快速检测西尼罗病毒胶体金免疫层析试纸条方法的建立

[目的]建立一种能快速区分、简便诊断西尼罗病毒感染的胶体金免疫层析试纸条方法。[方法]采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记西尼罗病毒NS1蛋白,采用双抗原夹心法制备胶体金免疫层析试纸条,对试纸条进行特异性和敏感性评价。[结果]该试纸条可在15min之内完成检测;在敏感性上,该试纸条对阳性血清的检测较美国Focus公司商品化的ELISA试剂盒检测低1个滴度;对89份阴性血清进行检测,试纸条检出9份阳性,ELISA试剂盒检出3份阳性,两种检测的符合率为86.52%,特异性为89.89%。[结论]初步建立了一种可以用于现场快速检测西尼罗病毒的胶体金免疫层析方法,为进一步大规模应用奠定了基础。     

水产品中沙门氏菌的分离与血清学鉴定

[目的]探索如何准确并快速地进行水产品中沙门氏菌的血清学鉴定。[方法]将经过VIDAS SLM初筛、API鉴定为沙门氏菌阳性的菌株按照国标方法进行血清学分型鉴定。[结果]从9个水产品样品中分离出9株沙门氏菌,其中沙门氏菌B群3株、C1群4株、D群1株、其他群1株。[结论]用沙门氏菌阳性菌株的营养肉汤增菌液的菌苔沉淀来进行血清学分型鉴定是一种很好的辅助方法,有助于提高沙门氏菌血清学鉴定的效率和准确性。     

针对hly基因快速筛检食品中霍乱弧菌实时荧光PCR方法的研究

[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非O1群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系.以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化.[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性.[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致.实验室间验证结果同实验一致.[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用.     

一株新的沙门氏菌（Salmonella Kunming 68：r：z6）

[目的]对一株从缅甸进口虾中分离的沙门氏茵新血清型的鉴定.[方法]采用常规生化试验和免疫血清凝集素吸收与位相逆转试验及噬菌体裂解试验方法.[结果]该菌生化反应符合肠道沙门氏菌肠道亚种(S.enterica subsp.enterica)定义和能被沙门氏菌O-I噬菌体裂解.免疫家兔所得O和H抗血清经凝集素吸收试验证实该菌具有一个新的O抗原(暂命名为O:68),位相逆转试验证实其抗原式为O:68:r:z6.[结论]该菌是Kauffmann-White表解尚未叙述过的一个新血清型,暂命名为昆明沙门氏菌(Salmonella Kunming).     

GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立

[目的] 建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法.[方法] 利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1512).将2.80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测.[结果] 显色反应良好,条带稳定,检测获得成功.[结论] 其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查.     

八角茴香中的SO2检测干扰及其消除方法

[目的]建立操作便利、结果准确、利于环保的八角中SO2的检测方法.[方法]分别对熏硫和无硫八角采用国标比色法、蒸馏法和AOAC的优化Monier Williams法进行检测,比对检测结果.[结果]八角中的固有成分可与国标比色法的反应试剂生成蓝紫色的物质,此蓝紫色生成物对440～640 nm范围的光波有极强吸收值,在590nm处有一较明显的吸收峰,因而强力干扰SO2和反应试剂生成的紫红色络合物对550nm光波的吸收值;八角中的固有成分经蒸馏汽化冷凝后导向待测液,可与碘标准溶液起反应,对SO2的检测结果有极强干扰,优化Monier Williams法能极有效地排除八角固有成分对检测结果的干扰,优化Monier Williams法检测的结果还表明,亚硫酸氢钠溶液中的SO2可与八角中的固有成分反应生成不能被蒸馏检测出来的稳定结合态物质.[结论]国标比色法不适用于八角茴香中SO2的检测,国标蒸馏法亦不适用于八角茴香中SO2的检测;优化Monier Williams适合于八角中SO2的检测,是极具操作性的很好的SO2检测方法.     

猪伪狂犬病抗体免疫金标快速检测试纸法的建立和应用

应用免疫学原理与胶体金层析技术相结合,采用双抗原夹心法建立了检测猪伪狂犬病抗体水平的"猪伪狂犬病抗体免疫胶体金标快速检测试纸法",该法与美国Idexx公司的猪伪狂犬病ELISA试剂盒同时对16份猪血液或血清进行抗体水平检测,符合率达100%.同时对100份猪血液和对应血清进行检测,结果也相同.试验结果显示,本法与ELISA一样,具有微量、特异、准确等优点,且操作简易,而本方法不需要任何仪器,检测时间短,结果直观,容易判定,适用于基层兽医站、养猪场使用和大面积猪伪狂犬病抗体普查.     

离子色谱法测定乳品中的硝酸盐

[目的]建立准确、简便、快速测定乳品中硝酸盐的方法.[方法]用电导检测-离子色谱法检测乳品中的硝酸盐.以碳酸钠-碳酸氢钠作淋洗液,在样品中先后加入醋酸和氢氧化钠溶液分别脱除蛋白质和脂肪等有机物,直接进样,以优化硝酸盐的离子色谱分离和测定条件.[结果]方法的检出限达0.015mg/kg,线性关系良好,本法测定了婴儿奶粉、孕产妇专用奶粉和鲜牛奶中的硝酸盐,加标回收率分别达94.6%,92.1%,109.6%.[结论]与国标法相比,本法灵敏度提高了100倍,方法简便易行,结果准确.     

纺织品甲醛检测试剂盒研究

[目的]建立纺织品甲醛含量试剂盒检验方法。[方法]采用纳米TiO2显色络合技术,制作不同甲醛含量显色比对图谱,通过比较颜色深浅可快速确定所检验纺织品是否含有甲醛及是否符合标准限量要求。[结果]该项目研制的便携式快速测试复合试剂盒及配套仪器,灵敏度高,检出限较低。[结论]该方法操作便捷,适用于纺织品生产经营企业、质检部门对纺织品甲醛项目的现场快速检测。     

应用荧光PCR方法检测食品中的单核细胞增生李斯特氏菌

[目的]发展一种快速、敏感、特异的荧光PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌.[方法]针对单增李斯特氏菌溶血素基因(hly A),设计特异的引物和TaqMan探针,优化体系,建立荧光PCR检测方法,对该方法的特异性和敏感性进行评价,并且在对188个进出口食品样本的检测中与传统方法进行对比.[结果]经对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株检测,结果显示该方法具有良好的特异性.灵敏度检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h.在实际样本的检测中,检测结果与传统方法结果一致.[结论]该方法能快速、简便和准确地检出单核细胞增生李斯氏菌,具有良好的应用前景.     

FEPAS水平测试中两种致病菌的分离与鉴定

[目的]通过积极参加国际实验室间的技术交流,提高食品微生物检测水平、验证实验室检测能力.[方法]本文对2002年5月至2003年6月广州检验检疫局食品检测中心参加的英国中心科学实验室(CSL)食品微生物学能力验证计划(FEPAS),采用传统生化鉴定与API20E细菌编码鉴定系统相结合的鉴定方法,对沙门氏菌、副溶性弧菌进行分离鉴定.[结果]采用本文方法能准确鉴定出测试样品中的沙门氏菌、副溶性弧菌,水平测试取得满意结果.[结论]通过参加水平测试,表明广州检验检疫局食品检测中心食品微生物检测能力满足FEPAS要求,达到国家水平.     

用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌

[目的]采用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒.[方法]根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线.以副溶血弧菌菌株8株及同源及非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测.同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测.[结果]该方法有良好的特异性8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,其它15株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.9871.直接进行定量检测,则检测低限在102cfu/g;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfu/g.[结论]该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景.     

ELISA与小白鼠生物法检测贝类中麻痹性贝毒的比较

[目的] 通过用酶联免疫(ELISA)与小白鼠生物法对麻痹性贝类毒素(PSP)检测结果的比较研究,选择适合于对贝类毒素进行快速筛选的检测方法.[方法] 应用ELISA技术对贝类产品中PSP进行了检测试验,对10类、52份贝类样品进行了PSP含量的定量检测,同时进行了小鼠生物法检测,以进行比较.[结果] 表明ELISA与小白鼠生物法检测PSP的结果吻合程度很好,但当PSP含量较高时,则结果存在一定差异,可能ELISA方法更适合于检测PSP含量低的样品.[结论] 采用ELISA技术对PSP进行检测,具有检测限低、特异性高及阳性结果与其他方法相一致等优点,非常适合于对贝类毒素进行快速筛选和定量检测.     

水产品中孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒产品的比较和应用选择

目的:对市售4款孔雀石绿和结晶紫残留免疫胶体金快速检测试剂盒的符合性、灵敏度、重复性和适应性进行验证。方法:多种类水产样品重复试验。结果:实验结果表示市售4款试剂盒操作简单,方法各异,但是质量参差不齐,结果差强人意,甚至假阴性和假阳性率居高,通过实验发现只有2款能满足现场检测要求。结论:2款快速检测试剂盒中,其中一款操作更为简便,对人员操作技巧和实验器材的需求较低,通过多次反复多种样品实验验证得出,能满足实验需求,可以推广,但是仅限于检测隐色孔雀石绿。建议:由于市售水产品中孔雀石绿残留免疫胶体金快速检测试剂盒品种繁多,产品质量不一,建议使用前经多次试验再投入大量使用。     

傅立叶红外光谱法快速筛选PVC保鲜膜及增塑剂DEHA

[目的]建立快速、简便的鉴别PVC膜及其增塑剂类别的方法.[方法]以环己酮为溶剂,无水乙醇为沉淀剂,应用溶解-沉淀法进行聚合物与增塑剂的分离,采用红外光谱透射法定性测定聚氯乙烯(PVC)及其增塑剂成分(DEHA).[结果]将分离纯化后的样品与浓缩得到的较纯的增塑剂分别进行红外光谱透射检测,将得到的光谱图进行谱库搜索,结果分别是PVC和DEHA,匹配率分别为92.2%和96.8%.[结论]该法简单、快速、安全、准确.     

高压消解法一次消解测定奶粉中11种金属元素

[目的]找到快速、有效、符合准确测试要求的消解奶粉的方法.[方法]采用全密封的聚四氟乙烯消化罐高温高压消化法.[结果]样品消解只需7～8h,试剂消耗量小,空白值低,无容器吸附、消化过程无沾污,回收完全.经对实际奶粉样品中11种元素进行检测和加标实验,其变异系数为1.38%～4.84%,回收率为92.0%～105%,检测低限能达到要求.[结论]该方法准确快速,符合测定要求.     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试剂盒质量研究

选取3种市售同批次盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒(D、M、A),引入金标读数仪,对其最小检出浓度、灵敏度、特异性、检出限、阳性检出率、假阳性率和假阴性率等方面进行研究,比较3种市售盐酸克伦特罗胶体金免疫层析快速检测试剂盒的质量。结果表明,D试剂盒中的检测卡在检测盐酸克伦特罗标准溶液时产品性能最优,M试剂盒的样品前处理方法和检测卡在猪肉基质中的综合使用效果最优。阴性猪肉加标样本的快速检测结果显示,试剂盒检测结果与金标读数仪器检测结果 100%符合,3种产品的最小检出浓度均小于产品说明书标注的检出限,且灵敏度100%,D、M特异性100%,D、M假阳性率0%,M阳性检出率100%,D、A阳性检出率均大于90%。综合分析,3种试剂盒的准确性、特异性等均较好,阳性检出率、假阴性率均在可接受范围内,其中,M试剂盒产品性能最优,可用于日常生猪屠宰点和农贸市场中猪肉盐酸克伦特罗的初筛。     

4种检测技术对冷冻食品沙门氏菌检测效果的比较

[目的]探讨不同检测技术在冷冻加工食品沙门氏茵检测中的实际应用的适用性.[方法]利用Reveal 抗体夹心技术,Vidas自动酶标免疫测试仪、DNA杂交探针技术和SN常规培养生化技术对4008份加工冷冻产品和11株菌种进行检测.[结果]Reveal测试条阳性数151,阳性率3.77%,无假阴性,假阳性数133;Vidas测试条阳性数27,阳性率0.67%,假阴性数3,假阳性数12;DNA杂交探针试剂盒阳性数18,阳性率0.45%,无假阴性,假阳性数1;SN培养法阳性数15,阳性率0.37%,假阴性数3,无假阳性.[结论] Reveal试剂盒敏感性高,但特异性不强,操作简便,所需材料、设备少、适于现场和多样品批量检验;Vidas自动酶标免疫测试仪有假阴性,说明有漏检可能,SN培养法结果可靠,但耗时长、操作繁琐;DNA杂交探针试剂盒法敏感特异,准确性高,适用于对准确性要求较严行业的检验.     

进口鱼粉蛋白质含量快速检测

[目的]实现快速、简便、连续检测进出口鱼粉中蛋白质含量.[方法]利用近红外透射技术快速、简便、穿透能力较强的特点,初步建立进口鱼粉中蛋白质新的检测方法,包括定标、建模、验证和应用实验等.[结果](1)检测只需几分钟,而且无需制样、称样和消耗化学试剂;(2)与凯氏法相比,其定标标准偏差为1.55%,定标相关系数为0.87;验证标准偏差为1.85%,验证相关系数0.81;定标方程检验F值为14.84,有显著性意义(P<0.01);初步应用的标准偏差为2.01%,相关系数为0.82.[结论]该新方法可对进口鱼粉中蛋白质含量实现快速、简便、连续的检测,尤其适合大批量样品,有很好的应用前景.     

婴幼儿配方奶粉中生物素含量的快速微生物检测方法研究

建立了一种基于微生物法检测婴幼儿配方奶粉中生物素含量的快速检测方法。采用该方法检测生物素时其标准曲线相关系数为0.9997,平行测试的RSD为2.89%-4.92%,加标实验回收率在90.3%-97.3%之间。与传统国标方法相比,该方法操作简单,优化了样品前处理过程,缩短了实验周期,提高了效率。与试剂盒法相比,该方法的准确度和重现性良好,且经济实用,适合在实验室推广应用。