泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体构建

克隆人的泛素结合酶UFC1(ubiquitin-fold modifier conjugating enzyme 1)基因,并为实现UFC1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备做准备。方法:采用RT-PCR方法从宫颈癌Hela细胞中扩增UFC1基因全长cDNA,双酶切后克隆到原核表达载体pGEX-4T-2中,构建并鉴定pGEX-4T-2-UFC1质粒。结果:双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pGEX-4T-2-UFC1重组载体。结论:成功构建泛素结合酶UFC1基因的原核表达载体,为在原核系统中表达UFC1重组蛋白,并制备多克隆抗体奠定了基础,也为进一步研究UFC1基因功能提供了工具。     

双表达系统制备新型冠状病毒N基因装甲RNA颗粒的研究

人工合成新型冠状病毒(SARS-CoV-2)标准参考毒株Wuhan/WIV04/2019完整N基因序列(1260 bp)和包含MS2噬菌体基因组成熟酶蛋白、衣壳蛋白基因序列(1682 bp),分别克隆到原核双表达质粒pACYCDuet-1的2个不同的多克隆位点,从而获得重组表达质粒pACYC-MS2-CoV2 N.将p...     

鹅细小病毒延边株VP3基因原核表达质粒构建

本试验根据GenBank已公布的鹅细小病毒B株基因序列,设计了一对扩增VP3基因的特异性引物,对鹅细小病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增,得到了约为1500bp的VP3基因片段,将其回收纯化后与pMD-18T simple载体连接,然后进行克隆,经双酶切分析、PCR鉴定及测序,验证了所克隆的基因是鹅细小病毒VP3基因.用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切该片段并回收该片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的PGEM-4T-1原核表达载体中,获得重组质粒PGEM-VP3,经PCR鉴定,限制性内切酶双酶切分析,证实了重组质拉的正确性.     

弓形虫P30基因的克隆及其在E．coli中的融合表达

【目的】研究弓形虫P30基因的克隆及其在E．coli中的融合表达。【方法】参照弓形虫P30序列设计引物,应用PCR技术扩增出弓形虫RH株P30的部分基因,将扩增产物克隆到pUCm—T载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET-30a中,得到重组质粒pET-30a—P30并将其转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Westen-blot分析。【结果】P30基因在E．coli中得到了高效表达,表达的融合蛋白的分子量在30kDa附近,可以被鼠抗Toxoplasma gondii阳性血清特异性识别。【结论】该研究为Toxoplasma gondii的检测和疫苗研制及综合防制奠定了基础。     

海洋放线菌铁蛋白的克隆

本文利用PCR技术,以海洋放线菌为DNA的模板,克隆出铁蛋白的目的基因片段,然后进行酶切,再与载体p UC18结合构建重组质粒,转移到大肠杆菌中,然后提取质粒,通过酶切验证和测序验证重组质粒是否正确。该基因的克隆为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

一种真鲷虹彩病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

真鲷虹彩病毒一直被世界动物卫生组织列入必报疫病病原目录,该病毒与传染性脾肾坏死病毒在基因序列上没有区别。为了快速检测病原,本文根据传染性脾肾坏死病毒主要衣壳蛋白序列中一段基因保守区设计引物和TaqMan探针,建立了真鲷虹彩病毒特异性实时荧光定量PCR检测方法,并利用PCR反应扩增出的衣壳蛋白基因制备了pGEM-T/真鲷虹彩病毒重组质粒作为标准阳性对照。经试验,反应在模板量102-106拷贝浓度范围内有较好的线性关系,检测限最低可达100拷贝数,而且与流行性造血器官坏死病毒、甲鱼虹彩病毒等6种水生动物病毒无交叉反应。结果证明该方法具有简便、快速、敏感、特异等特点,它的建立为该病诊断与病原检测提供了一个重要手段。     

牛朊病毒正常蛋白特异性片段的克隆表达和纯化

[目的] 表达重组牛朊病毒正常蛋白特异性片段.[方法] 用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因,利用DNA重组技术,将牛朊病毒正常蛋白特异性片段基因插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,将表达产物(包涵体)用8mol/L尿素溶解,在变性条件下用Cu2+氧化复性纯化.[结果] 重组表达质粒在大肠杆菌中得到了高效表达,目的蛋白分子量约为15KD,Western blotting分析表明,目的蛋白具有朊病毒蛋白的抗原特性,变性条件下用Cu2+氧化复性纯化得到电泳纯的重组蛋白.[结论] 这一工作为下一步制备抗体和进行结构、功能的研究打下扎实基础.     

PRRSV SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达及间接ELISA检测方法的初步建立

通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM（de-letingM）,克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组M蛋白。以纯化的重组M蛋白作为抗原,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立ELISA最佳工作条件。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验验证,结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。     

口蹄疫病毒3AB基因的表达及活性分析

通过重叠PCR合成口蹄疫病毒3AB基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/3AB,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.重组蛋白主要以包涵体的形式表达,将包涵体洗涤溶解后,采用Na2 离子金属螯合亲和层析柱纯化,逐步透析法复性.ELISA实验表明,目的蛋白能与猪口蹄疫阳性血清发生特异性反应.本研究为建立以基因工程产品为抗原、鉴别诊断自然感染和免疫动物的方法提供了技术条件.     

西尼罗病毒NS1蛋白的原核表达及其免疫原性研究

[目的]采用大肠杆菌表达系统表达西尼罗病毒NS1蛋白,并对表达产物进行免疫原性分析。[方法]将WNV NS1基因克隆入pET30a载体,获得重组表达质粒pET30a-WNV-NS1,并转化入BL21感受态细胞,将表达产物进行SDS-PAGE和W estern-blot分析,经N i＋亲和层析纯化、阴离子交换层析后获得纯化的WNV NS1蛋白;将纯化产物免疫新西兰兔,获得的免疫血清作ELISA检测。将重组蛋白包板,检测FOCUS公司商品化试剂盒中的阳性血清。[结果]（1）重组WNV NS1蛋白获得表达并纯化成功。（2）Western blot结果显示表达的蛋白是带有H is标签的目的蛋白。（3）兔免疫血清的间接ELISA结果显示血清效价达到1：50000以上。（4）检测商品化试剂盒中的阳性血清,其OD450吸光值与阴性血清吸光值之比大于2。[结论]重组NS1蛋白能在大肠杆菌系统中获得表达;纯化产物具有免疫原性,而且可以作为抗原检测西尼罗病毒感染的血清,为进一步研究NS1蛋白的生物学特性及西尼罗病毒的诊断试剂奠定了基础。     

VOA探秘

如果不是朋友出来接我,无论如何我也不能把大名鼎鼎的“美国之音”和华盛顿这栋不起眼的楼房联系在一起。     

再论中国体育制度改革的取向

中国体育事业的进一步发展需要以对传统体育管理体制的改革作为前提。由于体育事业在社会生活系统中的特殊地位及其本身的多功能、多属性特征 ,决定了它的改革取向是多因素综合作用的结果 ,并呈现出层次区分。同时 ,应坚持体育事业的经济效益和社会效益的统一。     

方太“十年”的故事

带着雨后的清新空气．我们在慈溪市对外贸易经济合作局负责人的带领下．来到了著名的方太厨具有限公司。步入方太办公大楼．首先映入眼帘的就是方太的精品厨具展示厅。我们的目光刹那间被展示厅内一组组整体厨房设备和方太发展历程展板所吸引。一直以来．有一个误区．以为方太是香港的品牌．来到慈溪方太的厂区．看到这一幕幕方太的发展史．才深刻了解了这是我们民营企业的自主品牌。那么，创立这个品牌的主人是谁？它又有哪些鲜为人知的故事呢？方太厨具有限公司的董事长茅理翔为我们揭开了它神秘的面纱。     

股东转让股权的实际受让人是谁?

梁某与陈某均系上海某电器有限公司股东,梁某持有50．51％的股权,陈某持有8．744％的股权。2006年12月,梁某与陈桌签订《公司内部股权转让合同》,陈某将其持有的全部股权转让给梁某,转让价格为25万。梁某另外承担税金3万元。同月,梁某付清了全部款项。其后,梁某要求陈某办理变更登记手续,但陈某此时拒绝办理变更登记,要求撤销《公司内部股权转让合同》。梁某不同意,故以陈某与上海某电器有限公司为被告诉至法院,要求确认与陈某签订的合同合法有效,并要求陈某办理股权变更手续。     

中国服务业发展的对策思路——基于知识经济背景下的研究

知识经济是建立在知识和信息的生产、分配和使用基础之上的经济形态。文章阐述了知识经济条件下 ,全球服务业发展的新趋势 ,分析了中国服务业存在的问题 ,提出了中国迎接知识经济挑战、发展服务业的对策思路。     

EFFECT OF FIBRE CONTENT AND METHOD OF APPLICATION OF SELECTED INTERFACINGS ON PERFORMANCE OF GARMENTS AFTER REPEATED LAUNDERING

The purpose of the study was to investigate the effect of fibre content and method of application of selected interfacing fabrics on appearance of garments after repeated laundering. Experimental fabrics were three interfacings of 100% polyester sew-in, 100% rayon and 100% polyester fusible, and two white fashion fabrics of polyester/cotton durable press treated and 100% cotton. Thirty blouses were constructed and divided into six groups representing six combinations of fashion and interfacing fabrics. Evaluation methods included appearance, dimensional stability and stiffness. Data were statistically analysed using t tests and Pearson rank order correlation coefficient. Results showed that method of applying interfacing fabrics had a significant effect on appearance of the combined fashion and interfacing fabrics. Sew-in method resulted in satisfactory appearance throughout repeated laundering for polyester/cotton DP fabric. Deterioration of adhesive resin of fusible interfacings in the laundering process resulted in significant shrinkage and poor appearance. Also, relationship was found between per cent shrinkage and appearance ratings indicating that as per cent shrinkage increased, appearance ratings decreased. Effect of fibre content of interfacings on appearance was not significant. However, interfacing fabrics were found to be the major contributor to shrinkage of composite fabric and not the fashion fabrics. Poor appearance of fusible interfacings was related also to per cent loss of stiffness.     

我国文化遗产保护与开发问题探析

我国文化遗产地旅游开发中存在盲目兴建旅游基础设施、盲目追求游客数量增加,对文物建筑和遗产地造成了不同程度的损害。为了保护世界遗产不受旅游开发和经营服务活动的损害,需要从管理体制、人才培养、坚持功能分区等方面制定相应的对策。     

THE EFFECT OF ACTIVATION OF THE OXIDATION REACTION OF SODIUM PERBORATE ON THE CLEANING OF TEXTILES AND THE CONSUMPTION OF ELECTRIC ENERGY

The purpose of this study was to investigate the bleaching efficiency of activated sodium perborate at low washing temperatures and the resulting energy saving. The comparison of the washing efficiency of basic and activated detergent was based on practical washing tests. The types of dirt used were coffee, fruit juice, tea, blood and a soot-oil mixture. The washing temperatures were 50, 60, 70 and 80°C. The cleanness of the washing was determined by a whiteness measurement. The consumption of electrical energy was measured with a kWh-meter. The higher the temperature, the more effectively all the types of dirt were removed from the textiles. With activated detergent a cleanness was obtained at 50°C and 60°C that was almost as good as with basic detergent at 80°C. The coloured types of dirt washed out more easily than blood or the soot and oil mixture. An average saving of 20% in the consumption of energy was obtained when the washing temperature was lowered by 10°C. With activated detergent, 45% of the energy consumed using basic detergent was saved with no reduction in the final cleanness.     

政府角色转换与东北老工业基地振兴

振兴东北老工业基地被作为一项国策提出来, 从中央到地方都给予了极大关注。振兴东北老工业基地实质上是实现东北经济区重新大发展。为更好地服务于这次经济转型战略, 向“服务型政府”转变是今后政府改革的必然选择。服务型政府的角色主要包括: 为东北老工业基地的产业调整提供政策导向、提升生产要素的质量、提供经济增长的基础设施与社会保障支持。     

股东资格可以依法继承吗？

本刊第四期刊发的《有限责任公司股东能否对部分股权行使“有限购买权”？》一文，颇受读者关注，有读者反映读了此文很受启发。近来，我国证券市场十分活跃，作为一种特殊形态的有限责任公司的股权继承，较一般的股权转让更为复杂，部分股民对此的“认知度”往往高，有的甚至模糊不清。本期“经济与法”特刊发施剑蓉《股东资格可以依法继承吗？》一文，希望对读者有所帮助。[编者按]