性测量的标准物质,使用国家《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)测量水样中的总α、总β放射性。结果表明,上海部分被测地区饮用水中总α比活度2015年平均值为0.0373 Bq/L,2016年平均值为0.0312Bq/L;总β比活度2015年平均值为0.222 Bq/L,2016年平均值为0.264 Bq/L。结论上海地区饮用水中总α、总β放射性水平均低于国家标准限值。